방사형 워터 트레드 미로를 이용한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 공간 기억 장애의 평가

요약

여기서 우리는 수영을 필요로하지 않는 마우스 특유의인지 검사 프로토콜을 제시합니다. 이 테스트는 통제 된 피질 충격 유발 외상성 뇌 손상 마우스와 가짜 컨트롤을 성공적으로 구별하는 데 사용할 수 있습니다.

초록

최근 과학 연구에서 마우스 모델을 사용하는 증가에도 불구하고 연구원들은 원래 의도적으로 설계된 쥐 사용을 위해 검증 된인지 작업을 계속 사용합니다. 공간 기억의 방사형 워터 트레드 (RWT) 미로 테스트 (마우스를 위해 특별히 설계되었으며 수영을 필요로하지 않음)는 이전에 피질 충격 유발 TBI 마우스와 가짜 컨트롤을 성공적으로 구별하는 것으로 나타났습니다. 여기,이 작업을위한 상세한 프로토콜이 제시됩니다. RWT 미로는 쥐가 자연적으로 쥐를 잡아 당겨서 장치의 측면을 포옹하는 것을 방지하기위한 자연스러운 경향을 이용합니다 (thigmotaxis). 미로의 벽에는 장치의 바닥 위에 9 개의 탈출구가 있으며, 마우스는 시각적 신호를 사용하여 미로 밖으로 이어지는 탈출 구멍을 찾도록 훈련됩니다. 미로는 차가운 물로 채워져 도망 치기에 충분하지만 쥐가 수영을 할만큼 충분히 깊지는 않습니다. 획득 기간은 네 번의 교육 만 필요합니다.5 일간의 기억력 검사와 12 일째의 장기간 기억력 검사를 실시했다. 여기에보고 된 결과는 RWT 미로가 쥐가 검증 한 수영 기반인지 검사의 대안으로 공간적 평가 TBI 마우스 모델의 기억력 결핍.

서론

메모리 손상은 외상성 뇌 손상 (TBI) ^{1, 2} 다음 환자에 의해보고 된 가장 흔한 증상 중입니다. 그러므로 TBI의 동물 모델에서의 유사한 기억 상실의 정확한 확인과 평가는이 상태와 그 관리에 대한 우리의 이해에 필수적입니다. 여기서는 Radial Water Tread (RWT) 미로를 사용하여 TBI의 마우스 모델에서 공간 메모리를 테스트하기위한 프로토콜을 제시합니다. 이 장치는 이전에 통제 된 피질 충격 (CCI) 유발 TBI ³ 의 마우스 모델에서인지 적 결손을 평가하는 것으로 나타 났으며, 쥐가 검증 한 수영 기반의인지 검사 대안이 될 수 있습니다.

트랜스 제닉 마우스 모델의 다양성과 유용성이 증대됨에 따라 과학 연구 ⁴ 에서 쥐를 이용한 마우스 사용이 최근 증가했다. 이러한 변화에도 불구하고 연구자들은 행동 주의적원래 설계되고 쥐 사용을 위해 검증 된인지 작업. 현재 마우스의인지 기능을 평가하기 위해 사용되는 가장 일반적인 시험은 모리스 물 미로 (MWM) 및 반스 원형 미로는, 구체적으로는 래트

프로토콜

모든 절차와 동물 취급은 국립 보건원 (National Institutes of Health)과 워싱톤 동물 보호 및 사용위원회 (The University of Washington Animal Care and Use Committee)가 발행 한 동물 관리 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 수술

1. 무의식 때까지 유도 상자에 5 % isoflurane에서 마우스를 마취. 호흡 속도의 감소와 발가락 핀치에 따른 후퇴 반사의 부재로 마취를 확인하십시오.
2. 수술을 통해 2-2.5 %의 코 콘을 통해 마취를 유지하십시오. 마우스가 의식을 잃지 않도록 외과 수술 중 호흡률을 모니터링하십시오.
3. 마우스를 가열 패드에 놓고 귀마개를 사용하여 정위 장치에 마우스를 놓고 머리가 단단하고 평평한 지 확인하십시오.
4. 제모 크림을 사용하여 두피에서 모발을 제거하십시오. 식염수로 두피를 완전히 헹굽니다.
5. 교대 요오드와 70 % 에탄올 세척으로 수술 부위를 닦으십시오.
6. 행정관두피에서 Lidocaine과 Bupivacaine (1 mg / kg)을 피하 주사 하였다.
7. 외과 용 가위로 종아리 중앙선 절개를하고 피부를 수축시켜 두개골을 드러내십시오. ....

결과

RWT 미로 ( 그림 1 )는 통제 된 피질 충격 유발 TBI 또는 가짜 수술 중 하나를 받기 위해 무작위로 할당 된 생쥐의 상해 의존 공간 기억 장애를 조사하기 위해 사용되었습니다. 상해는 3 mm 볼록한 팁과 6 m / s 타격 속도, 1 mm 관통 깊이 및 200 ms 접촉 시간과 같은 손상 매개 변수를 사용하여 솔레노이드 구동 피질 충격을 사용하여 생성되었습니다. 쥐는 수술 후 35 일부터인지 검사를 받았고, 위의 5 일에 4 일간의 훈련 (획득 기간)과 5 일째의 기억력 검사와 12 일째의 장기 기억력 검사를 받았다. 실험 계획안. 그림 2 는 TBI 마우스와 가짜 컨트롤 간의 시간에 따른 미로를 완료하기위한 대기 시간의 명확한 구분을 보여줍니다. 여기에 제시된 데이터의 분석은 TBI 생쥐에 비해 가짜 대조군에서 잠복기가 유의하게 감소되었음을 나타냈다

토론

여기에 제시된 RWT 미로 프로토콜은 CCI 유도 TBI 마우스와 가짜 컨트롤을 성공적으로 구별하며, MWM 및 Barnes 원형 미로의 대안으로 실현 가능한 마우스 중심의 솔루션입니다. 여기에보고 된 결과는 TBI 마우스 모델에서 RWT 미로만을 사용하는 것으로 나타 났지만,이 장치는 MWM을 사용하여 만든 스트레스 유발 불응 법으로 인한 스트레스 유발 불 준수가 비 효과적 인 노화 및 형질 전환 모델에서 성공적으로 사용되었습니다 ^{15 , 17 , 18 , 19} . 비준수 또는 운동 부족이 잠재적 인 연구 관심사 인 다른 마우스 모델도이인지 과제로부터 이익을 얻을 수 있습니다.

앞에서 논의한 설계상의 이점 외에도 RWT 미로의 장점 중 하나는 구성.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
35 갤런. 핫 딥 스틸 라운드 터브	홈 디포	인터넷 #206638142	필요: 1
1-1/2 인치. ABS DWV SPG x SJ 트랩 어댑터	홈 디포	인터넷 #100344703, 스토어 SKU #188956	필요: 9
1-3/4 인치 x 1-7/16 인치. 검은색 고무 스토퍼	홈 디포	인터넷 #100114974 스토어 SKU #755844	필요: 8
1-1/2 인치. ABS DWV 90도 허브 x 허브 엘보우	홈 디포	인터넷 #100346663 스토어 SKU #188603	필요: 1
HDX 10 갤런 스토리지 토트	홈 디포	인터넷 #202523587 스토어 SKU #258804 스토어 SO SKU #258804	필요:
1 임팩트 원 스테레오택시 임팩터 CCI	Leica Biosystems	39463920	필요:
1 버니어 스테레오택시 w/ 수동 파인 드라이브 스테레오택시 기기 작은 동물용	Leica Biosystems	39463001	필요: 1