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방법 논문

Phenotypical 및 기능 연구에 대 한 인간의 여성 생식 관에서 수지상 세포의 고립

6.2K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/57100

⸱

2018년 3월 13일

 ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, Geisel School of Medicine at Dartmouth

이 논문에서

요약

여기 분리 하 고 그들의 phenotypical 및 기능 특성의 평가 대 한 인간의 여성 재생산 지역에 다른 해 부 격실에서 수지상 세포를 정화 하는 방법을 설명 합니다. 이 메서드는 다른 면역 세포 또는 다른 점 막 조직에서 수지상 세포를 분리 적용할 수 있습니다.

초록

인간의 수지상 세포 (DCs) 점 막 조직에서의 특성화 샘플, 취득에 어려움으로 인해 도전 이며 DCs의 낮은 수는 조직 당 제시. 그러나, 표현 형 및 Dc의 기능 조직 환경에 의해 수정 되는, 그것은 조직 거주 DC 인구 분석, 혈액 파생 Dc 불완전 이후 반영 Dc의 복잡 한 조직에 필요한. 여기 우리는 인간 여성 생식 관에서 (FRT) 자 군 절제 견본을 사용 하 여 phenotypical 및 기능 분석을 허용 하는 Dc를 분리 하는 프로토콜을 제시. 조직 소화 혼합 세포 현 탁 액, 긍정적인 자기 구슬 선택 다음 단일 셀을 생성 하는 프로토콜에 의하여 이루어져 있다. 우리의 조직 소화 프로토콜 않습니다 하지 쪼개 다 표면 마커, phenotypical 기능 분석 Dc 야간 보육 또는 셀 활성화 없이 안정 된 상태에 수 있습니다. 이 프로토콜은 다른 면역 세포 유형의 격리 또는 다른 조직에서 Dc의 격리에 대 한 적응 될 수 있다.

서론

FRT 이식 및 임신1하면서 병원 균에 대 한 보호의 이중 기능이 있다. 이 작업을 수행 하는 FRT는 들 에게만, 각 해 부 지역 표시 하는 독특한 조직학, 면역학, 및 기능적 특성1.

DCs 점 막 표면에 존재 확인 폐, 창 자, 그리고 성 기 요로에 미생물과 접촉 하 고 잠재적인 병원 균2에 대 한 면역 감시를 제공 합니다. DCs 프라임 순진한 T-세포 및 적응 면역 반응3는 독특한 기능이 있다. Dc는 FRT에도 정자 및 성공적인 임신4있도록 개발 태아에 있는 등 외국 항을 용납을 전문화 된다. 따라서, 위치에 따라 DC 형 및 기능 있을 것 이다 고유. 그것은 그들의 숫자, 표현 형, 고 기능 조직 환경 존재 하는3에 의해 수정 되는 Dc는 조직 환경에 의해 강하게 영향을 알려져 있다. 따라서, FRT Dc 전염 성 질환, 임신, 그리고는 FRT에 암에 재생 하는 역할을 이해 하려면 거주 Dc 혈액 파생된 DC 모델은 FRT 조직에서 발견 규제 복잡성을 해결 하기 위해 적절 한 이후 공부 필요.

인간의 조직 특성 거주 Dc 세포 점 막 조직에의 낮은 수와 인간의 조직 샘플을 얻기 어려움 도전적 이다. Dc에서 FRT immunohistochemistry5,6, 조직 내의 셀 위치에 대해 알려줍니다 하지만 기능 연구 하는 걸로 하 고 셀 마커 분석 될 수 있는 식별 하는 수에 제한 됩니다를 사용 하 여 연구 에 한 번. 또한, 단일 세포 격리 프로토콜 흐름 cytometric 분석에 대 한 개발된7,,89되었습니다. 이러한 프로토콜의 일부 활용 마이그레이션하는 그 세포를 분리 하는 Dc의 철새 용량. 이러한 메서드는 일반적으로 하룻밤 외피 및 활성화 된 Dc의 선택을 요구 하지만 안정 된 상태에서 Dc의 연구에 대 한 허용 하지 않습니다.

