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방법 논문

종양의 유도 및 진단

15.3K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/55901

⸱

2017년 7월 25일

 , 
1Structural Biology Center, National Institute of Genetics and Department of Genetics, School of Life Science, SOKENDAI, 2Graduate School of Media and Governance, Keio University

이 논문에서

요약

Drosophila imaginal disc epithelia의 모자이크 클론 분석은 종양 형성의 유전 및 세포 메커니즘을 연구하는 강력한 모델 시스템입니다. 여기에서는 GAL4-UAS 시스템을 사용하여 Drosophila wing imaginal discs에서 종양을 유도하는 프로토콜을 설명하고 종양 표현형을 분류하는 진단 방법을 소개합니다.

초록

암의 초기 단계에서, 형질 전환 된 돌연변이 세포는 세포 학적 이상을 보이고 통제되지 않은 과증식을 시작하며 점차적으로 조직 구성을 붕괴시킵니다. Drosophila melanogaster 는 종양 형성의 유전 및 세포 메커니즘을 연구하기 위해 암 생물학에서 대중적인 실험 모델 시스템으로 부상했습니다. 특히 Drosophila imaginal disc (애벌레의 상피 형성)를위한 유전 도구는 인간 상피 세포의 초기 단계와 유사한 상황 인 정상 상피 조직 내에서 형질 전환 된 종양 세포의 생성을 가능하게합니다. 그러나 Drosophila wing imaginal disc의 종양 발생에 관한 최근의 연구에 따르면, 종양 발생은 조직 고유의 세포 구조와 국소 미세 환경에 달려있어 상상적으로 종양 표현형을 평가할 때 종양 형성 자극에 대한 영역 특이성 감수성을 고려하는 것이 중요하다는 것을 알 수있다 디스크. 종양 진행의 표현형 분석을 용이하게하기 위해GAL4-UAS 시스템을 이용하여 날개 상상 디스크에서 종 양성 종양을 유도하는 유전자 실험 프로토콜을 설명합니다. 우리는 상피 성 상피에서 유도 된 클론 병변의 표현형을 분류하기위한 진단 방법을 소개한다. 종양 진행의 다양한 단계 (과형성, 이형성증, 신 생물 등)를 구분하기위한 분명한 분류 방법은 이전에 기술되지 않았다. 이러한 방법은 Drosophila의 여러 기관에서 종양 phenotypes의 클론 분석에 널리 적용 할 수 있습니다.

서론

상피 조직은 발달 및 세포 회전율을 통해 조직을 유지할 수있는 현저한 항상성을 지닌 고도로 조직화 된 시스템입니다. 그러나이 강력한자가 조직 시스템은 종양 발달 중에 점차적으로 혼란을 겪습니다. 종양 발달 초기에, 종양 유전자 활성화 또는 종양 억제 유전자 불 활성화로 인해 발생하는 개개의 돌연변이 세포가 상피층 내에서 출현한다. 이 형질 전환 된 "종양 세포"가 억제 환경을 피하고, 상피 조직을 파괴하고, 제어되지 않은 증식을 시작할 때, 종양 형성이 발생합니다 1 . 지난 수십 년 동안 유전학 및 분자 생물학 분야의 탁월한 기술 발전은 암 연구에서 눈부신 발전을 이루었습니다. 특히, FLP-FRT (flippase recombinase / flippase recombinase 표적) 유사 분열 재조합과 같은 Drosophila melanogaster 에서 유 전적으로 모자이크 분석 도구를 사용한 최근의 연구2 및 플립 - GAL4 - UAS (업스트림 활성화 시퀀스) 시스템 3 , 종양의 형성과 전이에 관련된 유전자 메커니즘을 이해하는 데 크게 기여했습니다 4 , 5 , 6 .

