이 문서에는 다른 긴장, 종, 그리고 다른 장기 나 조직에 사용 하기 위해 적용할 수 있는 FVBN 쥐의 장기에서 플라즈마 넘쳐 흐름을 평가 하기 위한 에반스 블루 염료 메서드를 사용 하 여, 최적화 된, 경제적이 고 간단한 프로토콜 설명 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
혈관 누출 또는 플라즈마 넘쳐 흐름, 원인, 수 있으며 심각한 결과 또는 염증 반응의 증상이 있을 수 있습니다. 이 연구의 원인에 관한 새로운 지식 또는 억제 또는 플라즈마 넘쳐 흐름을 치료 하는 새로운 방법을 궁극적으로 발생할 수 있습니다. 연구원은 가장 좋은 방법 플라즈마 넘쳐 흐름을 공부에 대 한 사용할 수를 포함 하 여 적절 한 도구는 중요 하다. 이 문서에서 우리는 FVBN 쥐의 장기에서 플라즈마 넘쳐 흐름을 평가 하기 위한 에반스 블루 염색 방법을 사용 하 여 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜은 의도적으로 간단를 훌륭한 가능한 정도 하지만 제공 한다 고품질 데이터. 주로 하기 때문에 그것은 쉽게 사용 하 여 평균 실험실 에반스 블루 염료 선정 되었습니다. 우리 효소 neprilysin 플라즈마 넘쳐 흐름에 대 한 맥 관 구조를 보호 수 있습니다 가설에 대 한 증거와 지원을 제공 하기 위해이 프로토콜을 이용 했다. 그러나이 프로토콜을 실험적으로 사용 하 고 쉽게 이해, 예방, 또는 치료에서 중요 한 다른 요소를 포함할 수 있습니다 연구에 대 한 쥐의 다른 긴장에 또는 다른 종에서 많은 다른 장기 또는 조직에서 사용 하기 위해 적응 수 있습니다, 플라즈마 넘쳐 흐름입니다. 이 프로토콜은 광범위 하 게 최적화 및 사용, 경제, 및 재료와 장비,이 프로토콜에 사용 하 여 평균 실험실에 대 한 우수한 만들기의 일반적인 가용성의 용이성 기존 프로토콜과 결합 안정성에서 수정 장기에서 플라즈마 넘쳐 흐름 측정
서론
장기에 혈관 누출 넘쳐 흐름, 참조 또는 누설의 피에서 생산 하는 격차를 통해 혈장의 장기에 모 세관 venules 게시. 이 플라즈마 넘쳐 흐름 또는 증가 혈관 침투성, 선 동적인 응답의 어떤 종류에서 발생할 수 있는 중대 한 결과 있을 수 있습니다. 따라서, 그것은이 현상, 그, 변조기, 원인과 결과, 공부 하 고, 이해는 하 고 마찬가지로, 그 수 사관 좋은 도구 고 프로토콜 들을 공부 하는. 내 피 간격 다양 한 자극을 통해 생성 될 수 있습니다 하지만 일반적으로 endothelia에 tachykinins 펩 티 드 신경 전달 물질의 작용에 의해 생산 됩니다. Undecapeptide tachykinin neuropeptide, 물질 P1증가 플라즈마 넘쳐 흐름에서 결과,이 과정의 주요 자연적 중재자 중 하나입니다.
에반스 블루 염료의 알 부 민-바인딩 속성을 사용 하 여 조사 하 고 혈관 침투성 또는 플라즈마 넘쳐 흐름, 측정 방법 개발 되었습니다, 그리고 일반적으로 그들의 정확도, 단순, 경제, 안전, 그리고 허용 하는 기능에 대 한 알려져 있다는 플라즈마 넘쳐 흐름 여러 조직에서 한 번에 결정 그렇다면 원하는2,
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프로토콜
관심과 동물 (쥐)의 사용에 대 한 모든 해당 국제, 국가, 또는 기관 지침이이 원고에 설명 된 실험에 따라 했다.
이 방법은 사용 FVBN 성인 쥐, 세 16-20 주,이 연구의 목적에 대 한 수를 발견. 1 일 1-5 단계를 포함 하 고 하루 2 단계 6-7 (그림 1)을 포함.
1. 장비 준비
- (권장)으로 케 타 민/xylazine는 마 취약으로 사용 하는 경우 멸 균, 일회용 주사기와 바늘의 충분 한 공급을 보호 합니다. Isoflurane 마 취로 사용 하는 경우 산소 탱크와는 시작 하기 전에 실험에 대 한 적절 한 공급 되도록 isoflurane의 유체 레벨을 확인 하십시오. 또한, 호흡 회로 nosecone 모이고 유도 상자; 연결 호흡 회로에 새로운 목탄 용기를 연결. 산소 설정 하 고 2 단계 약 50 psi를 읽고 확인 하 여 유도 상자를 준비 합니다.
