쥐의 Sectioned 아 킬 레 스 힘 줄의 치유 과정에서 수용자 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)의 효과: 방법론 설명

요약

이 프로토콜 아 킬 레 스 힘 줄의 일부를 제거한 후 수용자 혈소판 풍부 혈장 (PRP) 또는 염 분 해결책 주입 되어 쥐에 있는 힘 줄 치유의 평가 과정을 설명 합니다. 힘 줄 치유의 진행은 분석의 다른 종류를 사용 하 여 여러 개의 시간 지점에서 계산 됩니다.

초록

이 문서에서는 PRP 긍정적으로 영향을 미칠 수 힘 줄 치유를 관찰 하는 데 사용 하는 실험 절차를 설명 합니다. 따라 4 주요 단계가 있다: 킬;에서 병 변 유발 PRP를 준비 하 고 주사 (또는 염 분 해결책); 제거 힘; 그리고 수행 평가 biomechanical, 분자, 그리고 조직학. 각 단계에서 모든 절차와 방법을 설명 세부 사항, 그래서 그들은 쉽게 재생 될 수 있다 합니다.

아 킬 레 스 힘 줄 수술 sectioned 5-m m 긴 섹션의 (제거) 되었습니다. 이후에, PRP 또는 염 류 용액 공부 PRP에 힘 줄의 치료에 긍정적인 영향을 주입 했다. (총 120 쥐가이 연구에 사용 되었다) 40 동물의 3 개 그룹 2 하위 그룹으로 세분화 했다: PRP 주사 그룹 및 식 염 수 주입 제어 그룹. 쥐가 증가 하는 시간 포인트 (그룹 a: 5 일;에 희생 했다 그룹 b: 15 일; 그룹 c: 30 일)와 힘 줄이 제거 되었습니다. 90 힘 줄 수술 biomechanical transcriptomic 분석을 수행 하기 전에 테스트 하 고 30 나머지 힘 줄 조직학 분석을 제출 했다.

서론

응고, 염증 성 프로세스 및 혈소판의 면역 변조 역할은 잘 알려진¹입니다. 최근에, 그들은 또한 회복 속성^2,3는 증명 되었습니다. 실제로, 다양 한 cytokines 및 성장 요인 (VEGF, PDGF, TGF B, IGF-난, 그리고 HGF) degranulation 동안 혈소판에 의해 발표. 이러한 성장 요인 홍보 신생, 조직 리 모델링, 그리고 상처 치유 (뼈, 피부, 근육, 힘 줄)². 격리 방법 높은 혈소판 농도 포함 된 혈소판 리치 플라즈마 (PRP)을 생성 centrifuging 혈액 헌 혈 (3 사이 10 시간 기준 농도 혈액). 실제로, 다양 한 PRP 준비 기술 동일한 최종 제품을 제공할 수 없습니다. 지금 까지는,이 문제에 아무 국제 일반 계약이 되었습니다. 전반적으로, PRP 치료 tendinopathy, 발바닥의 근 막 염, 관절염, 등 없앤⁴만성 musculoskeletal 조건에 대 한 매력적인 치료 옵션 일 수 있었다. 그것은 개선 하 고 뼈 임 플 란 트 삽입 후 치유를 가속 구강 수술 및 implantology

프로토콜

배려 및 처리는 동물의 배려를 위한 가이드에 따라 수행 된 실험 동물의 사용 국립 과학 아카데미의에 의해 준비 하 고 출판에 의해 국립 연구소의 건강 (미국). 유럽 및 국가 입법 신중 하 게 따라 했다.

