환자에서 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립

요약

다음 프로토콜 환자 파생 된 연 조직 육 종 (STS)의 주 문화는의 설립에 집중 한다. 이 모델 분자 배경 및 약리 프로필 이러한 드문 악성 종양의 더 나은 이해를 우리를 도울 수 및 STS 관리를 개선 하기 위한 추가 연구에 대 한 출발점을 대표할 수 있었다.

초록

연 조직 sarcomas (STS) 어려운 진단, 분류 및 관리와 함께 다른 유형의 악성의 스펙트럼을 나타냅니다. 날짜 하려면,이 드문 단단한 종양의 50 이상 조직학 하위 확인 되었습니다. 따라서, 그들의 특별 한 다양성 및 낮은 발병 률,이 종양의 생물학의 우리의 이해 여전히 제한 됩니다. 환자 파생 문화 STS 이상과 약리학 연구에 이상적인 플랫폼을 나타냅니다. 우리는 따라서 종양 표본을 외과 절제술을 받은 환자에서가 걷이에서 시작 하는 STS의는 인간의 전 임상 모델을 개발 했다. STS 세포 배양 환자 파생 콜라 소화에 의해 수술 표본에서 얻은 고 여과 의해 분리. 셀 계산, 시드, 그리고 표준 단층 문화에서 14 일에 대 한 되었고 다운스트림 분석 처리. 분자 또는 제약 분석을 수행 하기 전에 STS 주 문화의 설립 cytomorphologic 기능, 그리고 가능한 경우, 평가 통해 확인 되었다 immunohistochemical 마커. 이 메서드는 1)이 제대로 탐험된 악성의 자연의 역사를 공부 하 고 2) 그들의 행동의 메커니즘에 대 한 자세한 노력에 다른 약물의 효과 테스트 하는 유용한 도구를 나타냅니다.

서론

모든 고체 종양^1,2, 1%에 대 한 간 엽 기원 회계의 이질적인 장애의 스펙트럼을 포함 하는 부드러운 조직 sarcomas (STS) 그리고 이상의 50의 존재를 인식 하는 새로운 세계 보건 기구 분류 다른 하위³. 이 중, 가장 일반적인 histotypes 있으며 체형 육 종 또는 liposarcoma leiomyosarcoma, 15%와 모든 성인 STS, 각각^4,5의 11%를 차지. STS는 신체의 다른 부분에서 개발할 수 있습니다, 비록 사지 그리고 retroperitoneum 60%와 20%의 경우, 각각⁶에서 발생 하는 가장 일반적인 사이트는.

지역화 된 질병에 대 한 치료의 초석은 넓은 외과 절제술, 보조 및 neoadjuvant 요법의 혜택은 아직 명확 하지 않다 고⁷선택 된 경우만 간주 됩니다. 전이성 설정에서 화학 요법 치료의 표준 이지만 제한 된 결과⁸

프로토콜

STS 세포 대량 수술 환자 STS에서에서 excised 종양 으로부터 격리 됩니다. 프로토콜 로컬 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다 하 고 좋은 임상 연습 가이드라인과 헬싱키 선언에 따라 수행 됩니다. 모든 환자는 연구에 참여 하는 것 서 면된 동의 했다. 수술 표본 경험된 육 병리학 자에 의해 분석 하 고 수술의 3 시간 이내에 처리 됩니다.

1. 종양 표본 수집 및 처리:

1. DMEM 낮은 포도 당 매체 파라핀 필름으로 밀봉의 50 mL를 100 mL 무 균 소변 용기에 육 병리학의 도움으로 종양 표본을 수집 합니다.
2. 종양 절제 후 3 h의 최대 4 ° C에서 샘플을 저장 합니다.
3. 메 마른 조직 문화 후드 아래 모든 다음 단계를 수행 합니다.
   1. 70% 에탄올과 후드를 소독 하 고 멸 균 장갑을 착용.
   2. 70% 에탄올 (사용 멸 균 거 즈)와 철강 inox 족집게를 소독.
   3. 파라핀 영화 소변 컨테이너에서 제거 하 고 삭제.
   4. 70% 에탄올과 소변 컨테이너의 외부 세척.
   5. 광장 페 트리 접시를 엽니다.
   6. 소변 컨테이너를 열고 멸 균된 강철 inox 핀셋을 사용 하 여 사각형 페 트리 접시에....

결과

우리 설계 환자 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립 여기 한 특정 STS histotype¹³에서 얻은 결과의 예를 보고 하는 간단한 방법. 프로토콜, 잘 분화 liposarcoma를 포함 하 여 다른 STS histotypes의 기본 문화의 설립을 위해 사용 되었다 liposarcoma, myxoid liposarcoma, pleomorphic liposarcoma, myxofibrosarcoma, undifferentiated dedifferentiated pleomorphic 육 종, 요점, 및 desmoid fibromatosis입니다.

주 문화의 설립에 대 한 성공률 수술 표본 환자 화학 요법, 방사선 요법으로 치료 또는 치료 하지에서 파생 된에 대 한 54% (24 STS 외과 샘플에서 13 주 문화)를.......

토론

잘 정의 된 전 임상 모델 종양의 분자 배경 명료, 가난한 예 후를 예측 하 고 암 환자에 대 한 새로운 치료 전략을 개발 필요 합니다. 이것은 특히 STS 등 희귀 한 종양에 대 한 중요 한 형태에서 그 높은, 공격적인 잠재적인, 및 임상 행동 STS 생물학 및 환자 관리²¹의 우리의 이해에 도전. 또한, 사용할 수 있는 몇 가지 상업 육 종 셀 라인 엽 종양¹⁸의이 그룹에 대 한 전 임상 조사를 제한 합니다. Ex vivo 모델 따라서 STS에 대 한 귀중 한 연구 리소스를 나타냅니다. 우리는 모델을 완벽 하 게 인간의 체 외에 수술로 절제 종양 조직 (그림 3)에서 시작 하는 STS의 개발. 방법의 최적화 하는 동안 몇 가지 중요 한 문제는 해결 되었고 해결. 첫 번째 문제 우려 수술 치료 및 샘플 처리 사이 시간 간격. 처음에, 종양 표본을 특정 시간 후에 우리의 생물 과학 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DMEM 고포도	EuroClone	ECB7501L
소 태아 혈청	EuroClone	ECS0180D
Glutamine	Gibco	25030-024
Paraformaldehyde 4% 수용액, EM 등급	전자 현미경 과학	157-4-100
페니실린 스트렙토마이신	Gibco	15140122
Triazol 시약	Ambion Life-Technologies	15596018
Trypsin	EuroClone	ECB3052D

당