인간의 맨 틀 세포 림프 종의이 종이 식 마우스 모델에서 종양 Engraftment

요약

맨 틀 세포 림프 종 (MCL) B 세포 장애 치료 하기 어려운 이며, 그것은 동등 하 게 연구 하 고 치료제를 개발 기본 MCL의이 종이 식 마우스 모델을 설정 하기가 어렵습니다. 여기, 우리 생물학의 기본을 이해할 수 있도록 마우스에 MCL xenografts의 성공적인 설립을 설명 합니다.

초록

B 세포는 주로 집에 면역 세포 순환에 그들은 핵심 선수 하 고 림프 기관에. 반면 정상 B 세포는 T 세포에 의해 자극 될 때만 증식, 종양 B 세포 생존과 정의 되지 않은 장기 틈새에서 자율적으로 확장. 맨 틀 세포 림프 종 (MCL)은 하나의 같은 B 세포 장애, 환자의 평균 생존 율은 4-5 년. 이는 유도 및 이러한 셀의 engraftment는 생존을 증가 하기 위하여 차단 하는 효과적인 메커니즘의 필요와 환자 들의 장 수에 대 한 호출 합니다. 따라서, 유도 장치에는 vivo에서 차단 하 여 MCL 치료제의 효능을 연구 하는 종이 식 마우스 모델을 개발 하기 위해 노력 최대 중요성 이다. 관련 전 임상 마우스 모델은 화면 새로운 치료제에 중요 한, 개발 초기 단계 약물 테스트를 인간 세포 xenotransplantation 받는 동물의 긴 추구 되어 있다. 이 동물 모델 인간의 이식 거부를 방지 하 고 인간의 질병에 대 한 모델 설정 개발 되 고 그것은 다른 림프 종 종류의 질병의 진행을 공부 하 고 전 임상 후보 약물에 대 한 테스트를 수행 하는 매우 유용한 도구 될 수 있습니다. 혈액 악성 종양, MCL 같은. 우리는 종이 식 마우스 모델을 연구 하 고 MCL에 대 한 새로운 치료 접근을 개발 하는 우수한 자원으로 될 것입니다 설립.

서론

자연으로 세포는 면역 감시에 중요 역할 그리고 림프 구 매매 항 원 특정 면역^1,2설치에서 중요 한 단계. 이 프로세스는 naïve T 세포 혈 류를 thymus에서 그리고 동족 항 원을 만나는 2 차 림프 기관, 림프절, Peyer의 패치, 또는 비장를 포함 하 여 거기에서의 마이그레이션 포함 됩니다. B 세포 골 수에서 분화 하 고 2 차 림프 기관³의 낭으로 순진한 셀으로 마이그레이션할. 이 B 세포 중 일부는 그들의 수용 체와 항 원 바인딩 하 고 특정 T 세포에 의해 활성화 됩니다. 확산 및 B 세포의 뿌리의 맨 틀 영역으로 비-활성화, 순진한 B 셀을 푸시합니다. 활성화 된 세포 차별화할 수 있습니다 다음 메모리 B 세포, 몸, 순찰 또는 골⁴마이그레이션하는 플라스마 세포를 은닉 하는 면역 글로불린으로 성숙.

MCL 맨 틀 영역에서 순진한 B 림프 톨 종양으로 변환 될 때 발생 합니다. 이 림프 종 세포 림프 기관의 microenvironment에 있으며 특정 T 림프 구 제어 독립적으로 격 증. 그러나, 밀도의 특정 단계에서 그들은이 틈새에서....

프로토콜

인간의 혈액 샘플은 로컬 윤리 제네바 대학 병원의 인간 실험 위원회에 의해 승인 절차에 따라 사용 되었다.

동물 절차는 기관 윤리 위원회의 동물 관리 제네바, 스위스 및 Cantonal 수의 사무실에 따라 수행 했다 (승인 번호: GE/26/15).

1. 밀도 그라데이션 분리 하 여 기본 주변 혈액 단 세포 (PBMCs)의 준비

참고: 말 초 혈액의 3-5 mL MCL leukemic 단계에서 제시 하는 환자에서 얻은 했다. 진단 그리고 염색체 전 좌 t(11;14)의 존재와  D1의 overexpression에 의해 확인 이후에 cytometry (CD5 +, CD23−, CD200 +, 단일 클로 널 B 세포 인구)에 대 한 표준 진단 기준에 따라 설립 되었다. 모든 경우에 단일 클론 B 세포를 구성 > 총 B 세포 인구의 90%. 나머지는 monocytes 그리고 몇몇 T 세포 주로 했다.

