방법 논문

대뇌 허혈에 대한 산성 후행 조절의 신경 보호를 연구하기위한 실험 모델

DOI:

10.3791/55931

⸱

2017년 7월 31일

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Pharmacology & Toxicology, College of Pharmaceutical Sciences, Department of Pharmacology, Key Laboratory of Medical Neurobiology of The Ministry of Health of China, Zhejiang Province Key Laboratory of Neurobiology, Zhejiang University

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

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산성 후 조절은 뇌 허혈을 예방합니다. 여기서는 APC를 실행하는 두 가지 모델을 제시합니다. 이들은 시험 관내에서 산소 - 글루코스 부족 후에 산성 버퍼 corticostriatal 슬라이스를 전달함으로써 생체 내에서 중간 대뇌 동맥 폐색 후 20 % CO 2 흡입에 의해 각각 달성된다.

초록

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뇌졸중은 전 세계적으로 사망률과 장애의 주요 원인 중 하나이며 제한된 치료 방법을 사용합니다. 신경 보호를위한 내생 적 전략으로서, 후 조절 (postconditioning treatment)은 뇌 허혈에 대한 유망한 치료법으로 입증되었다. 그러나 복잡한 절차와 잠재적 인 안전 문제로 인해 임상 적용이 제한됩니다. 이러한 단점을 극복하기 위해 우리는 실험적인 국소 뇌 허혈에 대한 치료법으로 산성 후 조절 (acidic postconditioning, APC)을 개발했습니다. APC는 허혈 재관류 동안 CO 2를 흡입하여 온화한 산증의 치료를 의미합니다. 여기서 우리는 각각 in vitro 및 in vivo에서 APC를 수행 할 수있는 두 가지 모델을 제시합니다. 생쥐의 산소 - 포도당 결핍 (OGD) 처리 및 생쥐의 대뇌 피질 선종 및 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO)을 사용하여 뇌허혈을 모방 하였다. APC는 단지 20 % CO 2로 버블 산성 버퍼 뇌 조각을 전송함으로써 달성 될 수있다 O20 % CO 2 마우스를 흡입하여 R. APC는 조직 생존력 및 뇌경색 양에 의해 반영되는 바와 같이, 뇌허혈에 대한 유의적인 보호 효과를 나타내었다.

서론

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뇌졸중은 전 세계적으로 사망률과 장애를 유발하는 주요 원인 중 하나입니다. 지난 수십 년 동안 뇌졸중에 대한 효과적인 치료법을 찾기 위해 많은 노력을 기울 였지만 그 성과는 아주 불만족 스럽습니다. 사후 조절 (postconditioning)는 허혈성 에피소드에 따른 독성 스트레스에 의해 조작되는 과정입니다. 허혈, 저산소증, 저 포도당 및 원격 허혈 후 조절을 포함한 사후 조건 조절은 내인성 적응 메커니즘을 유발하고 뇌허혈에 대한 유망한 치료법으로 입증되었습니다 1 , 2 , 3 , 4 . 그러나, 허혈 후 조절은 추가적인 상해를 유발할 수 있습니다. 사지의 원격 허혈성 후 조절은 동측 또는 양측 뒷다리 5 , 6 , 7 에 5 ~ 20 분간의 폐색과 재관류를 반복해야합니다. Th따라서 이러한 사후 조건 조종 조작은 임상 적으로 위험하거나 비실용적입니다. 이러한 단점을 극복하기 위해, 우리는 생쥐....

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프로토콜

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모든 실험은 Zhejiang 대학 동물 실험위원회의 윤리 지침에 따라 승인되고 시행되었으며 실험실 동물의 관리 및 사용을위한 보건 연구소의 지침을 완벽하게 준수했습니다. 고통이나 불편 함을 최소화하기위한 노력이 이루어졌으며 최소한의 동물 수가 사용되었습니다.