치명적인 자이언트 애벌레 ( lgl ), 큰 디스크 ( dlg ) 및 낙서 ( scribble )와 같은 보존 된 Drosophila 종양 억제 유전자 그룹에 대한 연구는 상피 조직 손실과 종양 발달 사이의 중요한 관계를 강조했습니다. apical-basal cell의 극성과 상피 조직에서의 세포 증식의 조절 7 . Drosophila imaginal disc는 일반적으로 단층 상피 세포이지만,이 3 가지 유전자 중 homozygous 돌연변이는 세포가 구조와 극성을 잃게하고,overproliferate, rentiate 궁극적 인접 조직 7 융합 다층 비정질 덩어리를 형성한다. 마찬가지로, 포유 동물에서 이들 유전자의 파괴는 악성 종양의 발병과 관련이있다 8 , 9 . 돌연변이 조직에 의해 나타나는 종양 표현형은 보존, 종양 종양 억제 유전자 (nTSGs)와 같은 세 가지 유전자의 분류 7, 8로 이어졌다. 그러나 homozygous nTSG 돌연변이 세포가 FLP-FRT 매개 성의 유사 분열 재조합을 사용하여 야생 형 상상 원판을 개발할 때 산발적으로 생성되면 c-Jun N-terminal kinase (JNK) 의존성 세포 사멸을 통해 돌연변이 세포가 조직에서 제거됩니다 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 압출 15 , 16 , 또는 이물질에 의한 황산 화 및 식균 작용 17 . 이 유 전적으로 모자이크 상피 세포에서는 세포 경계가 클로닝 경계에 위치한 nTSG 돌연변이 세포에서 주로 검출되며, 이는 인접한 정상 세포가 nTSG 돌연변이 세포의 세포 사멸을 유발한다는 것을 의미합니다. 10 , 11 , 12 , 18 . 포유 동물 세포에 대한 최근의 연구에 따르면 전구 세포 종양 세포의이 세포 경쟁 의존적 제거가 암에 대한 진화 적으로 보존 된 상피 세포 방어 기작임을 확인했다 19 , 20 , 21 , 22 , 23 .

그러나 Drosophila imaginal discs에 대한 최근 연구에서 모자이크 nTSG-knockdown clone은 종양의 종양을 특이 적으로 유도한다는 것을 보여 주었다날개의 상상의 디스크의 IC 영역 16 . 초기 종양 형성은 말초 "힌지"영역에서 항상 발견되었고 날개 디스크 상피의 중앙 "파우치 (pouch)"영역에서는 관찰되지 않았으며, 이는 nTSG- 녹다운 세포의 종양 형성 잠재력이 국소 환경에 의존한다는 것을 암시한다. 중앙 파우치 지역은 전립선 종양 세포가 이형성 과증식을 나타내지 않는 반면 말초 경첩 부위는 "종양 핫스팟" 16 처럼 행동하는 "종양 냉점"으로 기능합니다. "coldspot"파우치 영역에서 nTSG- 녹다운 세포는 기저부로부터 박리되어 세포 사멸을 겪습니다. 대조적으로 "핫스팟"힌지 셀들이 기저 측면에 견고한 골격 구조의 네트워크를 갖고, nTSG-녹다운 세포는 상피의 선단 측으로부터 박리 및 발암 성 과증식 (16)을 시작. 따라서, 상상의 디스크에서 종양 phenotypes의 분석은주의 consin 필요합니다종양 형성 자극에 대한 부위 특이 적 감수성의 저하.

여기, 우리는 정상 날개 디스크 상피에서 nTSG - knockdown 세포가 생성되는 GAL4 - UAS - RNAi 시스템을 활용하여 초파리 날개 imaginal 디스크에 종양 형성을 유도하는 프로토콜을 설명합니다. 이러한 실험 시스템이 암의 초기 단계를 연구하는 데 유용하지만 상상 디스크 상피 세포에서 종양 진행 단계를 평가하는 명확한 분류 방법은 이전에 명확하게 설명되지 않았습니다. 따라서 우리는 또한 날개 원발성 상피 세포에서 유래 된 전 종양의 클론 성 표현형을 3 가지 범주로 분류하는 진단 방법을 제안한다 : 증식 (증가 된 증식으로 정상 출현하는 세포의 과도한 수의 축적), 이형성증 (비정상적으로 나타나는 전암 조직 세포) 및 신 생물 (비정상적인 모양 및 비정상적인 증식 패턴을 갖는 세포로 구성된 양성 또는 악성 종양).

