Site-Specifically 생성 하는 손쉬운 프로토콜 Acetylated 대장균 에서 단백질

Sumana Venkat; Caroline Gregory; Kexin Meng; Qinglei Gan; Chenguang Fan

doi:10.3791/57061

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방법 논문

Site-Specifically 생성 하는 손쉬운 프로토콜 Acetylated 대장균 에서 단백질

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DOI:

10.3791/57061

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2017년 12월 9일

Sumana Venkat¹^,² , Caroline Gregory³ , Kexin Meng⁴ , Qinglei Gan¹ , Chenguang Fan¹^,²

¹Department of Chemistry and Biochemistry, University of Arkansas, ²Cell and Molecular Biology Program, University of Arkansas, ³Department of Biological Sciences, University of Arkansas, ⁴Fayetteville High School

이 논문에서

요약

유전자 코드 확장 acetylation 단백질을 포함 한 생물 학적 과정의 넓은 범위를 공부 하는 강력한 도구 역할을 합니다. 여기 균질 생성 하기 위한이 기술을 악용 하는 손쉬운 프로토콜 acetylated 단백질 대장균 세포에 특정 사이트에 설명 합니다.

초록

포스트 번역 상 수정 단백질의 특정 위치에서 발생 하는 다양 한 세포질 프로세스에서에서 중요 한 역할을 보여왔다. 그 중, 가역 lysine acetylation 생활의 모든 영역에서 가장 넓게 분배 된 중 하나입니다. 수많은 acetylome 질량 분석 기반 연구를 수행 하는 있지만 더이 상 상속 acetylation 대상의 제한 되었습니다. 가능한 이유 하나 대부분 클래식 생 화 확 적인 방법에 의해 원하는 위치에 순전히 acetylated 단백질을 생성 하기 어렵습니다. 이 문제를 해결 하려면 유전자 코드 확장 기술 cotranslational 설립을 직접 설계 pyrrolysyl-tRNA 합성 변종, Methanosarcinaceae 종에서 그것의 동족 tRNA의 쌍을 사용 하 여 적용 된 관심사의 단백질에 특정 사이트에 acetyllysine의. Histone acetylation의 연구에서 첫 번째 응용 프로그램, 후이 이렇게 다양 한 단백질에 acetylation 연구 촉진 했다. 이 작품에서는, 우리는 호스트 모델 박테리아 대장균 을 사용 하 여 site-specifically acetylated 단백질을 생산 하는 손쉬운 프로토콜을 증명 하고있다. Malate 효소는이 작품에서 데모 예제로 사용 되었습니다.

서론

포스트 번역 상 수정 (PTMs) 단백질의 번역 과정 후 발생 하 고 공유 추가 기능 그룹에서 발생 하는 아미노산 잔류물, 유전자를 포함 하 여 거의 모든 생물 학적 과정에 중요 한 역할을 재생을 전사, 스트레스 반응, 세포 분화, 및 물질 대사¹^,²^,³ 날짜 하려면, 약 400 독특한 PTMs 확인된⁴되었습니다. 게놈과는 프로테옴의 intricacy는 단백질 PTMs로 대부분 증폭 단백질 활동 및 지역화, 고 단백질, 핵 산, 지질, 및 공동 인자⁵등 다른 분자와 상호 작용에 영향을 미칠.

단백질 acetylation 지난 2 년간⁶^,⁷^,^,⁸⁹^,¹⁰^,^1....