S. cerevisiae 에 단백질 기반 상속에 대 한 높은 처리량 검열

James S. Byers; Daniel F. Jarosz

doi:10.3791/56069

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방법 논문

S. cerevisiae 에 단백질 기반 상속에 대 한 높은 처리량 검열

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DOI:

10.3791/56069

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2017년 8월 8일

James S. Byers¹ , Daniel F. Jarosz¹^,²

¹Department of Developmental Biology, Stanford University School of Medicine, ²Department of Chemical and Systems Biology, Stanford University School of Medicine

이 논문에서

요약

이 프로토콜 기능 S. cerevisiae에 단백질 기반 상속에 대 한 화면을 높은 처리량 방법을 설명 합니다.

초록

미래 세대에 액세스할 수 있는 생물 학적 정보의 인코딩 변화 DNA 시퀀스를 통해 일반적으로 달성 된다. 수명이 긴 상속 단백질 구조 (보다는 오히려 순서)으로 인코딩된는 오래 패러다임 변화 하지만 드문으로 간주 되었습니다. 최고의 특징이 같은 후 성적인 요소는 prions, 새로운 고기의 상속 징후를 구동할 수 자가 조립 동작을가지고 있습니다. 많은 archetypal prions는 눈에 띄는 N/Q-풍부한 시퀀스 바이어스를 표시 하 고 녹말 체 접이식으로 조립. 이러한 비정상적인 기능 대부분 심사 노력 새로운 프리온 단백질 식별을 통보 했다. 그러나, 적어도 3 개의 알려진된 prions (를 포함 하 여 창립 프리온, PrP^Sc)이 생 화 확 적인 특성 항구 하지 않습니다. 우리는 따라서 대량 작업의 속성에 따라 단백질 기반 상속의 범위를 조사 하는 대체 방법 개발: 프리온 단백질의 과도 overexpression 증가 주파수는 그들은 자체 템플릿 구조 확보. 이 문서에서는 단백질 기반 상속을 유도 하는 효 모 ORFeome의 용량을 분석 하는 방법을 설명 합니다. 이 전략을 사용 하 여, 우리가 이전에 발견 하는 > 1% 효 모 단백질의 수명이 긴, 안정, 그리고 유전자 변이 보다는 더 빈번 하 게 발생 생물학 특성의 출현을 연료 수. 이 방법은 전체 ORFeomes 또는 특정 유전자 네트워크 또는 환경 자극에 대 한 대상된 심사 패러다임으로 높은 처리량에 사용할 수 있습니다. 앞으로 유전 스크린 수많은 발달 및 신호 경로 정의 하는 것 처럼 이러한 기술을 생물학 과정에서 단백질 기반 상속의 영향을 조사 하는 방법을 제공 합니다.

서론

생물 학적 시스템 자주 단백질 풍부에 일시적인 동요를 경험 한다. 이러한 표현 형 유기 체 또는 미래 세대의 형성에 지속적인 영향을 미칠 여부 불분명 남아 있습니다. 이 생물학의 가장 잘 알려진 인스턴스 단백질, prions, 게놈 수정 없이 상속 특성의 출현을 드라이브의 드문 클래스를 포함 합니다. 대신, 이러한 프로teinaceous 그리고 에fectious 입자 고기 자기 영속적인 변화 단백질 구조¹^,²를 통해 전송합니다. 상속의이 유형은 치명적인 신경 퇴행 성 질병의 특이 한 상속 패턴의 원인으로 발견 되었다. 그러나, 유기 체 균 류에서 포유류³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷^,⁸^,^,⁹¹⁰ 에 이르기....