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프로토콜

1. 십자가 비행 및 유도 유도

  1. 처녀 파리를 수집하기 전에 유리 병에서 모든 파리를 12 시간 안에 제거하십시오.
  2. CO 2 가스를 주입하고 파리를 CO 2 플라이 패드 위에 놓아 바이알의 파리를 마취시킵니다.
  3. CO 2 플라이 패드의 10 - 20 명의 처녀 암컷과 10 명의 수컷을 신선한 유리 병으로 옮기고 25 ° C에서 1 일 동안 품어 라.
  4. 이들 파리를 신선한 유리 병에 옮기고 25 ° C에서 12 시간 동안 품어 낸다.
    참고 : 처녀 암컷은 첫날에 충분한 알을 낳지 않으므로 첫 번째 약병을 폐기하십시오.
  5. 인핸서 GAL4 라인 들어, 성인 파리를 제거하고 25 분 해부 때까지 바이알을 품어.
  6. 플립 아웃 GAL4에 의해 모자이크 클론의 유도에 대한 성인 파리를 제거하고 25에서 2 ~ 4 일 동안 유리 병을 품어 ° C. 열 충격 이전의 배양 시간은 실험 목적에 달려있다. 난자 채취 2 일 후 열충격 (AED)은 미성숙 한 두 번째 날에 모자이크 클론을 생성한다상상 상피를 형성한다. 3 또는 4 일 후 열 충격은 분화 된 조기 - 중반 - 셋째 inst 상상 세포에서 모자이크 클론을 생성합니다.
    참고 : 종양 생성 성 표현형에 대한 열 충격 타이밍의 변화를 조사하는 것이 중요합니다.
  7. 플립 아웃 GAL4에 의한 모자이크 클론의 유도를 위해 25 ℃에서 2-3 일 동안 배양 한 후 10-45 분 동안 37 ℃의 수조에 침지시켜 바이알을 가열 충격을가한다.
    참고 : 각 실험에서 열 충격 시간, 시간 및 배양 시간에 대한 정보는 그림 범례에 표시되어 있습니다.

2. 애벌레의 해부

  1. 형광 입체 현미경하에 적절한 형광 마커 ( 예 : EGFP)에 의해 나무 막대기 또는 무딘 집게와 genotype 그들 방황 셋째 instar 애벌레를 수집하고 PBS (인산염 완충 식염수)와 해부 접시에 그들을 놓으십시오.
  2. 2 ML 플라스틱 전송 pipettes와 pipetting하여 PBS에 애벌레를 씻으십시오.
  3. 하나의 집게로 유충의 중심을 꼬집어 다른 집게로 반으로 몸을 찢어.
  4. 하나의 집게로 앞쪽 절반의 입 갈고리를 집어 넣고 다른 집게로 몸쪽으로 입을 밀어 내면 몸을 밖으로 내 보냅니다.
  5. 타액선과 같은 불필요한 물질이나 집게로 지방을 제거하십시오.

