인플루엔자 A 바이러스 (IAVs)는 중요 한 인간의 호흡기 병원 균. IAVs pathogenicity 이해 하 고 새로운 백신 접근의 전 임상 시험 수행 인간의 생리를 흉내 낸 동물 모델은 필요. 여기, 우리가 IAV pathogenesis, 체액 성 반응과 감염 마우스 모델을 사용 하 여 백신 효능을 평가 하는 기법을 설명 합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
인플루엔자 바이러스 500000 이상의 죽음 전세계1 원인과 관련 된 직접 의료 및 입원 비용 및 직장 결근2를 고려 하 고 혼자 미국에서 십억 12-14 달러의 연간 비용. 동물 모델은 바이러스 성 병 인, 호스트 병원 체 상호 작용, 면역 반응, 평가에 독감 바이러스 (IAV) 연구에 중요 한 그리고 현재 및 새로운 백신의 효능 antivirals 뿐만 아니라 접근. 마우스 유리 작은 동물 모델 때문에 그들의 면역 시스템은 진화론 인간에서 발견 비슷합니다, 그들은 유전으로 동일한 과목으로 상용 공급 업체에서 사용할 수 있습니다, 그리고 평가에 악용 될 수 있는 여러 변종이 있다 감염, 유전으로 그리고 그들은 상대적으로 저렴 하 고 조작 하기 쉬운. 기도 통해 인간 IAV 감염 정리를 마우스는 먼저 적절 한 biosafety 제약 아래 감염 IAVs와 intranasal 접종 전에 마 취. 감염 후 IAVs의 병 인 (몸 무게 손실) 병 적 상태와 사망률 (생존) 매일 모니터링 하 여 결정 됩니다. 또한, 바이러스 성 병 인도 위 (비 강 점 막) 또는 감염 된 쥐의 낮은 (폐) 호흡기 바이러스 복제를 평가 하 여 평가할 수 있습니다. IAV 감염 시 체액 응답 비-침략 적 출혈 및 이차 항 체 검출에 의해 급속 하 게 평가 될 수 분석 실험 목적 총의 존재를 검출 하거나 항 체를 중화. 여기, 우리는 일반적인 방법을 설명 intranasally 생쥐를 감염 하는 데 사용 (도)와 IAV pathogenesis, 체액 성 면역 반응 및 보호 효능 평가.
서론
IAVs 엔벌로프된 바이러스 Orthomyxoviridae 가족3으로 분류 되는. 그들은 부정적인 극성3와 8 개의 단일 가닥 RNA 분자를 포함. 인간에서는, IAVs 소설은 바이러스가 인간의 인구4에 소개 될 때 계절 전염병과 중요 한 결과의 가끔 전염병 발생할. 또한, 계절 IAVs 매우 고 빠르게 전송 됩니다 모든 년2,5는 높은 경제 손실 전세계 생산 인간 사이. IAV 증상은 기침, 코 막힘, 발열, 불쾌, 두통, 거식 증과 근육 통, 하지만 바이러스 또한 immunocompromised 환자6에서 더 심각한 질병을 일으킬 수 있다. 사실, 세계 보건 기구 (WHO)는 계절 독감 바이러스 원인 300000-500, 000 명 전세계 모든 년1계산 합니다. 현재 인플루엔자 예방 및 인 간에 있는 치료에 대 한 식품의 약 청 (FDA)에 의해 승인 된 약물의 두 종류가 있다: 응집 (나) 저 해제 (예를 들어, oseltamivir) 및 ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
여기에 설명 된 모든 동물 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)와 로체스터의과 및 치과 대학에서 기관 Biosafety 위원회 (IBC)에 의해 승인 및 준수 와 관리 및 국가 연구 위원회 22의 실험실 동물의 사용을 위해 가이드에 있는 권장 사항. 시설 및 물고기 및 사단의 실험실 동물 약의의 대학 및 치과의 프로그램 AAALAC 국제 공인 하 고 주법, 연방 법령 및 국립 보건원 (NIH) 정책을 준수 합니다. 비슷한 요구 사항이이 원고에 설명 된 동물 프로토콜을 준수 하는 각 기관에 적용 한다.
1. 작은 척 추가 있는 동물 사용의
참고: 적절 한 개인 보호 장비 (PPE)는 마우스 작업에 필요한. 최소 요구 사항을 포함 머리 모자, 마스크와 장갑, 신발 커버, 일회용 작업복.
- IACUC 프로토콜에 따라 케이지 당 5 마우스의 최대 배치. 죽은 동물을 안락사 (두 번째는 물리적 방법 이어야 함)의 두 가지 방법으로 마우스를 안락사 IACUC 프로토콜 다음.