여기, 우리는 FRT, endometrium (EM)에서 다른 해 부 사이트에서 Dc를 분리 하는 프로토콜 최적화 된 hysterectomy 표본을 사용 하 여, endocervix (CX), 그리고 ectocervix (ECX), phenotypical 및 기능 분석을 가능 하 게. 비 분해 효소 소화 프로토콜을 사용 하 여, 우리 조직 세포 활성화 없이 셀 고립과 흐름 cytometric 특성을 소화 후 즉시 진행할 수 있습니다. 다 색 cytometry 사용 하 고 적응 하는 셀의 낮은 수에 대 한 기능 연구, 우리 식별 하 고 Dc는 FRT.의 다른 사이트에서의 드문 하위 집합의 특성

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프로토콜

인체와 관련 된 연구는 헬싱키의 선언에 표현 하는 원칙에 따라 실시 했다. 연구는 다트머스 대학 기관 검토 위원회와 보호의 인간의 과목 (CPHS)를 위한 위원회에 의해 승인 되었다. 서 면된 동의 다트머스-히치콕 병원 (레바논, NH) hysterectomies를 받고 HIV 음성 여성에서 수술 전에 얻은 했다. 숙련 된 병리학 ECX, 병 적인 장애의 자유롭고 병 리의 사이트에서, CX, 및 그들에서 조직 샘플을 선택. 혈액 샘플은 다트머스 히치콕 의료 센터에서 모집 하는 자원 봉사 건강 한 기증자 로부터 얻은 했다. 혈액 기증자 했다 익명입니다. 수술 실에서 갓 고립 된 전각, CX, 및 ECX 조직 고립과 분류 사전 별도, 살 균 하는 폴 리 프로필 렌 튜브에 우리의 실험실에 전송에 대 한 병 리로 옮겨 졌다.

1. 효소 소화의 조직

참고: 살 균 물질을 사용 하 고 생물 안전 캐비닛에서 작동.

  1. 수정 된 행 크의 균형 소금 솔루션 (HBSS)와 페 놀 레드, 100 U/mL 페니실린 스, 0.35 g/L NaHCO3, 20 mM HEPES 1 x HBSS를 사용 하 여 준비 합니다.
  2. 효소 칵테일을 준비 (수정 HBSS, 450 U/mL 콜라 4, 0.01% [wt/집] deoxyribonuclease, 2 mg/mL D-포도 당). 살 균 0.22 μ m 필터를 통해 솔루션을 전달 합니다. 이상적으로,의 사용, 하루에 소화 효소를 준비 하지만 저장용-20 ° C에 얼 수 있다. 반복 및 주기를 해빙 하지 마십시오.
  3. 수정 HBSS와 100 x 15 m m2 배양 접시에서 조직 린스. 조직의 사용 가능한 금액에 따라 페 트리 접시 크기와 사용 하는 효소 칵테일의 볼륨 조정 (단계 1.4.2 아래 참조).
    참고: 조직 병 리, 1-10에서 배열에서 얻은 수술 샘플에 따라 크기가 다양 합니다.
  4. 일회용 메스와 집게 물리적 처리:
    1. 절단 하면서 건조를 방지 하기 위해 조직에 소화 효소 칵테일의 약 3 mL를 추가 합니다.
    2. 집게를 사용 하 여 조직을 안정화 하 고 칵테일 소화 효소에 노출 하는 직물의 표면 영역을 증가 하는 메스를 말하다. 작은 조각 (< 2mm 측에)에 조직을 잘라. 모든 조직 조각 (5 mL/g 조직)를 충당 하기 위해 충분 한 소화 효소 칵테일을 추가 합니다. 페 트리 접시에 뚜껑을 놓습니다.
    3. 5% CO2 45 분 흘리 고 또는 거품을 생산 하지 않고 철저 하 게 혼합 소화 효소 칵테일을 회전 속도 확인을 위해 약 80 rpm에 회전에 37 ° C에서 품 어.
    4. 4 X 거꾸로 가벼운 현미경으로 조직 준비 10 X 목표를 시각화.
      참고: 소화, 후 작은 조직 조각 및 표시 상피 땀 샘을 포함 하 여 혼합된 셀 서 스 펜 션 존재 해야 ( 그림 1A참조).