3. 고정 및 항체 염색

  1. 1.5 ML 플라스틱 튜브에 유충 본문 (상상의 날개 디스크를 포함하여)의 해부 전방 절반을 전송하고 부드럽게 회전과 어둠 속에서 실온에서 10 분 수정 솔루션 (PBS에 4 % 포름 알데히드) 1 ML에 수정.
    주의 : 포름 알데히드는 독성이며 발암 가능성이 있습니다. 피부 접촉을 방지하기 위해 보호 장갑 및 의복을 착용하십시오.
    참고 :이 부분에서는 다르게 표시되지 않는 한 어두운 곳에서 실온에서 nutator를 사용하여 모든 단계를 수행합니다.
  2. 수정 솔루션을 제거하고 버립니다. 조직을 1 mL의 PBT (0.3 % TritPBS 중 X-100)로 15 분씩 각각 3 회 세척한다.
  3. PBT를 제거하고 실온에서 1 시간 동안 또는 4 ℃에서 밤새도록 블로킹하고 절식하기 위해 PBTG (PBT 중 0.2 % 소 혈청 알부민 및 5 % 정상 염소 혈청) 1 mL를 첨가한다.
  4. PBTG를 제거하고 PBTG로 적절히 희석 한 1 차 항체 용액을 첨가하고 ( 재료 표 참조) 4 ° C에서 밤새 숙고시킨다.
  5. 1 차 항체 용액을 제거하고 PBT 1 mL로 각각 15 분씩 세 번 세척하십시오.
  6. PBT를 제거하고 PBTG (1 : 400)로 적절히 희석 한 2 차 항체 용액을 첨가한다. 실온에서 2 시간 동안 또는 4 ℃에서 밤새 누 ate다.
  7. 2 차 항체 용액을 제거하고 각각 15 분 동안 PBT 1 mL로 조직을 두 번 씻는다.
  8. F - 굴지를 얼룩이려면, PBT를 제거하고 PBS (1:40)에 적절히 희석 Phalloidin 솔루션을 추가합니다. 그런 다음 20 분 동안 타다. Phalloidin 용액을 제거하고 PBT 1 mL로 각각 15 분씩 두 번 세척하십시오.
  9. 핵 DNA를 counterstain하려면 PBT를 제거하고 DAPI (4 ', 6 - diamidino - 2 - phenylindole) 솔루션 (PBS에 0.5 μg / ML DAPI)을 추가합니다. 그런 다음 10 분간 타다.
    주의 : DAPI는 발암 가능성이 있습니다. 피부 접촉을 방지하기 위해 보호 장갑 및 의복을 착용하십시오.
  10. DAPI 용액을 제거하고 각각 15 분 동안 PBT 1 mL로 두 번 조직을 씻으십시오.
  11. 실온에서 10 분 동안 PBS 1 mL에서 한번 씻어 낸다.
  12. PBS를 제거하고 미리 장착 매체로 100 % 글리세롤 500 μL를 추가합니다.

4. 현미경 슬라이드에 장착

  1. 2 ML 플라스틱 전송 피펫을 사용하여 현미경 슬라이드에 스테인드 조직을 놓으십시오.
  2. 집게와 다른 현미경 슬라이드에 장착 매체의 방울로 조직을 전송합니다.
  3. 하나의 집게로 해부 조직의 끝을 잡고 다른 집게로 두뇌와 눈 antennal 디스크를 당겨.
    참고 : 해부 된 뇌를 날개의 상상 디스크 근처에 두도록하십시오.. 두뇌는 coverslip가 날개 imaginal 원판을 분쇄하는 것을 막는 플래트 홈으로 작동합니다.
  4. 날개 imaginal 디스크를 분리하기 위해 하나의 집게로 해부 조직의 끝을 누르고 부드럽게 몸 포획 벽을 긁고 다른 집게로 디스크를 찢습니다.
    참고 : 날개가있는 상처 원판을 찾기가 어려우면 후방에서 앞쪽으로 기관을 떼어냅니다. 윙 상상의 원판은 기관에 붙어 있습니다.
  5. 부드럽게 coverslip과 매니큐어와 인감으로 imaginal 디스크를 커버; 4 ° C에서 보관하십시오.

5. 공 초점 현미경

  1. 발광 파장 범위의 레이저 강도, 게인, 오프셋, 주사 속도와 화상 사이즈 (24)를 포함하는 공 초점 레이저 주사 현미경으로 설정 화상 획득 파라미터를 이용하여 공 초점 화상을 취득.
    참고 : 이미지 획득 설정에 대한 자세한 절차는 각 현미경 제조업체에서 제공하는 사용 설명서를 참조하십시오.
  2. 단일 공동 촬영전체 날개 디스크의 초점이 맞지 않는 부분에 20X 대물 렌즈를 사용하십시오.
  3. 40X 또는 60X 렌즈를 사용하여 0.5 - 1.0μm의 스텝 크기로 z 스택 스캐닝으로 3 차원 이미지를 획득하십시오.
    참고 : 고해상도로 세포 표현형을 분석하려면 이미지 크기가 512 x 512 픽셀보다 커야합니다.

