세포 막 확장 하 고 공부 하는 암 세포 접착 역동성에 있는 그들의 역할의 특성

요약

이 연구는 유틸리티 양적 세포 막 확장 측정 및 셀의 접착 능력의 상관 관계의 용이성을 보여 줍니다. 대표적인 예로 우리 보여 여기 그 Dickkopf 관련 단백질 3 (DKK3) 증가 lobopodia 형성을 촉진 하 고 adrenocortical 암 접착 력 셀 세포 생체 외에서.

초록

세포 막의 확장 레 퍼 토리 그들의 접착제와 철새 잠재력을 포함 하 여 암 세포의 다양 한 악성 동작을 조절 한다. 정확 하 게 분류 셀 확장을 계량 하 고 세포의 접착 능력에 미치는 영향을 측정 하는 능력은 어떻게 셀 신호 이벤트 영향 암 세포 행동 및 공격 성을 결정 하는 중요 한. 여기, 우리가 시험관에서 설계 및 방법의 사용은 셀 확장 정량화 함께에서 설립 체 외에 모델에 접착 용량 분석 결과와 adrenocortical 암 (ACC)에 대 한 설명. 특히, 우리는 효과 DKK3의 putative 종양 억제기와 프로 차별화 요소, ACC 셀 라인, 소프트웨어-13의 막 확장 표현 형에 테스트합니다. 비교적 간단 하 고 신뢰할 수 있는, 제공 하기 위해 이러한 분석을 제안 하 고 쉽게 해석할 통계를 다양 한 실험 조건에서 이러한 특성을 측정 합니다.

서론

Dysregulated WNT 신호 adrenocortical 악성¹에 중요 한 역할을 한다. 이 연구에 사용 하는 방법 조사 여부 DKK3의 입을, WNT 신호의 부정적인 레 귤 레이 터 부 신 피 질에서 dedifferentiation 이벤트 나타내고 셀 확장 레 퍼 토리 변화의 맥락에서 종양의 형성을 촉진 한다. DKK3 38 kDa 분 비는 N 맨끝 신호 펩 티 드와 당단백질 이며 그 적용된 식 세포 주기 검거 귀착되 공격적인 악성 행동을 저해 및 엽 상피 반전 이전 학문은 설명 했다 전환².

Adrenocortical 암 (ACC) 및 다른 암 악성 동작, 부분에서 주변 표면으로 인터페이스 하는 종양 세포의 기능에 의해 영향을 포함 하 여 기질에 종양 세포 내 습을 촉진 하 고 마이그레이션³. 암 진행에 특정 세포 막 확장의 역할은 filopodia 형성을 통해 주로 다양 한 문맥에서 점점 시연 되 고. 예를 들어 L-타입 칼슘 채널의 overexpression filopodia 형성을 유도 하 여 종양 세포 침공⁴홍보 발견 되었습니다. 마찬가지로, Fascin, ....

프로토콜

1. 셀 확장 특성

1. SW-13, SW-신, 그리고 남서 DKK3 세포는 표준 습도 인큐베이터 37.0 ° c, 5% CO₂ Dulbecco의 수정이 글 중간에 보충 10% 태아 둔감 한 혈 청 및 10000 U/mL 페니실린과 스 ('성장 매체'로 지정)에 유지 합니다.
   1. Hemocytometer를 사용 하 여 셀을 계산 하 고 별도 6 잘 플레이트에 SW, SW-신, 그리고 남서 DKK3 라인에 대 한 잘 당 5000 셀 접시 하룻밤 불 임 유리 coverslips에 성장 매체에 성장.
2. 각 잘 하룻밤 성장 성장 매체 발음, 후 따뜻한 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)의 1 mL로 세포 세척 하 고 10 분 동안 3.7% 포름알데히드의 1 mL와 함께 셀을 수정.
3. 30 분 세척 초과 대 한 0.05% 크리스탈 바이올렛의 1 mL와 함께 각 잘에서 aspirate 포름알데히드와 얼룩 셀 멀리 1 mL 이온된 물 3 세척을 사용 하 여 염료.
   참고: 염료의 통풍 관의 수준에 따라 몇 가지 추가 세척 배경 셀 시각화 홍보 얼룩을 제거 하려면 필요할 수 있습니다.
   1. 잘 밀고 집게를 사용 하 여 coverslips를 검색 하 고 그들에 게 아래로 얼굴을 배치 분명 장착 시 ....

결과

위의 분석 실험을 사용 하 여 셀 확장 형태학 및 세포 접착 속성에 DKK3 overexpression의 효과 설립된 ACC 셀 라인 SW-13, 체 외에서테스트 되었습니다. 셀 DKK3 overexpressing는 안정적으로 남서 13 셀 Myc DDK 태그 pCMV6-항목/DKK3 플라스 미드 벡터 및 소프트웨어 DKK3로 지정 된 transfecting에 의해 생성 되었다. 마찬가지로, 안정적으로 빈 벡터 pCMV6 항목과 transfected 세포 transfection 고 뿌리고 컨트롤로 생성 되었고 SW-네오로 정의. SW-13 셀 추가 부모 셀 컨트롤로 사용 되었다. SW-DKK3에서 DKK3의 overexpression 양적 실시간 PCR에 의해 확인 되었다 그리고 서쪽 오 점 기술⁸.

간단.......

토론

여기 우리는 생체 외에서 양적 방법 용이성, 몇 구 덩이-폭포, 그리고 다양 한 테스트 조건에 대 한 적용할 수 있는 안정적인 재현성 셀 확장의 특성을 설명 합니다. 또한, 간단 하 고, 정량 접착 및 운동 성 분석 실험 세포 막 확장에 관찰된 변경의 잠재적인 기능적 중요성을 상관 관계를 동시에 수행할 수 있습니다.

그러나, 이러한 방법을 몇 가지 잠재적인 제한이 발생할 수 있습니다. 첫째, 여기 셀 확장의 종류를 식별 하기 위해 지정 된 표준 adrenocortical 소프트웨어-13 셀 형태학에 기초 하 고 따라서 가능성이 필요한 분류 매개 변수 다른 세포 유형 및 실험 조건에 적용 될 때에 구체화. 또한, 연장된 시간 과정 실험, 세포 주기 세포 죽음에 세포 막 확장 변경의 잠재적인 영향 간주 해야 합니다.

둘째, 프로토콜 간 관찰자 유사 인해 분석 결과 재현성을 제한할 수 있는 심사 관에 의해 잠재적인 개별.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Dulbecco의 수정된 독수리 매체 (DMEM)	ThermoFisher	11965-092	태아 소 세럼과 페니클린 및 스트렙토마이신으로 보충
. Deulbeco의 인산염 완충 식염수	Sigma-Aldrich	D8537	1X 용액, 직접
사용 3.7% 포름알데히드	Sigma-Aldrich	F8775	희석 주식 용액
0.05% 크리스탈 바이올렛	Harleco	192-12	희석 원료 용액
탈이온수	NA	NA
NA 현미경 400X 배율	NA	NA	NA
6웰 플레이트	Corning	353046
NA 세포 해리 용액 비효소 1X	Sigma-Aldrich	C5914	1X 솔루션, 직접 사용