참고: IAV는 병 적 상태와 사망률 평가 실험에서 초기 체중의 20%를 잃은 마우스 실험 끝점에 도달 했습니다 간주 됐다 그리고 CO 2, 그리고 자 궁 경부 ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
바이러스 성 병 인 쥐에서의 특성
IAV의 병 인은 병 적 상태와 사망률의 감염에 의해 발생 관련이 있습니다. 이러한 두 매개 변수 마우스에서 쉽게 계산 될 수 있습니다: IAV 병 적 이며 감염 된 쥐에 있는 몸 무게 손실과 관련 된 생존의 비율 (그림 1) 사망률을 나타낼 것 이다. 몸 무게와 IAV 감염 된 쥐에 있는 생존은 일반적으로 모니터링 매일 감염8,9,,1029후 적어도 2 주 동안. 가져온 생존 데이터 MLD50 리드와 Muench
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
IAV의 마우스 모델 IAV pathogenesis, immunogenicity 및 보호 효능의 학문 vivo에서 널리 사용 됩니다. 쥐의 작은 크기 쉽게 그들을 조작 하 고 흰 족제비 또는 기니 돼지 등 다른 동물 모델에 비해 저장. 또한, 동물 비용 측면에서 용이성, 주택 및 재생 그들의 사용에에서 허용 전 임상 예방 접종 시험 동물의 다 수 필요 하다. 특히, 마우스에서 사용 된 이후 여러 연구 분야, 몇몇 분자 되며 면역학 murine 시 약 사용할 수 IAV 연구에 대 한 그들의 사용을 촉진 하기 위하여. 최소 호스트 변화와 진화론 비슷한 면역 시스템의 존재에 존재 하는 또한, 인 간에 게 그들 IAV 연구에 대 한 강력한 작은 동물 모델. 마지막으로, 호스트 바이러스 성 단백질 상호 작용의 연구 및 바이러스 성 병 인에 그들의 기여는 현재 코 쥐에 접근에 의해 가능. 그러나, IAV 연구에 대 한 마우스를 사용 하 여 여러 가지 이점을 옆에 그들은 유용 하지 않습니다 IAV 전송 연구. 그러므로, 흰 .......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
LM-S 실험실에서 인플루엔자 바이러스에 대 한 연구는 부분적으로 뉴욕 인플루엔자의 우수 센터 (NYICE), 인플루엔자 연구 및 감시 (CEIRS)의 NIAID 센터의 회원에 의해 자금. 원고 수정에 그녀의 지원에 감사 웬디 베이츠 하 고.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Madin-Darby 송곳니 신장 (MDCK) 상피 세포 | ATCC | CCL-34 | |
| 6-8 주 된 암컷 C57BL / 6 마우스 | 국립 암 연구소 (NCI) | 01XBE | |
| 터키 붉은 blod 세포 | Biolink Inc | Store at 4 ° C | |
| 둘베코' s 변형 된 독수리' s 매체 (DMEM) | Corning Cellgro | 15-013-CV | Store at 4 ° C |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Seradigm | 1500-050 | -20 °에 보관; C |
| 페니실린/스트렙토마이신/L-글루타민 (PSG) 100x | Corning | 30-009-CI | -20 °에 저장; C |
| 페니실린/스트렙토마이신 (PS) 100x | Corning | 30-00-CI | -20 °에 저장; C |
| Bovin 알부민 용액 (BA) | Sigma-Aldrich | A7409 | 4 °에 저장; C |
| Bovin 혈청 알부민 (BSA) | Sigma-Aldrich | A9647 | 4 °에 저장; C |
| Tosylsulfonyl phenylalanyl chloromethyl ketone (TPCK) 처리 트립신 | Sigma-Aldrich | T8802 | -20 °에 저장; C |
| 중립 완충 포르말린 10% | EMD | 65346-85 | RT |
| Triton X-100 | J.T.Baker | X198-07 | RT |
| 단클론 항체 항-NP 인플루엔자 A 바이러스 HB-65 | ATTC | H16-L10-4R5 | -20 °에 저장; C |
| Polyclonal 토끼 항 마우스 면역 글로불린 / FITC | Dako | F0261 | 4 °에 저장; C |
| ECL 안티 마우스 IgG, 양 고추 냉이 과산화 효소 연결 전체 항체 | GE Healthcare | LNA931V / AG | Store at 4 ° C |
| TMB 기판 세트 | BioLegend | 421101 | 4 °에서 저장; C |
| Vmax 운동 플레이트 리더 | 분자 장치 | ||
| Dounce 조직 분쇄 | Thomas Scientific | 7722-7 | |
| 수용체 파괴 효소, RDE (II) | Denka Seiken Co. | 370013 | -20 °에서 보관하십시오. C |
| Crystal Violet | Fisher Scienctific | C581-100 | RT |
| 96-well 세포 배양 플레이트 | Greiner Bio-one | 655-180 | |
| 세포 배양 접시 100mm | Greiner Bio-one | 664-160 | |
| Nunc MicroWell 96-Well Microplates | Thermo Fisher Scienctific | 269620 | |
| Nunc 96-Well 폴리스티렌 원추형 바닥 MicroWell 플레이트 | Thermo Fisher Scienctific | 249570 | |
| Puralub Vet 연고 | Dechra | 9N-76855 | |
| 형광 현미경 | Olympus | Olympus IX81 |
참고문헌
- Girard, M. P., Cherian, T., Pervikov, Y., Kieny, M. P. A review of vaccine research and development: human acute respiratory infections. Vaccine. 23 (50), 5708-5724 (2005).
- Arnold, S., Monto, M. D. Epidemiology and Virology of Influenza Illness. Am J Manag Care. 6
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
