이 원고는 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월)와 마우스 망막의 비보에 이미징에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 그것은 몇 가지 검색 및 측정 방법 설명 peripapillary 지역에서 망막 신경 절 세포 (RGC)에 초점을 맞추고.
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방법 논문
광학 일관성 단층 촬영: 마우스 망막 신경 절 세포에서 Vivo에서 화상 진 찰
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
망막에 구조 변경 안과 질병의 일반적인 발현 됩니다. 광학 일관성 단층 촬영 (OCT) 그들의 식별에서 비보에있습니다-빠르게, 반복적으로, 그리고 높은 해상도. 이 프로토콜 광섬유 neuropathies (OPN)를 공부 하는 강력한 도구로 마우스 망막에 10 월 영상을 설명 합니다. OCT 시스템은 일반적인 사후 조직학 분석을 간섭계 기반, 비-침략 적 대안 이다. 그것은 망막 엷게 또는 두껍게 등의 변경 내용을 추적 하는 가능성을 허용 하는 망막 두께의 신속 하 고 정확한 평가 제공 합니다. 선물이 Opa1delTTAG 마우스 라인의 예제와 이미징 프로세스 및 분석. 세 가지 유형의 스캔, 정량화 방법으로 두 제안: 표준 및 수 제 캘리퍼스. 후자는 peripapillary 망막에서 사용 하기 위해 최고의 동안 방사형 검사; 더 정확 하 게 되 고, 하는 것이 얇은 구조를 분석 하는 데 좋습니다. 여기에 설명 된 모든 접근 하지만 망막 신경 절 세포 (RGC) 설계는 다른 세포 인구에 쉽게 적응할 수 있다. 끝으로, 10 월 마우스 모델 형질에 효율적 이며 치료 개입의 신뢰할 수 있는 평가 위해 사용 될 가능성이 있다.
서론
10 월 망막 구조1, 시 신경 머리 (ONH) 등의 검사를 용이 하 게 하는 진단 도구입니다. 년 동안 인간2,3, 설치류4,5에서 뿐만 아니라 질병 진행의 신뢰할 수 있는 표시기 되고있다. 간섭계를 사용 하 여 2 µ m 축 해상도 망막 층의 단면 이미지를 만듭니다. 안쪽 층은 망막 신경 섬유 (RNFL), 포함 된 레이어 RGC 축 삭, 신경 절 세포 레이어 (GCL), 주로 RGC 시체를 포함 하 여 뒤. 다음은 내부 plexiform 계층 (IPL), RGC dendrites 바이 폴라, 수평, 그리고 amacrine 세포 축 삭을 만나는 곳입니다. 가로 셀, 함께이 형성 안 핵 층 (INL), 그리고 그들의 돌출 외부 plexiform 레이어 (OPL) 축 삭 포토 리셉터와 연결. 이 포토 리셉터 세포 기관과 외부 핵 층 (ONL), 뒤 및 외부 제한 막 (옴), 내부 세그먼트/외부 세그먼트 라고도 포토 리셉터 계층에서 분리 (IS / OS) 계층. 마지막으로, 마우스 망막에 마지막 관찰 레이어는 망막 안료 상피 (RPE) 및 맥락....
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프로토콜
실험 프로토콜 인 국립 드 라 건강에 의해 승인 되었다 동부 표준시 드 라 검색 médicale (Inserm; 몽펠리에, 프랑스), 유럽 지침과 일치 이며 ARVO 문을 안과 연구에 있는 동물의 사용에 대 한 준수. 랑 그 독 루시 옹 예 윤리 동물 실험 (CEEALR; nuCEEA-LR-12123)의 계약에 따라 실시 됐다.
1. 장비 설치 및 사전 영상 준비
참고: 여기, 10 월 스펙트럼 도메인 (SD) 안과 이미징 시스템 ( 그림 1A)를 사용 하 여 마우스 망막에서 수행 되었다. SD-10 월 장치 설치류 맞춤 단계 (RAS) ( 그림 1B)는 기지와 동물 이미지 마운트 (AIM)의 구성 됩니다. 기본은 컴퓨터, OCT 엔진, SD 10 월 조사 및 마우스 전용 렌즈 포함 됩니다. 프로브는 Z-번역기를 포함 하는 목표에 거치 된다. RAS는 마우스와 X-및 Y-번역, 테이블 덕분에 올려지고, 회전 수 있는 카세트 위치와 이동식 물린 바 코 밴드와 함께 사용 됩니다. 비록 후자 또한 할 수 있습니다 오픈 소스 이미지 프로세싱 프로그램 제조업체에서 제공 하는 소프트웨어 수집 및 ....