- 37 ° c가 열 패드 설정
- 수술에 대 한 직장 온도 프로브를 준비 합니다.
2. 마우스 준비
이 단계는 마 취,....
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결과
그림 1, 절차의 회로도 표시는 가장 안정적이 고 일관성 있는 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름 값 FVBN 쥐의 장기에서 발견 되었습니다. 이 절차는 일반적으로 작업, 대기 시간의 적어도 48 h 구분의 2 일 걸립니다. 비교할 모든 실험에 일관 되 게 이렇게 훨씬 더, 밖으로 확산 가능 하다. 예를 들어 장기 주 1 격리 후 장기 수 플래시 액체 질소에서 냉동 고-80 ° C에 저장 (1 주에 몇 일) 이내 장기를 신중 하 게 녹고, 따라 그들은 PBS로 세척 고 프로토콜의 나머지 전에 얼룩이. 또한, 비록 조직의 건조 할 수 명시 (150 ° C에서 48 h에 대 한), 조직의 블루 에반스의 추출 절반 formamide 확장할 수 있습니다에서 48-72, formamide에서 시간은 모든 실험에 대 한 일관 된.
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토론
위에서 설명 했 듯이, 플라즈마 넘쳐 흐름의 연구의 원인에 관한 새로운 지식 또는 억제 또는 플라즈마 넘쳐 흐름을 치료 하는 새로운 방법에 궁극적으로 이어질 수 있습니다. 현재 원고에서 플라즈마 넘쳐 흐름 프로토콜 (위)의 성공적인 사용 입증 되었습니다 에반스 파란색 염료를 사용 하 여. 표시 된 데이터를 다시 있지만 NEP는 맥 관 구조를 보호 수 있습니다 가설 플라즈마 넘쳐 흐름에 대 한 이것은 보조 목표 현재,와 함께 기본 목표에 대 한 평균 실험실에서 쉽게 사용할 수 있는 최적화 된 프로토콜을 제시 되는 플라즈마 넘쳐 흐름의 미래 연구입니다. 여기 보고 프로토콜 다른 목표, 동물, 기관, 및 다른 조건, 미래 연구에 적응성에 초점을 맞추고 특히 유용 하기 때문에이 프로토콜은 사용 하 여 단순, 신뢰성, 경제적, 그리고 고려는 일반 일반적인 재료, 시 약, 및 유능한 직원의 가용성. 그러나 그것은 지적 이다,,이 프로토콜 그룹 동물 (8-12 반복 제안)의 당 반복의 공정한 금액을 요구할 것 이다 통계적으로 유효한 결과를 .......
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
저자는 그들의 귀중 한 도움과 편집이이 원고에 대 한 앤디 Poczobutt와 박사 파주시 조리 Leszczynski 감사 하고자 합니다. 국가 심 혼, 폐 및 혈액 연구소 (NHLBI RO1 HL078929, PPG HL014985 RO3 HL095439) 및 학과의 재향 군인의 업무 (가치 평가)에서 받은 보조금으로 지원.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 이소플루란 | Vet One | 200-070 | 흡입 마취 |
| 케타민 | Vet One | 200-055 | 주사 가능한 마취 |
| 자일라진 | Lloyd Laboratories | 139-236 | 주사 가능한 마취 |
| 주사기(10,3 & 1cc) | Becton Dickinson | 309604, 309657, 309659 | |
| 바늘(20G1,23G1 & 26G1/2) | Becton Dickinson | 305178, 305193, 305111 | |
| isoflurane 유도 챔버 | VetEquip | 941443 | 1 |
| 노즈콘 호흡 회로 | VetEquip | RC2 | 설치류 회로 컨트롤러 2 |
| 산소 탱크 | Airgas | UN 1072 | 100% 의료용 |
| 가열 패드 | CWE Inc. | TC-1000 | 온도 컨트롤러 |
| 직장 온도 프로브 | CWE Inc. | 10-09012 | 마우스 |
| 밸런스 (설치류용) | Ohaus | CS 2000 | |
| 수술 도구-가위 | Fine Science 도구 | 15000-00 | Vannas 스프링 가위 3mm 직선 칼날 (절단 용기) |
| 수술 도구-겸자 | Fine Science 도구 | 11151-10 | Graefe extra fine forceps (isolating mouse vessels) |
| 수술 도구-지혈 | Science tools | 13009-12 | Halstead-mosquito 지혈 (둔기 절개, 조직 유지) |
| 수술 도구 -봉합사 드라이버 | Fine Science 도구 | 12502-12 | Olsen-Hegar 봉합사 드라이버 (봉합) |
| 수술 도구-겸자 | Fine 과학 도구 | 11627-12 | Adson-Brown 악어 겸자 (조직 파악, 봉합, 쥐) |
| 수술 도구 - 가위 | Fine Science 도구 | 14110-15 | Mayo 터프 컷 가위 15cm (수술, 해부, 뼈, 쥐) |
| 수술 도구 - 집게 | Fine Science 도구 | 18025-10 | 봉합 묶는 집게 (Millar cath에 사용) |
