Multimodal 접근을 이미징 Bleomycin 유도 폐 섬유 증 생쥐에서의 경도 평가 대 한 마이크로-CT와 형광 분자 단층에 따라

요약

우리 비-침략 적 multimodal 접근 bleomycin의 이중 intratracheal 주입에 의해 유도 된 마우스 폐 섬유 증 모델의 경도 평가 대 한 마이크로-CT와 형광 분자 단층에 따라 이미지를 설명 합니다.

초록

특 발성 폐 섬유 증 (IPF) 치명적인 폐 질환 폐 기능 및 호흡 실패에서 후속 죽음에 상당한 저하를 일으키는 원인이 되는 폐 아키텍처의 진보와 돌이킬 수 없는 파괴에 의해 특징입니다.

실험 동물 모델에서 IPF의 병 인 bleomycin 관리에 의해 유발 되어 있다. 이 연구에서 우리는 이중 intratracheal bleomycin 주입에 의해 유도 된 IPF 같은 마우스 모델 조사. 폐 섬유 증 공부에 사용 하는 표준 조직학 평가 침략 터미널 절차. 이 작품의 목표 모니터링 하는 데 비 침 투 적인 이미징 기법 형광 분자 단층 (FMT)와 마이크로 CT 등을 통해 폐 섬유 증 조직학 결과 함께 유효성을 검사 하는 이러한 두 기술을 실시간으로 비-침략 적 IPF 질병 엄격과 진행의 모니터링을 위한 혁신적인 functional 접근을 대표할 수 있었다. 다른 방식의 융합이 나타냅니다 IPF 질병, 병 적인 상태에서 발생 하는 분자 이벤트 FMT 관찰 될 수 있다 및 후속 해 부 변화 마이크로-코네티컷으로 모니터할 수 있습니다 이해에 대 한 추가 단계를

서론

특 발성 폐 섬유 증 (IPF)은 불행히도 종종 치명적인 진단¹의 4 년 이내 폐 기능의 진보적인 감소와 만성 폐 질환 이다. IPF의 주요 특징은 세포 외 매트릭스 증 착 및 섬유 아 세포 확산, 하지만 병 인은 아직 완전히 이해 되지 않습니다. 가장 지원된 가설 폐 상해의 여러 사이클 중간 엽 세포 주기 확산의 변경, 섬유 아 세포와 myofibroblasts, 과장 된 축적 하는 폐 포 상피 세포의 파괴를 일으키는 원인이 되 고 증가 매트릭스 생산입니다. 중재자와 같은 매트릭스 metalloproteinases (MMPs) 섬유 증 개발 인간의 IPF 또는 bleomycin 유발 동물 모델에서에서 dysregulated 발견 되었습니다 이러한 프로세스에 참여. 통제 MMP 생산 리드는 불균형된 콜라겐 증 착 폐 interstitium 및 치조 공간 내에서 비정상적인 상처 수리^1,2를 흉내 낸.

약물 발견 및 개발에 대 한 주요 장애물 중 하나 인간의 pathogenesis 및 질병 표현 형을 모방 액세스할 수 마우스 모델의 가용성입니다. 다른 에이전트 동물 모델에서 폐 섬유 증을 유발 하는 ....

프로토콜

여기에 설명 된 모든 동물 실험 프로토콜 번호 아래 Chiesi Farmaceutici와 에라스무스의 동물 실험에 대 한 교내 동물 복지 위원회에 의해 승인 되었다: 유럽 지침 2010/63 UE 준수 EMC 3349 (138-14-07) 이탈리아 D.Lgs 26/2014 고 개정된 "가이드에는 관리 및 사용의 실험실 동물"²³.

참고: 사용, 이전 여성의 타고 난된 C57Bl/6 (7-8 주 이전) 마우스 했다 acclimatized 로컬 물고기 조건에 적어도 7 일 동안 (실내 온도: 20-24 ° C, 상대 습도: 40-70%; 12-h 빛 어두운 주기에), 표준 설치류 차 우에 대 한 무료 액세스 하는 데와 부드럽게 탭 물입니다.

