쥐 두뇌에 있는 Microinjections에 대 한 개인화 된 바늘

요약

우리는 여기 석 바늘을 사용 하 여 쥐 두뇌에 있는 microinjection에 대 한 프로토콜을 설명 합니다. 이 바늘 하지 감지 조직 손상을 생산 하 고 깊은 지역에도 안정적인 전달. 또한, 그들은 맞춤된 설계에 의해 연구의 필요에 적응 시킬 수 있다 하 고 다시 사용 될 수 있습니다.

초록

Microinjections 약물 또는 특정 뇌 영역 내에서 독 소의 배달에 대 한 오랜 시간 동안 사용 되었습니다 그리고 더 최근에, 그들은 유전자 또는 세포 치료 제품에 사용 되었습니다. 불행히도, 현재 microinjection 기술 사용 여러 이유로 차선은 강철 또는 유리 바늘: 특히, 철강 바늘 조직 손상이 발생할 수 있습니다 및 대상 지역 누락, 두뇌에 깊이 인하 유리 바늘 구 부 수 있습니다. 이 문서에서는, 우리가 준비 하 고 유용한 기능의 번호를 결합 하는 석 영 바늘을 사용 하 여 프로토콜을 설명 합니다. 이러한 바늘 감지 조직 손상 생성 하지 않는다 그리고, 깊은 좌표를 사용 하는 경우에 원하는 뇌 영역에서 신뢰할 수 있는 전달 되도록 매우 엄격한 되 고. 또한, 원하는 직경의 여러 구멍을 만들어서 바늘의 디자인 맞춤 가능 하다. 여러 구멍 큰 구멍 세포의 주입을 용이 하 게 하는 반면 더 큰 영역 내에서 솔루션의 대용량의 주입을 촉진 한다. 또한, 이러한 석 영 바늘 청소 하 고 절차 비용 효과적 되는 다시 사용 될 수 있습니다.

서론

Microinjections는 특정 뇌 영역에 신경 활동을 조절 하 약리학 활성 화합물의 배달에 대 한 오랜 동안 사용 되어 왔습니다. 그들은 또한, 신경 이벤트 특정 질병, 예를 들면 6-hydroxy-도파민 nigrostriatal 도파민 시스템을 모방 하는 파 킨 슨 병에서의 특성을 모방 하기 위해 특정 신경 인구 근처 독 소를 주입 하 사용 되었습니다. ^{1 , 2} 또는 병 해 시스템³변 하 immunotoxin 192 IgG saporin. 더 최근에, microinjection 절차 실험적인 뇌 장애^4,5의 유전자 또는 세포 치료에 대 한 바이러스 성 벡터 또는 세포 이식 제공 하 사용 되었습니다.

이러한 연구에 사용 하는 바늘의 고전적인 유형의 스테인레스 스틸로 이루어집니다. 비록 간단 하 고 실용적인 사용을, 강철 바늘 문제⁶의 번호가: 그들은 비교적 큰 하 고 손상을 줄 수 있습니다 조직의 혈액-뇌 장벽의 누설 및 이다;의 활성화 또한,....

프로토콜

모든 실험 프로토콜은 동물 실험에 대 한 페라라 대학 윤리 위원회 및 건강의 이탈리아 정부에 의해 승인 되었다. 도착 (동물 연구: Vivo 실험에서 보고¹¹) 지침에 따라 되었습니다.