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결과
SD-10 월 기술 망막 상상 및 두께 조직학, 비교 하지만 빠른 분석과 더 자세한 (그림 3) 수 있습니다. 제시 wildtype C57Bl/6 마우스, 비록 SD 10 월 스캔의 품질 (그림 3A, 오른쪽)은 (그림 3A, 왼쪽) 망막 횡단면의 이미지의 좋은, 그것은 더 많은 레이어 (예: 옴)을 시각화. 또한, 그것은 일 또는 조직학 분석을 위한 주 대 마우스 준비를 포함 하 여 약 40 분 걸립니다. 마지막으로, 처리 및 등 haematoxylin, 오신, 사프란, 조직을 손상 하 고 잘못 된 데이터의 수집을 유발 수 있습니다, 얼룩이 지기 요구 하지 않는다. 10 월에서 쉽게 측정 망막 레이어 포함 RNFL/GCL, IPL, INL, OPL, ONL, IS / OS, RPE, 및 C (<.......
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토론
OCT 시스템은 비-침략 적 vivo에서 이미징 방법, 고해상도 망막 교차 section 같은 검사를 제공 합니다. 따라서, 그것의 주요 이점은 정기적으로 마우스 모델에 인 간에 게 적용 하는 프로토콜을 바꾸어 좋은 기회와 상세한 분석을 위한 잠재력 이다.
Opa1delTTAG 돌연변이 생쥐의 예에서는 SD-10 월 DOA 이상9의 추가 탐사에 대 한 허용 되는 RNFL 및 GC 복잡 한 레이어 두께의 증가 보여준 결과. 그것은 하지 했 조직학 분석만 가능. 비교에서는, 조직학 환상 또는 방사형 10 월 검사와 달리 전체 망막을 시각화 하는 가능성을 제공 하지 않습니다. 또한, 그것은 더 많은 시간과 비용이 많이 드는 여러 시간 점 연구에 동물의 증가 수를 고려입니다. 사실, SD-10 월 DOA, 뮐러 셀9에서 망막 세포 신형 씌 웠 어 요 .......
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
이 작품 Inserm, 몽펠리에 대학교, 망막 프랑스, 연합 국가 des Aveugles에 의해 지원 되었다 외 Déficients Visuels (UNADEV), 협회 증후군 데 볼 프 람, Fondation 부 라 검색 Médicale, Fondation 드 프랑스, 그리고 우수의 실험실 EpiGenMed 프로그램입니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Mice | |||
| Opa1delTTAG 몽 | 펠리에의 신경과학 연구소, INSERM UMR 1051, 프랑스 | - | Opa1 넉인 마우스 운반 C57Bl6/J의 OPA1 c.2708_2711delTTAG 돌연변이 background |
| Name | >Company | 카탈로그 번호 | Comments |
| Equipment | |||
| EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System | Bioptigen, Leica Microsystems, Germany | - | 스펙트럼 도메인 광학 간섭 단층 촬영 시스템 |
| EnVisu R2200 SD-OCT 이미징 시스템 소프트웨어 | Bioptigen, Leica Microsystems, | Germany-OCT | 수집 및 분석용 소프트웨어 |
| ImageJ 1.48v | Wayne Rasband, National Institutes of Health, USA- | 분석용 소프트웨어, 두 개의 hommade 매크로를 다운로드하고 설치해야 합니다 http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Retina_Tool | |
| 자기 조절 가열판 | Bioseb, 프랑스 | BIO-062 | 저체온증에 대한 보호 |
| Name | Company | 카탈로그 번호 | Comments |
| Supplies | |||
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| 듀얼 엔드 코튼 팁 애플리케이터 | Essence of Beauty, CVS Health Corporation, USA-Gel | application | |
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| Name | Company | 카탈로그 번호 | 코멘트 |
| >시약 및 약물 | |||
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| Mydriaticum 0.5% | Laboratoires Thé a, 프랑스 | 3397908 | 눈 확장 |
| Cebesine 0.4% | Laboratoire Chauvin, Bausch& Lomb, France | 3192342 | 국소 마취 |
| Imalgene 1000 | Merial, France/CentraVet, France | IMA004 | 전신 마 |
| Rompun | Bayer Healthcare, Germany/CentraVet, France | ROM001 | 전신 마취, 진통, 근육 이완 |
| NaCl 0.9% | Laboratoire Osalia, France | 103697114 | 생리학적 세럼 |
| Systene Ultra | Alcon, Novartis, USA- | 눈의 수분 | |
| GenTeal'Alcon | , Novartis, USA- | 빛의 굴절 및 불투명도를 최소화하는 안과 젤 | |
| Aniospray Surf 29 | Laboratoires Anios, France | 59844 | 소독제 |
참고문헌
- Drexler, W., Fujimoto, J. G. State-of-the-art retinal optical coherence tomography. Prog Retin Eye Res. 27 (1), 45-88 (2008).
- Grenier, J., et al. WFS1 in Optic Neuropathies: Mutation Findings in Nonsyndromic Optic Atrophy and Assessmen....
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재인쇄 및 허가