6. ImageJ를 이용한 이미지 분석

  1. 공 촛점 z- 스택 이미지를 수집하고 분석하기 위해 생물 이미지 분석 (https://fiji.sc/) 25 에 초점을 맞춘 오픈 소스 ImageJ 소프트웨어 인 피지를 사용하십시오.
  2. 수직 섹션을 얻으려면 ImageJ에서 z 스택 이미지를 열고 "Image / Stacks / Reslice"메뉴 항목을 선택하십시오.
    참고 : Reslice 메뉴에서 XZ 축 또는 YZ 축을 선택할 수 있습니다. 수직 단면은 z- 스택 이미지에 직선이나 직사각형을 그리면 임의의 방향으로도 얻을 수 있습니다.

7. 종양의 진단

  1. 수직을여십시오.하나의 세트의 z- 스택 이미지로부터 얻어진 단면 (XZ 또는 YZ 축)을 분석하고 형태 학적 표현형 및 항체 염색을 분석한다.
  2. 종양 phenotypes의 진단을 위해, 주로 다음 세 가지 포인트에 초점을 맞추고 있습니다 : (1) 세포 덩어리 (knockdown clones 포함)가 주요 상피층에서 벗어나는 경우, (2) junctional 단백질의 세포 내 위치가이 세포 덩어리에서 변형되면 , 및 (3)이 세포 덩어리의 직경이 4 세포보다 큰 경우.
  3. 그림 1에 설명 된 순서도에 따라 종양 표현형을 분류합니다.

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결과

Drosophila wing imaginal disc에서 RNAi 매개 된 nTSG-knockdown에 의해 실험적으로 유도 된 종 양성 종양을 확인하기 위해 3 가지 다른 GAL4 드라이버를 사용하여 lgl 또는 scrib에 대한 UAS-RNAi 를 발현 시켰다 : (1) sd-GAL4 . 힌지 영역 ( 그림 2 및 그림 3A )에서 날개 파우치 및 마일드 표현. (2) 등 지느러미 내측 배의 두 영역에서 강력한 발현, 하나의 앞쪽 - 외측 영역에서의 약한 발현 및 복부 - 뒤쪽 도메인에서의 약한 발현을 포함하여 힌지의 하위 도메인을 유도하는 upd-GAL4 ( 도 2

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토론

GAL4-UAS 시스템은 초파리 (26) 내의 표적 유전자의 발현을위한 가장 강력한 유전 적 도구이다 크게 생체 4 종양 세포 유도 분석을 용이하게한다. 이 시스템은 변형 된 종양 세포가 정상 상피 세포로 둘러싸인 인간 암의 초기 단계와 매우 유사한 상황 인 야생형 상피 조직 내 종양 억제 유전자의 knockdown 또는 종양 유전자의 과발현을 나타내는 클론의 생성을 가능하게한다. GAL4 인핸서 - 트랩 라인 또는 Janelia GAL4 라인 27 과 같은 인핸서 서열에 의해 조절되는 GAL4 드라이버 라인은 고유하고, 시공간적으로 제한된 발현 패턴을 갖는다. 따라서, 이러한 enhancer-GAL4 계통은 제한된 상피 원판에서 종양을 지속적으로 유도하는데 유용합니다. 본 연구에 제시된 sd-GAL4 및 upd-GAL4 이외에<...

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없습니다.

감사의 글

우리는 원고를 비판적으로 읽었던 J. Vaughen에게 감사드립니다. 이 연구는 JSPS 가신 교부금 번호 26891025, 15H01500 및 YT에 대한 다케다 과학 재단 연구 보조금의 교부금으로 지원되었습니다