1. 로스웰 파크 기념 연구소 매체 1640 (RPMI) (그림 1A)의 5 mL로 MCL 혈액 샘플의 (1:1) 5 mL를 희석.
2. 철저 하 게 혼합 되도록 사용 하기....

결과

원고는 engraftment MCL 셀의이 종이 식 마우스 모델의 성공적인 개발을 위한 최적화 된 프로토콜을 설명합니다. (이 경우 MCL 셀에), 순수한 셀 인구의 준비는 매우 성공적인 MCL xenografts 개발에 중요 한 이다. 그림 1 밀도 그라데이션 분리에 의해 MCL 환자 혈액에서 단 세포 격리에 대 한 대리점 단계를 나타냅니다. 단 세포 쥐에이 종이 식 주입에 대 한 순수한 세포 인구를 부정적인 B 세포 농축 키트를 사용 하 여 순수 B 세포를 더 처리 됩니다. 위해서는 성공적인 MCL engraftment 최대 순도를 주의 한다. 이 메서드를 사용 하 여 얻은 순도 보통 > 90%. 나머지는 주로 monocytes 그리고 몇몇 T 세포 (데이터 표시 되지 않음) 했다.

토론

임상 약물 개발의 고급 단계에 있지만 약물 발견에 사용할 수 없습니다 수 있습니다. 인간 세포 xenotransplantation 동물 받는 초기 단계 약물을 테스트 하기 위해 개발 하는 노력 추구 오래 있다. 여기 우리가 제시 하는 동물 모델을 인간의 이식 거부를 방지 하 고 인간의 질병, MCL 같은 모델을 설정할 수 있습니다. 현재 인간의 종양 engraftment 및 종양의 성장 메커니즘 연구의 종이 식 모델입니다. 여기 우리는 NSG 마우스 림프 종 engraftment의 더 중대 한 성공을 달성 하기 위하여 날짜를 가장 면역 결핍 마우스 모델 중 하나를 사용 합니다. NSG 마우스 부족 성숙한 T 세포, B 세포, NK 세포. 그들은 또한 cytokine 신호 장애 있다 하 고 타고 난 면역 반응에 있는 결함.

밀도 기울기에 의해 기본 MCL 샘플에서 림프 구 준비는 적혈구 및 혈소판 같은 다른 셀 형식을 제거 하는 중요 한 단계 이다. 전통적으로, 조밀도 기온 변화도.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Ficoll-paque 매체	GE Healthcare	17-1440-02	단핵 세포 분리를 위한
RPMI 매체 1640	Gibco-Life technologies	61870-010	혈액 샘플 희석용
인산염 완충 식염수(PBS)	Sigma-Aldrich	D8537	세포 세척
소 혈청 알부민(BSA)	Sigma-Aldrich	A8412	분리 중 세포 세척에 사용되는 1% BSA로 PBS 제조용
CD19-APC700	벡크만쿨터	B49212	human pan-B cell marker
CD20-APC	Beckman Coulter	A21693	human pan-B cell marker
CD20-ECD	Beckman Coulter	IM3607	human pan-B cell marker
CD5-PC 5.5	Beckman Coulter	PN A70203	human T cell marker
CD23-PE	Pharmingen	555711	MCL에 일반적으로 없는 세포 표면 단백질
CD45 KO	Beckman Coulter	B36294	Pan-leucocyte marker
CD200-PE	Pharmingen	552475	에 일반적으로 없는 세포 표면 단백질
	, 이 연구
에서 MCL 이종이식편을 개발하는 데 사용된 Charles River Laboratories 5557Easy sep Human B cell enrichment kit	줄기 세포 기술	19054	B 세포를 농축하여 마우스에 주입하기 위한 순수 세포를 얻는 데 사용됨
FACS	Beckman Coulter	Navios	MCL 샘플을 특성화하고 MCL 생착을 위한 기관을 연구하는 데 사용됨
1X 염화암모늄 칼륨 완충액			완충액(NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; 에디타. Na2&중간 점; 2H2O 3.722 마그네슘/L )

, , , , , MCL, NOD scid gamma (NSG) 마우스는 는 적혈 용해