포화 지방산은 세 라마 이드 관련 된 대 식 세포 세포 죽음을 유도

요약

우리는 murine 기본 세포 골 수 세포에서 파생 하는 스트레이트-앞으로 방법을 설명 하 고 BSA 지방산을 준비 하는 간단한 방법 변화. 포화 지방산은 대 식 세포 세포 죽음을 일으킬 수 있다 그리고 이러한 세포의 죽음은 확실히 세 라마 이드 레벨의 세포 축적와 관련 다음 설명 합니다.

초록

대 식 세포는 매우 상피 지방산 의무적인 단백질 및 지방 지방산 의무적인 단백질을 표현 한다. 그들은 적극적으로 호응을 포화 및 불포화 지방산, 면역 기능 조절에 중요 한 역할을 수 있습니다. 수많은 연구 다양 한 지방산, 포화 또는 불포화, 세포 성장 및 기능에 다른 영향을 보유. 그러나, 지방산 준비를 위해 사용 하는 방법 다는 비 생리 적인 결과 이어질 수 있습니다. 혈 청 알 부 민, 자연 캐리어 포유류 주변 혈액에서 지방산은 지방산 비누의 독성을 최소화 포유류 세포에서 지방산의 기능을 공부 하 공액 지방산의 나트륨 소금 복잡 한 성형에 대 한 것이 좋습니다. 따라서, 간단 하 고, 상대적으로 빠른 난방 및 메서드 sonicating 개발 이며 BSA 지방 산 성 어원이 형성에 대 한 여기에 제시. 우리는 포화 지방산, 특히 스 테아 르 산 마우스 골 수 유래 세포에 심각한 세포 죽음을 유도 사용 하 여 프로토콜을 설명 합니다. 우리는 더 포화 지방산 유도 된 세포 죽음은 긍정적으로 축적 된 세포 세 라마 이드 수준 연관 보여 줍니다. 이 메서드는 다른 포유류 세포에서 지방산의 영향 연구에 대 한 확장할 수 있습니다.

서론

지방산이 에너지 대사에서와 다른 종류의 세포 막 인지질 합성에 중요 한 역할. 지방산은 낮은 수성 가용성이 있다. 지방산의 적절 한 준비는 포유류 세포에서 지방산의 생물 학적 기능을 공부를 위한 중요 한 중요성 이다. 지방산 에탄올 준비가 때 많은 지방산¹상대적으로 낮은 농도 에서도 세포 막에 그들의 독성 비누 (세제) 효과 보여줄 수 있습니다. 무료 지방산은 혈 청에 대 한 자연, 주요 전송으로 혈 청 알 부 민 지방산 배달에서 생체 외에서 지방산 기능 분석 실험^2,,34에 대 한 좋은 통신사를 간주 됩니다. 그러나, 지방산 및 혈 청 알 부 민 켤레의 준비의 세부 대개 하지 사용할 수 있습니다 지방산을 사용 하 여 많은 연구 논문 출판 되었습니다 비록.

대 식 세포는 매우 표 피 지방산 의무적인 단백질 및 지방 지방산 의무적인 단백질^5,6,,....

프로토콜

프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 루이스 빌 대학에 의해 승인 되었다.

1. 마우스 골 수 유래 세포 (BMDMs)

1. Euthanize CO ₂를 사용 하 여 6에 8-주 오래, 건강 한 야생 타입 마우스. 폼 보드로 고정 하 고 그것이 젖 었 때까지 70% 에탄올 스프레이. 집게와가 위 경골/대 퇴 골 뼈를 제거 합니다. 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) x 5 mL 1와 페 트리 접시에 넣어. 무 균 조건 하에서 모든 절차를 수행 합니다.
2. 오픈는 시저와 경골/대 퇴 골 뼈의 양쪽 끝에서에서 잘라 무 균 조직 문화 후드. 15 mL 튜브에 PBS + 2% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 25g 바늘 뼈를 플러시.
3. 500 x g, 4 ° C 5 분 대에 골 수 세포를 원심
4. 미만 1 분 9 mL 1 x PBS 가진 즉시 Dilute 위해 lyse 적혈구 (RBC)를 1 mL 붉은 혈액 세포 세포의 용 해 버퍼에 셀 펠 릿 resuspend. 1.3 단계에서 원심 분리기 다시입니다. supernatants 가만히 따르다.
5. 셀 펠 릿 10 mL 1 x PBS에 resuspend, 세포 파편/덩어리를 제거 하려면 다른....