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
<강>시약
인산염 완충식염수(PBS)Wako162-19321
TritonX-100Wako168-11805
포름알데히드Wako064-00406
소 혈청 알부민SigmaA7906
일반 염소 혈청SigmaG6767
장착 매체, VectashieldVector LaboratoriesH-1000
DAPISigmaD9542
mouse-anti-Dlg 4F3Developmental Studies Hybridoma Bank4F3 anti-discs large, RRID:AB_528203PBTG에 희석, 1:40
mouse-anti-MMP1Developmental Studies Hybridoma Bank3A6B4, RRID:AB_5797803 혼합 1:1:1 및 PBTG에 희석, 1:40
mouse-anti-MMP1Developmental Studies Hybridoma Bank3B8D12, RRID:AB_5797813 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40
mouse-anti-MMP1Developmental Studies Hybridoma Bank5H7B11, RRID:AB_5797793 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40
mouse-anti-atubulinDevelopmental 연구 Hybridoma BankAA4.3, RRID:AB_579793PBTG에 희석, 1:100
Alexa Fluor 546 PhalloidinMolecular probesA22283PBS에 희석, 1:40
염소 항-마우스 IgG 항체, Alexa Fluor 546Molecular probesA11030PBTG에 희석, 1:400
Name<strong>Company카탈로그 번호Comments
Fly strains
sd-Gal4Bloomington Drosophila Stock Center#8609recombined with UAS-EGFP
em<>upd-Gal4Bloomington Drosophila Stock Center#26796UAS-EGFP
UAS-lgl-RNAiVienna Drosophila RNAi center#51247
UAS-scrib-RNAiVienna Drosophila RNAi center#105412
UAS-RasV12와 재결합블루밍턴 초파리 재고 센터#64196
UAS-Yki3SA블루밍턴 초파리 재고 센터#28817
hsFLPBloomington Drosophila 재고 센터#6
Act>CD2>GAL4 (플립아웃 GAL4)블루밍턴 초파리 스톡 센터#4780UAS-EGFP
UAS-EGFPBloomington Drosophila Stock Center#5428X chromosome
UAS-EGFPBloomington Drosophila Stock Center#6658세 번째 염색
UAS-Dicer2Bloomington Drosophila Stock Center#24650두 번째 염색체
UAS-Dicer2Bloomington Drosophila Stock Center#24651세 번째 염색체
vkg-GFPMorin et al. 2001GFP protein trap
체

