생체 외에서 스모 E3 리가 활동 공부 SUMOylation 분석 결과

Wan-Shan Yang; Mel Campbell; Hsing-Jien Kung; Pei-Ching Chang

doi:10.3791/56629

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방법 논문

생체 외에서 스모 E3 리가 활동 공부 SUMOylation 분석 결과

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DOI:

10.3791/56629

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2018년 1월 29일

Wan-Shan Yang¹ , Mel Campbell² , Hsing-Jien Kung²^,³^,⁴^,⁵ , Pei-Ching Chang¹^,⁶

¹Institute of Microbiology and Immunology, National Yang-Ming University, ²UC Davis Cancer Center, University of California, Davis, ³Department of Biochemistry and Molecular Medicine, University of California, Davis, ⁴Institute for Translational Medicine, College of Medical Science and Technology, Taipei Medical University, ⁵Division of Molecular and Genomic Medicine, National Health Research Institutes, ⁶Center for Infectious Disease and Cancer Research, Kaohsiung Medical University

이 논문에서

요약

유비퀴틴 ligases와 달리 몇 E3 스모 ligases가 확인 되었습니다. 이 수정 된 생체 외에서 SUMOylation 프로토콜 생체 외에서 재구성 분석 결과 의해 소설 스모 E3 ligases를 확인 할 수 있다.

초록

작은 유비퀴틴-같은 한정자 (스모) 수정 신호 변환 단백질 단백질 상호 작용에 변조를 통해 주로 중재 하는 중요 한 포스트 번역 상 수정 (PTM) 이다. 유비퀴틴 수정 마찬가지로 SUMOylation E1 활성화 효소 (SAE1/SAE2), e 2-활용 효소 (Ubc9), 및 E3-리가 (즉, PIA 가족, RanBP2, 및 Pc2)을 포함 하 여 순차적 효소 캐스케이드 감독 이다. 그러나, 다른 ubiquitination, E3 리가 비 본질적인 반응 하지만 않습니다 스모 활용에 대 한 정밀도 효능을 제공. 단백질 SUMOylation 수정 기판 특정 항 체와 스모 특정 항 체와 immunoblotting vivo에서 immunoprecipitation 통해 분석 하 여 확인할 수 있습니다. 그러나, 단백질 스모 E3 리가 활동의 데모 SUMOylation 분석 실험을 사용 하 여 정제 효소, 기질, 그리고 스모 단백질의 생체 외에서 재구성을 해야 합니다. 때문에 체 외에 반응에서 일반적으로 SAE1/SAE2 및 Ubc9, 혼자 스모 활용에 대 한 충분 한, putative E3 리가 여 SUMOylation의 향상은 항상 검출 하기 쉽지. 여기, 우리는 수정 된 생체 외에서 스모 수정에서 시험관에 재구성 시스템을 사용 하 여 일관 되 게 식별 SUMOylation 프로토콜 설명 합니다. 바이러스 성 스모-2/3 E3 리가 K bZIP 촉매로 활성 정화 단계 프로토콜도 제공 됩니다. 순화 K bZIP의 SUMOylation 활동 p53, 스모의 잘 알려진 대상에 표시 됩니다. 이 프로토콜 없습니다만 사용할 수 있습니다 elucidating 소설 스모 E3 ligases, 뿐만 아니라 그들의 스모 paralog 특이성을 공개.

서론

스모 수정 처음 단백질 안정성¹을 조절 하는 가역 포스트 번역 상 수정 (PTM)으로 확인 되었습니다. 뿐만 아니라 직접 활용, 스모도 장착할 수 비 공유 상호 작용을 통해 단백질에 스모 상호 작용 주제 (심즈)². Tyrosyl-Src 상 동 2 (SH2)를 은닉 하는 분자에 의해 인 산화의 바인딩 또는 phosphotyrosine 바인딩 (PTB) 도메인³^,⁴, 스모 수정 제공 위한 추가 상호 플랫폼 선택 포함 하는 SIM effector 단백질⁵^,⁶모집 신호 변환의 규칙, 이외에 transcriptional 요인과 분자를 개장 하는 chromatin의 SUMOylation 조절 유전자 식⁷^,⁸을 제공 합니다. 게놈 넓은 SUMOylation 패턴의 연구는 스모 수정은 긍정적인⁹^,¹⁰ 또는....