결과

비만에 혈 청 자유로운 지방산 농도 증가합니다. 전문 식 세포로 세포 적극적으로 차지 지방산 호스트 항상성 유지를 합니다. 이 프로세스 동안 오버 로드 된 지질 대 식 세포 세포 죽음을 유도 수 있습니다. 이 위해, 우리는 BMDMs에서 체 외에 식이 지방산 및 흐름 cytometric 얼룩을 사용 하 여 측정 된 대 식 세포 세포 죽음의 비만 수준으로 교양. BSA 제어, 포화 지방산에 비해 특히 스 테아 르 산, 유도 BMDMs. 죽은 세포 Annexin V와 7-AAD (그림 1a-b) 스테인드 이중 긍정적인 채우기로 표시 했다 중요 한 세포 죽음. 메모의 불포화 지방산은 상당한 대 식 세포 세포 죽음⁵을 유도 하지 않았다. 데이터는 vivo에서무료 포화 지방산의 증가 수준의 독성 효과 제안합니다.

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토론

지방 산 성 해결책의 적절 한 준비는 지방산의 생물학적 기능 연구에 중요 한 중요성의 이다. 지방산의 중립화 수성 해결책에 있는 그것의 가용성을 증가 시킵니다. 그러나, 특히 포화 지방산, 지방산의 나트륨 염 우리가 관찰 물 또는 PBS에서 낮은 용 해도의 여전히 있습니다. 한 가지 방법은 지방산¹해산 있도록 95-100% 에탄올을 사용 하는. 이 메서드를 사용 하 여 셀에 높은 독성 적은 독성 불포화 지방산에 대 한 낮은 농도 에서도 관찰 될 수 있습니다. 지방 산 성 솔루션을 준비 하는 또 다른 방법은 지방산이 최적의 조건, 그들의 단위체 양식^9,11솔루션에 남아 있는 메 틸-β-cyclodextrin 배달 시스템으로 활용 하는 것입니다. 같은 방법으로 준비 하는 지방산은 정상적인 기능, 나타나지만 메서드를 수행 하는 것은 복잡. 메 틸-β-cyclodextrin 세포 성장에 미.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
CPX 초음파 수조	Bransonic	모델 2800
팔미틴산 나트륨 (PA)	Nu-Chek Prep, Inc.	S-1109	MW 278
스테아린산 나트륨 (SA)	Nu-Chek Prep, Inc.	S-1111	M.W. 306
소 혈청 알부민 (BSA), 무지방산	Fisher Scientific	9048-46-8
마우스 대식세포 콜로니 자극 인자 (mM-CSF)	세포 신호 기술,  Inc.	5228
RPMI 1640	VWR International	71002-878
Annexin V, Alexa Fluor 488 conjugate	Fisher Scientific	A13201
7-AAD	BD Biosciences	559925
Monoclonal anti-ceramide 항체 (mouse IgM)	Sigma	C8104-50TST	Clone: MID 15B4
Goat anti-mouse IgM 항체, µ chain, FITC conjugate	Sigma	AP128F
고정 버퍼	Biolegend	420801
Permeabilization 버퍼	Ebioscience	4307693
Red Blood Cell Lysis Buffer	Sigma	11814389001
Annexin V 결합 완충액	BD Biosciences	556454
L929 세포	ATCC	CCL-1
Corning  셀 리프터	Fisher Scientific	07-200-364
참고: MW는 분자량입니다.