1. Intratracheal Bleomycin와 쥐의 치료

1. 내부 tracheal 점^12,,1314에 대 한 장비를 준비 합니다.
2. 2.5% 산소와 혼합 설정 isoflurane 기화에 연결 된 마 취 약 실에 쥐를 넣....

결과

폐 섬유 증 장애의 자연 해상도 3 주 후이 모델의 한계를 강조 하는 단일 bleomycin 관리 및 적당 한 구조 변화를 관찰 했다. 예방 치료만 임상 연습¹⁷나타내지 않는 좁은 치료 창 때문 수행 될 수 있습니다.

여기, 우리는 이중 bleomycin intratracheal 주입의 우리의 프로토콜은 쥐¹⁸에 오래 견 딘 폐 섬유 증을 개발할 수 보여 줍니다. 실험 설계는 그림 1^19,,2021에 표시 됩니다. 이 연구의 목표는 비 침범 성 이미징 기술로 쥐.......

토론

많은 연구 그룹 새로운 약물을 개발에 초점을 맞추고 IPF의 치료에 불구 하 고 현재 2만 사용할 수 있습니다 환자에 대 한. 의료 긴급 하기 때문에 더 효과적인 치료⁷ 을 찾이 필요가 폐 transplantationis 4-5 년²⁶의 생존을 머리말을 붙이는 수. 변환 의학 및 신약의 개발에 대 한 필수적인 전제 조건 어떤 중재 연구는 병원에서 성공의 예측에서 IPF의 기능을 모방 하는 동물 모델의 가용성 이다. 그러나, 기존의 폐 섬유 증 동물 모델의 유용성은 아직 논란이²⁷. 우리는 bleomycin¹⁸ 그림 1설명 된 대로의 이중 주입을 필요로 하는 폐 섬유 증의 새로운 마우스 모델을 개발 한다. 이미징 기술은 질병 진행 및 치료에 약리 응답을 시각화 하기 위해 강력한 도구입니다. 이 동물 모델은 더.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
FMT 2500 형광 단층 촬영 시스템	Perkin Elmer Inc.	실험적 빌더
MMPsense 680	Perkin Elmer Inc.	NEV10126	빛으로부터 보호하고 프로브를 4°C에 보관하십시오. C
TrueQuant 소프트웨어	Perkin Elmer Inc.
여성 근친 C57BL/6	San Pietro NatisoneHorst, 네덜란드 (UD),		사용하기 전에, 동물들은 적어도 5일 동안 현지 비바리움 조건에 순응하였습니다.
이소플루란	ESTEVE 스파	571329.8	흡입하지 마십시오
자동 세포 카운터	Dasit XT 1800J	실험용 빌더
식염수, 0.9% 염화나트륨 (NaCl)	Eurospital	15A2807
Quantum FX Micro-CT 스캐너	퍼킨 엘머 Inc.
스트렙토마이세스 버티실러스(Streptomyces Verticillus)의 블레오마이신 황산염	시그마	B2434
자동 조직 프로세서	ATP700 Histo-Line Laboratories	ATP700
임베딩 시스템	EG 1160 Leica Biosystems	EG 1160
로터리 마이크로톰	Slee Cut 6062
디지털 슬라이드 스캐너	NanoZoomer S60, Hamamatsu Photonics
NIS-AR 이미지 분석 소프트웨어	니콘
마송 s Trichrome Staining	Histo-Line Laboratories
10% 중성 완충 포르말린	Sigma	HT5012-1CS
Penn-century 모델 DP-4M 드라이 파워 인슐플라터	Penn-century	DPM-EXT
PE190 마이크로 의료용 튜브	2biological instruments snc	BB31695-PE/8
바늘 없는 주사기 5mL	Terumo	SS*05SE1	피스톤의 보드를 가위로 자릅니다
Hamilton 0.10 mL (모델 1710)	Gastight	81022
Discofix 3-way Stopcock	Braun	4095111
바늘이 있는 주사기 1 mL	Pic 용액	3,071,260,300,320	바늘 없이 사용
플라스틱 공급 튜브 18 ga x 50	mm 2biological instruments snc	FTP-18-50	팁을 비스듬히 자릅니다.

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