| 수술 도구 - 가위 | Fine Science 도구 | 14078-10 | Lexer Baby 가위 스트레이트 (수술, 마우스) |
| 수술 도구 - 집게 | Fine Science 도구 | 11254-20 | Dumont # 5 미세 팁 집게 (쥐 혈관, 해부) |
| 수술 도구 - 가위 | Fine Science 도구 | 14082-09 | 해부 가위 12mm (수술, 쥐 마우스) |
| 수술 도구 - 집게 | Fine Science 도구 | 11051-10 | 10cm Graefe 집게 (조직 잡기, 쥐 쥐) |
| 수술 도구-겸자 | Fine Science 도구 | 11251-35 | Dumont 5/45 겸자(혈관용 도입기) |
| 수술 도구-견인기 | Fine Science 도구 | 17012-11 | Weitlaner 견인기 2/3 치아(쥐 수술) |
| 수술 도구-집게 | Fine Science 도구 | 11294-00 | Dumont #4 집게(혈관 격리 쥐, 생쥐) |
| 수술 도구-집게 | Fine 과학 도구 | 11297-00 | Dumont # 7 집게 (조직 잡기, 해부) |
| 수술 도구 - 가위 | Fine Science 도구 | 14058-11 | 터프 컷 홍채 가위 (마우스 해부, 뼈) |
| 수술 도구 - 집게 | Fine Science 도구 | 11009-13 | 톱니 모양, 곡선 Semken 집게 (조직 잡기, 쥐 쥐) |
| 수술 도구 - 지혈 | Fine Science 도구 | 13003-10 | Hartman 곡선 지혈 (무딘 절개, 조직 유지) |
| 수술 도구 - 집게 | Fine Science 도구 | 11006-12 | Adson 톱니 겸자 (조직 잡기) |
| 클리퍼 | Oster | A5 | |
| 테이프 | Fisherbrand | 159015G | |
| 인공 눈물 연고 | Akorn Inc | 13985-600-03 | |
| lidocaine | Hospira | 0409-4277-01 | 2% 주사 가능한 |
| 폴리비닐 카테터 | Tygon | PV-1 | |
| Evans 블루 | 시그마 Aldrich | E2129 | |
| Substance P | Bachem | H-1890 | |
| 헤파린 | Sagent 제약 | 25201-400-10 | 1000 U/ml |
| 식염수 | Hospira | 0409-7138-09 | 0.9% 염화나트륨 |
| 페노바르비탈 | Vortech | 0298-9373-68 | |
| 시트르산 나트륨 | Fisher Scientific | BP327-1 | |
| PBS | 시그마 Aldrich | P4417-50TAB | |
| 블로팅용 Kimwipes | Fisher Scientific | 06-666A | |
| 포름아미드 | Sigma Aldrich | 47670 | |
| 마이크로밸런스 | Denver Instrument | APX-60 | |
| 마이크로퓨지 튜브 | Fisher Scientific | 07-200-534 | |
| 폴리스티렌 96 웰 플레이트 | Becton Dickenson | 351172 | |
| 광도 플레이트 독자 | BioTek | Synergy 2 | |
| 폴리아크릴아미드 젤 | Bio-Rad | 3450014 | |
| 단백질 분자량 표준 | Bio-Rad | 1610374 | |
| Protran 지지 니트로셀룰로오스 | Amersham(GE) | 10600015 | |
| 젤 상자 | Bio-Rad | 1658005 | |
| Tris | Fisher Scientific | BP152-1 | |
| Tween20 | Sigma Aldrich | P-1379 | |
| 염화나트륨 | Fisher Scientific | S271-1 | |
| 일차 NEP 다클론 항체 | R & D 시스템 | AF1182 | |
| 독시사이클린 차우 | 테클라드 (HARLAN) | TD.130750 | |
| FVB/NJ 야생형 마우스 | Jackson | 001800 | |
| 2차 항체(염소 항토끼) | ZyMed | 81-6120 | |
| ECL 솔루션-Western Lightening Plus | PerkinElmer | NEL104001EA | |
| 필름 | 피어스 | 34091 |
참고문헌
- Snijdelaar, D. G., Dirksen, R., Slappendel, R., Crul, B. J. Substance P. Eur J Pain. 4 (2), 121-135 (2000).
- Rubinstein, I., Iwamoto, I., Ueki, I. F., Borson, D. B., Nadel, J. A. Recombinant neutral endopeptidase attenuates substance P-induced plasma extravasation in the guinea pig s....
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재인쇄 및 허가