1. Corticostriatal 조각의 OGD

  1. 솔루션 준비 :
    1. 1000 mL의 R-ACSF (124 밀리몰 / L, 염화나트륨을 준비 5 밀리몰 / L의 KCl, 1.25 밀리몰 / L의 KH 2 PO 4, 2 밀리몰 / L 황산, 26 밀리몰 / L의 NaHCO3, 2 밀리몰 / L의 CaCl2를, 10 mmol / L 포도당, 최종 pH 7.4). 실험 전반에 걸쳐 5 % CO 2 및 95 % O 2 를 포함한 거품.
    2. 5 % CO 2 및 95 % N 2 버블 글루코스 위는 제외 200 mL의 포도당없는 ACSF (GF-ACSF)를 준비한다. br에 적용하기 전에 30 분 동안 기체를 버블 링하십시오.용액의 산소 함량을 줄이....

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결과

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위에서 설명한 corticostriatal 슬라이스 모델에서, corticostriatal 슬라이스 생존 능력은 재관류 후 1 시간 TTC 분석에 의해 계량되었다. TTC 변환은 490 nm에서의 흡수를 대조 절편으로 정규화함으로써 계산 하였다. TTC 전환에 따라, APC는 발병 시간과 지속 시간에 따라 OGD 유발 재관류 손상으로부터 보호했다. 구체적으로, 1 분 및 3 분의 산증 치료는 모두 15 분 OGD 후 5 분에서 생존율을 유의하게 향상 시켰지만 5 분 (OGD : 0.609 ± 0.029, 5/1 : 0.758 ± 0.034, 5/3 : 0.821 ± 0.041, 5/5 : 0.672 ± 0.053, 평균 ± SEM으로보고 된 데이터) ( 도 1A ). 산혈증 치료에 의한 신경 보호는 재관류 후 5 분 이내에 보호되어 있었으나 15 분 (OGD : 0.584 ± 0.044.......

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토론

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여기에 우리는 뇌 허혈에 대한 APC의 신경 보호를 연구하기위한 두 가지 실험 모델을 제시한다. 뇌 조각에서, APC는 MCAO 모델에서, APC는 재관류 후 마우스에 20 % CO 2 흡입에 의해 달성되는 동안 마우스, 재관류 개시 후 20 % CO 2로 버블 산성 완충액 슬라이스 corticostriatal 배양함으로써 달성된다. 두 모델 모두 대뇌 허혈에 대한 APC의 신경 보호를 반영한다. 보호는 허혈성 후 컨디셔닝에 의해 달성되는 것과 유사하지만 더 넓은 시간 창을 지녔다. MCAO 모델에서, 재관류 후 50 분의 허혈 후 조절 조건에 비해 10 분까지의 시간 범위가 길어질 수 있습니다 15 . 또한 APC의 절차가 더 쉽고 안전합니다.

corticostriatal 조각 모델에서 부드럽고 빠른 작업은 뇌 조각의 생존 가능성을 최대로 보증하는 데 중요합니다. MCAO 성능의 경우, 뇌 혈.......

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공개 사항

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저자는 공개 할 것이 없습니다.

감사의 글

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이 작품은 중국 자연 과학 재단 (81573406, 81373393, 81273506, 81221003, 81473186 및 81402907), 절강 성 자연 과학 재단 (LR15H310001) 및 S & T 혁신 팀 (2011R50014)의 Zhejiang Leading Team을위한 프로그램에 의해 지원되었습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
염화나트륨시그마S5886
염화칼시그마P5405
인산칼륨 일염기시그마P9791
황산마그네슘시그마M2643
중탄산나트륨시그마S5761
염화칼슘 이수화물시그마C5080
D-(+)-포도시그마G7021
비브라톰라이카VT1000 S
2,3,5-트리페닐테트라졸륨 염산염시그마T8877
앱솔루트 에탄올알라딘 산업 공사E111993
디메틸 설폭사이드시그마D8418
레이저 도플러 유량측정 무어 Instruments Ltd모델 무어 VMS-LDF2
디 에틸 에테르 무수Sinopharm 화학 시약 공사80059618
트리클로로 아세트 알데히클 수화물Sinopharm 화학 시약 공사30037517
10 % 포르말린알라딘 산업 공사F111936
24 웰 플레이트제트 BiofilTCP-010-024
륨 성 당

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhao, H., Sapolsky, R. M., Steinberg, G. K. Interrupting reperfusion as a stroke therapy: ischemic postconditioning reduces infarct size after focal ischemia in rats. J Cereb Blood Flow Metab. 26 (9), 1114-1121 (2006).
  2. Leconte, C., et al.

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