이 문서에서는 대동맥 풍선 부상 후 murine 모델 myointimal 증식 (수소)의 개발 연구를 보여줍니다.
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이 논문에서
요약
초록
동물 모델의 사용은 수소, 동맥 협 착 증에 대 한 하나의 주요 원인의 더 나은 이해를 위해 근본적 이다. 이 문서에서는, 큰 동물에 설립된 선박 부상 모델 비교는 murine 풍선 노출 모델을 설명 합니다. 풍선 카 테 터 대동맥 노출 모델 임상 설정을 모방 하 고 유사한 pathobiological 및 생리 적 변화를 리드. 간단히, 대동맥 abdominalis에 수평 절 개 후, 풍선 카 테 터 혈관에 삽입, 팽창, 고 됩니다 retrogradely 소개. 풍선의 인플레이션 intima 상해 및 선박의 overdistension 이어질 것입니다. 카 테 터 제거 후 대동맥 절 개 한 stiches 함께 종료 됩니다. 이 문서에 표시 된 모델은 재현, 수행, 쉬운 및 신속 하 고 안정적으로 설정할 수 있습니다. 그것은 특히 비싼 실험 치료제, 경제적인 방식으로 적용 될 수 있는 평가 적합 합니다. 다른 녹아웃 마우스 종자를 사용 하 여 수소 개발에 다른 유전자의 영향 평가 될 수 있다.
서론
동맥 협 착 증 관상 동맥 및 주변 동맥에 병 적 상태와 환자1의 사망률에 큰 효과가 있다. 1 기본 병 적인 메커니즘은 myointima 증식 (MH), 증가 확산, 마이그레이션, 및 혈관 평활 근 세포 (SMC)2에서 세포 외 기질 단백질의 합성에 의해 특징입니다. SMC는 선박의 미디어 계층에 있으며 루멘의 표면에 자극에 따라 마이그레이션할. 물질로 신호 등 성장 인자, cytokines, 셀 연락처, 지질, 기질 구성 요소, 기계적 전단 고 힘3,4,,56을 스트레칭. 부상 병 적인 또는 의원 성, 혈관 벽의 내 피 세포 및 평활 근 세포 손상 원인 및 염증 성 반응, 자극 고 따라서 수소7.
다른 동물 모델 동맥 상해 및 myointima 증식 연구를 현재 사용할 수 있습니다. 큰 동물 같은 돼지 또는 개 인간과 유사한 동맥 및 관상 동맥 해부학을 공유의 장점은 특히 혈관 기술, ....
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프로토콜
동물은 실험실 동물의 원칙에 대 한 가이드 준수 인도적인 치료를 받은 하 고 준비 하 여 연구소의 실험 동물 자원, 건강의 국가 학회에 의해 출판. 모든 동물 프로토콜 ('Amt에 Gesundheit und Verbraucherschutz, 타트 (건강 및 소비자 보호를 위한 사무실) 함부르크') 책임 있는 지방 기관에 의해 승인 되었다.
1. 카 테 터 준비
참고: 카 테 터에 관한 정보에 대 한 테이블의 자료 를 참조 하십시오.
- 카 테 터 홀더에서 카 테 터를 가져가 라.
- 밖으로 원심 포트를 통해 루멘에서 guidewire를 당겨.
- 카 테 터의 원심 끝에 cyanoacrylate 접착제 한 방울 넣어.
주의: 라텍스 또는 니트 릴 장갑을 착용 한다. - 카 테 터의 RX 포트에는 guidewire를 놓고 원심 포트 루멘을 통해 사전. 나중에, 당겨는 guidewire 다시 약간 공간을 두도록 ~ 5 mm의 끝에.
- 접착제를 건조 수 있도록 5 분 기다립니다.
- guidewire를 이동, 수정 되어야 합니다. 그것은 여전히 모바일, 단계 1.3-1.6을 반복....
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결과
풍선 노출은 쥐에 있는 수소의 개발 연구에 적합 한 모델. 동물 수술에서 잘 복구와 우수한 건강 상태 후 작업을 표시 합니다. 우리는 수술으로 인해 3% 사망률 보다 적은 50 쥐에이 모델을 설립. 그림 1B -C 키 수술 단계를 보여줍니다. 따라 피부 절 개 후는 교육 알바, 대동맥 abdominalis식별. Microsurgical 클램프 (그림 1B)를 배치 합니다. 대동맥의 한가운데에 작은 절 개, 배와 역행 하는 혈액의 흐름 (그림 1C)의 방향에 대 한 슬라이드에 풍선 카 테 터를 설정. 팽창 된 풍선의 운동 된다고 intima의 하 고, 동시에, 그릇의 overdistension에 이끌어 낸다. 대동맥 절 개 한 stiches 함께 종료 .......