1. 동물 준비

1. 132 2 개월 된 남성 Sprague-Dawley 쥐 320-450 g (120 쥐 실험에 대 한) 및 12 쥐 혈액 샘플링, 그림 1에 대 한 무게를 사용 합니다. Dell¹³을 바탕으로, 각 그룹에 대 한 15 쥐 0.8 (80% 지정된 효과 있으면 통계적 의미를 찾는 기회)의 힘에 대 한 충분 했다.
2. 변화 역을 갖춘 기존 시설에 격리 상태에서 고아 한 장에 모든 쥐를 집. 특히 구매 되는 SPF (특정 병원 체 무료) 쥐와 IVC (개별적으로 통풍이 케이지) 랙, 번 식 선동.
3. 사용 다음 주택 조건: 19-24 ° C에서 온도 범위 상대 습도: 40-60%; 환기: 공기 갱신의 주파수: h; 당 10-15 명암 주기: 12h-12 h.
4. 모든 배우면 장비를 소독 하 고 비친된 침구를 사용 합니다. 체계적으로 감 금 소 안쪽 살 균 종이 쟁반, 수건을 배치....

결과

결과 뜻의 평균 ± 표준 편차로 표현 하 고 분산 분석 (ANOVA)와 비교 했다. 양방향의 ANOVA와 임시 게시 테스트 데 있어, 파라메트릭 테스트, 사용 되었다.

쥐의 비 부상 아 킬 레 스 힘 줄의 파열을 자극 하는 데 필요한 궁극 장력 강도 (UTS)는 42.0 ± 5.7 N (n = 10). 인장 강도 크게 증가 (p < 0.0001) 5 일 후 두 그룹에서. 두 그룹을 비교는 UTS 높았다 PRP 그룹에서 언제 든 지 측정, 특히 15-30 일. Biomechanical 평가 (11.4 ± 5.5 m m² 에 대 한 부상 아닌 힘 줄)을 진행 하기 전에 제거 된 힘 줄의 단면적을 측정 하 여 5 일에 했다 염 분 처리 그룹에서 더 큰 발견 했다. 하지만 하루 15와 30, 단면적 PRP 그룹에서 큰이 염 치료 그룹 .......

토론

혈소판은 프로세스를 치유 하는 힘 줄의 염증 초기 단계에 대 한 필수적입니다. 이러한 혈소판 바인딩 조직이 나 응고 유발 요인에 노출 되는 때 그들은 α과 립에 방류 하는 성장 인자를 발표할 예정 이다. 이 상호 작용으로 인해 세포 외 매트릭스 고분자 synthetized 고 중간 엽 세포 증식. 혈소판에는 또한 신생 및 세포질 감 별 법^6,20을 자극, 혈액 순환 조상 셀에 혈 활동이 있다.

이루어졌다 biomechanical 테스트 테스트용 비보 전 인장 쥐¹⁵킬의 특별히 만든 클램핑 장치를 사용 하 여. Cryo-턱 액체 질소를 추가 하 여 근육의 수 고는 시료의 아래쪽은, 발뒤꿈치 뼈 뼈, 직접 컴퓨터에 고정 됩니다. 그것은 매우 때 근육이 완전히 엄밀한, 그러나 힘 줄은 여전히 유연 인장 시험을 시작 하는 것.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
자일라진(Xyl-M)	VMD	무	마취
케타민(Jé 타민 1000 CEVA)	CEVA 산트에큐트; Animale	무	마취제
부프레노르핀(Vetergé sic Multidosis)	ALSTOE	없음	진통제
iso-Betadine	MEDA-Pharma	없음	소독제
흡수성 원사 Vicryl 6/0	Johnson &
Nembutal	CEVA Santé Animale	none	마취제
파라포름알데히드	Sigma-Aldrich	P6148	조직의 구조를 보존합니다
이소프로판올 100%	VWR	20,922,364
에탄올 95%	VWR	20,823,362
크실렌	VWR	28973.363
파라핀	VWR	LEIC3950.1006
헤마톡실린	Millipore	1.15938.0025	착색제
Eosin	Millipore	1.15935.0100	착색제
Eukitt	Sigma-Aldrich	3989	장착 매체
CaCl2

제 존슨