참고문헌

  1. Hanahan, D., Weinberg, R. A. The hallmarks of cancer. Cell. 100 (1), 57-70 (2000).
  2. Xu, T., Rubin, G. M. Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues. Development. 117 (4), 1223-1237 (1993).
  3. Struhl, G., Basler, K. Organizing activity of wingless protein in Drosophila. Cell. 72 (4), 527-540 (1993).
  4. Potter, C. J., Turenchalk, G. S., Xu, T. Drosophila in cancer research. An expanding role. Trends Genet. 16 (1), 33-39 (2000).
  5. Miles, W. O., Dyson, N. J., Walker, J. A. Modeling tumor invasion and metastasis in Drosophila. Dis Model Mech. 4 (6), 753-761 (2011).
  6. Tipping, M., Perrimon, N. Drosophila as a model for context-dependent tumorigenesis. J Cell Physiol. 229 (1), 27-33 (2013).
  7. Bilder, D. Epithelial polarity and proliferation control: links from the Drosophila neoplastic tumor suppressors. Genes Dev. 18 (16), 1909-1925 (2004).
  8. Humbert, P. O., et al. Control of tumourigenesis by the Scribble/Dlg/Lgl polarity module. Oncogene. 27 (55), 6888-6907 (2008).
  9. Huang, L., Muthuswamy, S. K. Polarity protein alterations in carcinoma: a focus on emerging roles for polarity regulators. Curr Opin Genet Dev. 20 (1), 41-50 (2010).
  10. Brumby, A. M., Richardson, H. E. scribble mutants cooperate with oncogenic Ras or Notch to cause neoplastic overgrowth in Drosophila. EMBO J. 22 (21), 5769-5779 (2003).
  11. Igaki, T., Pastor-Pareja, J. C., Aonuma, H., Miura, M., Xu, T. Intrinsic tumor suppression and epithelial maintenance by endocytic activation of Eiger/TNF signaling in Drosophila. Dev Cell. 16 (3), 458-465 (2009).
  12. Tamori, Y., et al. Involvement of Lgl and Mahjong/VprBP in cell competition. PLoS Biol. 8 (7), e1000422(2010).
  13. Cordero, J. B., et al. Oncogenic Ras diverts a host TNF tumor suppressor activity into tumor promoter. Dev Cell. 18 (6), 999-1011 (2010).
  14. Yamamoto, M., Ohsawa, S., Kunimasa, K., Igaki, T. The ligand Sas and its receptor PTP10D drive tumour-suppressive cell competition. Nature. 542 (7640), 246-250 (2017).
  15. Vaughen, J., Igaki, T. Slit-Robo Repulsive Signaling Extrudes Tumorigenic Cells from Epithelia. Dev Cell. 39 (6), 683-695 (2016).
  16. Tamori, Y., Suzuki, E., Deng, W. -M. Epithelial Tumors Originate in Tumor Hotspots, a Tissue-Intrinsic Microenvironment. PLoS Biol. 14 (9), e1002537(2016).
  17. Ohsawa, S., et al. Elimination of oncogenic neighbors by JNK-mediated engulfment in Drosophila. Dev Cell. 20 (3), 315-328 (2011).
  18. Menéndez, J., Pérez-Garijo, A., Calleja, M., Morata, G. A tumor-suppressing mechanism in Drosophila involving cell competition and the Hippo pathway. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14651-14656 (2010).
  19. Hogan, C., et al. Characterization of the interface between normal and transformed epithelial cells. Nat Cell Biol. 11 (4), 460-467 (2009).
  20. Kajita, M., et al. Interaction with surrounding normal epithelial cells influences signalling pathways and behaviour of Src-transformed cells. J Cell Sci. 123 (Pt 2), 171-180 (2010).
  21. Norman, M., et al. Loss of Scribble causes cell competition in mammalian cells. J Cell Sci. 125 (1), 59-66 (2012).
  22. Wagstaff, L., et al. Mechanical cell competition kills cells via induction of lethal p53 levels. Nat Commun. 7, 1-14 (2016).
  23. Kajita, M., Fujita, Y. EDAC: Epithelial defence against cancer-cell competition between normal and transformed epithelial cells in mammals. J Biochem. 158 (1), 15-23 (2015).
  24. North, A. J. Seeing is believing? A beginners' guide to practical pitfalls in image acquisition. J Cell Biol. 172 (1), 9-18 (2006).
  25. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  26. Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118 (2), 401-415 (1993).
  27. Jory, A., et al. A survey of 6,300 genomic fragments for cis-regulatory activity in the imaginal discs of Drosophila melanogaster. Cell Rep. 2 (4), 1014-1024 (2012).
  28. McGuire, S. E., Le, P. T., Osborn, A. J., Matsumoto, K., Davis, R. L. Spatiotemporal rescue of memory dysfunction in Drosophila. Science. 302 (5651), 1765-1768 (2003).
  29. Rodrigues, A. B., et al. Activated STAT regulates growth and induces competitive interactions independently of Myc, Yorkie, Wingless and ribosome biogenesis. Development. 139 (21), 4051-4061 (2012).
  30. Khan, S. J., et al. Epithelial neoplasia in Drosophila entails switch to primitive cell states. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (24), E2163-E2172 (2013).
  31. Pagliarini, R. A., Xu, T. A genetic screen in Drosophila for metastatic behavior. Science. 302 (5648), 1227-1231 (2003).
  32. Gonzalez, C. Drosophila melanogaster: a model and a tool to investigate malignancy and identify new therapeutics. Nat Rev Cancer. 13 (3), 172-183 (2013).
  33. Patel, P. H., Edgar, B. A. Tissue design: how Drosophila tumors remodel their neighborhood. Semin Cell Dev Biol. 28, 86-95 (2014).
  34. Nakajima, Y. -I., Meyer, E. J., Kroesen, A., McKinney, S. A., Gibson, M. C. Epithelial junctions maintain tissue architecture by directing planar spindle orientation. Nature. 500 (7462), 359-362 (2013).
  35. Colombani, J., Andersen, D. S., Léopold, P. Secreted peptide Dilp8 coordinates Drosophila tissue growth with developmental timing. Science. 336 (6081), 582-585 (2012).
  36. Garelli, A., Gontijo, A. M., Miguela, V., Caparros, E., Dominguez, M. Imaginal discs secrete insulin-like peptide 8 to mediate plasticity of growth and maturation. Science. 336 (6081), 579-582 (2012).

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