1입니다. 석 영 바늘의 준비

1. 깨끗 하 고 증류수에 5 분, 에탄올 99%, 5 분 및 5 분 diethyl-에테르에서 그들을 배치 하 여 석 영 모 세관 ( 재료의 표참조)을 소독.
2. 그들이 말리 면 완전히에 적어도 1 시간에 대 한 후드 아래 모세 혈관을 남겨 주세요.
3. 개인의 요구에 따라 충분히, 충분히 얇은 바늘의 생산을 허용 하는 매개 변수에 따라 레이저 끌어당기는 사람을 사용 하 여 바늘을 준비 합니다.
   참고: 우리가 사용 하는 레이저 끌어당기는 사람 ( 재료의 표참조). 당기기를 위한 두 줄 프로그램을 사용 합니다. 첫 번째 줄 (값에 해당 하 필 라 멘 트) 최대 스캔 길이 높은 전력과 아무 당기는 힘을 사용 합니다. 매개 변수이 조합의 내부/외부 대형으로 긴 바늘의 형성을 허용 가장 낮은 확장 속도와 모 세관의 큰 부분을의 용 해를 리드 하 고 정강이 감소. 이 방법에서는, 바늘 높은 기....

결과

우리 쥐 지 마에가 두 클래식, 26 G 무뚝뚝한 끝 및 30 G 베벨 가장자리와 비교 석 바늘 (60 µ M 외부 직경 팁; 한 20 µ M 직경 옆 구멍 유형 C, 그림 1)를 사용 하 여 직접 microinjection에 의해 유도 된 손상 비교 스테인레스 스틸의 바늘 이 목표를 우리는 오른쪽에 실제의 2 µ L를 주입 하 고 얼룩이 지는 Hematoxylin 오신 (그)를 사용 하 여 조직 손상 평가 했습니다 왼쪽 등 쪽 해 마가 각각 사용 하 여 석 영 강철 바늘과, 48 h 주입 후. 우리는 더 나은 주입 감사 다른 바늘에 의해 생산 하는 심각한 기계적 손상 후 초기 시간 포인트를 선택 (시간, 조직 복구 메커니즘 수 무명 초기 손상)⁷.

위에서 설명한 프로.......

토론

이 문서에서 설명 하는 기술은 microinjections 다양 한 목적으로¹²수행 되는 최적화에 대 한 소개 에 설명 된 요구 사항을 충족. 여기에 설명 된 바늘 최소, 본질적으로 감지할 수 없는 수준; 손상을 감소합니다 (구 부 경향이 있는) 유리 바늘으로 분산, 석 바늘은 딱딱한 고 깊은 좌표에도 원하는 뇌 영역의 신뢰할 수 있는 히트를 보장. 또한, 측면 구멍 팁 구멍 뇌 조직에 삽입 하는 동안 차단 되는 경우에 솔루션의 납품을 보장 합니다.

한계와 대안입니다. 높은 융해 점 때문에 석 영 모세는 기존의 끌어당기는 사람, 즉에 뽑아 수 없습니다, 그리고 그들은 비용이 많이 드는 장비에 액세스 해야. 유리 모 세관은 피해 조직으로, 주사 깊은 구조에 대 한 신뢰할 수 있고 더 연약한 덜 (즉, 디자인 측면에서 덜 유연)을 피하고 측면에서 동.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
석영 모세관	Sutter Instruments, Novato, CA USA	Q100-50-10	필라멘트
풀러	없음 Sutter	P2000
마이크로 피펫 보관 용기	World Precision Instruments (WPI), Sarasota, FL, USA	E210
레이저 마이크로 디스섹터	Leica Microsystems, Wetzlar, Germany	LMD6500
Hamilton 주사기	해밀턴 ILS 혁신적인 노동 시스템 GmbH, StŸ tzerbach, Germany	19138-U
Microinfusion pump	Univentor, Zejtun, Malta	모델 864
수동 microinjection 펌프 키트	WPI	Item#: MMP-KIT	키트를 stereotactic 프레임에 안전하게 장착할 수 있도록
드릴	Proxxon	28510 MicroMot 50/E	볼 베어링 구동축, 가변 속도
인공 대뇌 척수 액	토크 리스	3525
바늘 26g 둔기/30g 베벨	해밀턴	26g 무딘 : 19138-U 30G 베벨: 20757
마이크로 톰	라이카, 독일	LEICA RM212RT

정밀