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토론
이 문서는 myointimal 증식 개발 연구는 murine 모델을 보여 줍니다 고 기본 병 적인 프로세스의 탐사와 새로운 약물 이나 치료 옵션의 테스트 수 있습니다.
이 프로토콜의 가장 중요 한 단계는 대동맥의 노출입니다. 으로 과도 한 노출 동맥 류 형성과 모델 실패 이어질 것입니다이 단계 동안 특별 한 주의 지불 합니다. 다른 한편으로, 노출 충분히 수행 됩니다, 너무 작은 myointima 개발할 것입니다. 따라서, 노출의 강도 결과이 동물 모델의 성공에 결정적 이다.
수술 절차에 관하여 그릇의 두 벽 선박 patency의 초기 실패에 발생할 수 있습니다 stiches를 설정 하 여 관통 하지는 중요 하다. 우리는 우리가 쥐18의 복 부 대동맥에서 혈관 협 착 증을 유발 하는 마우스 모델을 설명 이전 했습니다. 그러나,이 고 대부분의 다른 모델만 제공 매우 적은 양의 조직 분석에 .......
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
저자는 그녀의 기술 지원에 대 한 크리스티안 Pahrmann 감사합니다.
D.W. 최대 kade 수 있다 재단에 의해 지원 되었다. T.D. 받은 보조금 다른 Kröner Fondation (2012_EKES.04)와 도이치 가운데 (DE2133/2-1_. S. S. 도이치 가운데 (DFG;에서 연구 보조금을 받은 SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 10-0 Ethilon 봉합사 | Ethicon | 2814G | |
| 3 mL 주사기 | BD 의료 | 309658 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| 5-0 프롤렌 봉합사 | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 프롤렌 봉합 | 사 Ethicon | 8706H | |
| 산성 Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | 삼색 염색 |
| 항원 회수 용액 | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | 삼색 염색 |
| Bepanthen 눈과 코 연고 | Bayer | 1578675 | Eye 연고 |
| Betadine 용액 | Betadine Purdue Pharma | NDC : 67618-152 | |
| C57BL / 6J | Charles River | 재고 번호 000664 | |
| 클램프 애플리케이터 | Fine Science Tools | 18056-14 | 턱 치수: 4 x 0.75 mm 길이 : 13 mm |
| 콜라겐 3 | abcam | ab7778 | 항체 |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| 당나귀 안티 염소 IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | 2 차 항체 |
| 당나귀 안티 Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | 2 차 항체 |
| 당나귀 안티 토끼 IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | 2 차 항체 |
| : 당나귀 anti-Rabbit IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | 2 차 항체 |
| : 에탄올 70 % | Th. Geyer | : 2270 | |
| 에탄올 : 96 % | Th. Geyer | : 2295 | |
| 에탄올 절대 | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | 항체 |
| 집게 미세 | 과학 도구 | 11251-20 | |
| 집게 표준 | Fine Science Tools | 11023-10 | |
| 빙하 아세트산 | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| 이발기 | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparin | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 IE/mL |
| 고온 소작 키트 | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | 차단 솔루션 |
| Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
| Microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine - 4mm |
| MINI TREK 관상동맥 확장 카테터 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange | Abbott | 1012268-06U | |
| 몰리브다토인산 수화물 | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| 바늘 홀더 | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
| Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | 전자 현미경 과학 | #157135S | |
| Ponceau S 용액 | Serva 전기영 | 33427 | 트리크롬 염색 |
| 1차 항체 희석제 | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Mounting solution | Thermo Fischer | P36930 | 면역형광 염색 슬라이드용 장착 솔루션 |
| 교체 가능한 미세 팁 | Bovie | H101 | |
| Resorcin-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Trichrome staining |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| 가위 | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| 가위 Vannas 스타일 | Fine Science Tools | 15000-03 | |
| 2차 항체 희석제 | Dako | S0809 | |
| 속효성 접착제 MINIS 3x1g | UHU | 45370 | 시아노아크릴레이트 |
| 슬라이드 랙 | Ted Pella | 21057 | |
| SM22 | abcam | ab10135 | 항체 |
| SMA | abcam | ab21027 | 항체 |
| 염색 접시 | Ted Pella | 21075 | |
| 수술 현미경 | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrillar | Ethicon | 431962 | 흡수성 지혈 |
| Transpore 수술 테이프 | 3M | 1527-1 | |
| U-100 인슐린 주사기 | BD 의료 | 324825 | |
| 용기 확장기 | 미세 과학 도구 | 18603-14 | |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Weigerts 철 헤마톡실린 키트 | Merck | 1.15973.0002 | 트리크롬 염색 |
| Xylene | Th. Geyer | 3410 |
참고문헌
- Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).
- Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. Intimal prol....
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재인쇄 및 허가