2. 단일 셀의 물리적 분리

  1. 메 마른 환경에서 홀더를 가진 긴장 된 250 µ m 메쉬를 150 x 15 m m2 페 트리 접시에 놓습니다. 메쉬 페 트리 접시의 표면 위에서 약 0.5 c m 인지 확인 합니다.
  2. 메쉬 수정된 HBSS의 2 mL와 습식 및 메쉬에 소화 조직 전송.
  3. 10 mL 주사기 플런저의 평평한 표면에 사용 하 여, 부드럽게 하지만 단단히, 갈기는 메시를 통해 소화 다진된 조직.
    주의: 너무 적극적으로 연 삭 메시 손상 되며 세포 사망률 증가. 이 단계 결합 조직 및 점액에서 상피 세포와 stromal 세포 (면역 세포를 포함 하는) 별도 것입니다.
  4. 조직 파편 철저 하 게 분산 되어, 일단 상승 메시 및 홀더 페 트리 접시의 3 mL와 린스 위의 2-3 cm HBSS 복구 추가 셀을 수정.
  5. 세포 현 탁 액을 수집 합니다. 페 트리 접시에 수정된 HBSS의 2 mL와 젖은 홀더 20 µ m 메쉬를 배치 합니다. 들고 메쉬 망을 통해 세포 현 탁 액을 부 어 2-3 cm 배양 접시와 수정된 HBSS 6 mL와 린스.
    참고:이 단계는 메쉬를 통과 하는 단일 셀에서 위에 유지 됩니다 상피 시트 분리 됩니다. 통해 흐름 혼합된 셀 서 스 펜 션, 면역 세포 및 stromal 섬유 아 세포를 포함 하는.
  6. 혼합된 셀 펜션과 10 분 Aspirate 액체에 대 한 500 x g에서 원심 분리기를 수집 하 고 펠 릿 조밀도 기온 변화도 원심 분리에 대 한 수정된 HBSS 4 mL에 resuspend.
  7. 아니 브레이크와 혼합된 세포 현 탁 액 3 mL 이상 polysucrose 솔루션 및 30 분 동안 500 x g에서 상 온에서 원심 분리기의 레이어. Polysucrose 솔루션의 위에서 흰색 밴드를 수집 하 고 PBS로 세척.
    참고:이 분수 농축된 혼합된 세포 현 탁 액, 면역 세포에 풍부 하 고 일부 stromal 섬유 아 세포를 포함 하는.

3. 죽은 세포 제거

참고: 죽은 세포 (> 20%)의 큰 비율에에서 있는 농축된 혼합된 세포 현 탁 액 조밀도 기온 변화도 원심 분리 후, 자석 구슬 죽은 세포 제거 것이 좋습니다. 죽은 세포는 긍정적인 자기 구슬 선택 과정을 방해할 수 있기 때문에 제거 될 필요가 있다.

  1. 10 X 목적으로 가벼운 현미경에는 hemocytometer를 사용 하 여 셀을 계산 합니다. 농축된 혼합된 세포 현 탁 액 (500 g, 10 분, 4 ° C)의 모든 셀을 아래로 회전 합니다. 완전히 발음 하 고는 상쾌한 삭제. 1 x 107 총 셀 (라이브 및 죽은), 제조업체의 지침에 따라 당 죽은 세포 제거 구슬의 100 µ L를 추가 합니다. 15 분 동안 실 온에서 품 어.
  2. 30 µ m 필터 자석 열에, 셀 서 스 펜 션 적용 놓고 자기 열을 구슬 표시 된 셀을 허용 합니다.
  3. 권장된 (3 mL)으로 죽은 세포 제거 버퍼 열을 씻어. 흐름을 통해 라이브 셀을 포함 하는 수집 합니다. 죽은 세포 제거 후 셀 복구의 범위는 그림 1B에서 제공 됩니다.
    참고: 이러한 셀 phenotypical 연구 (제 5) 얼룩이 cytometry 수행을 사용할 수 있습니다 또는 DC 절연 (제 4) 계속.

4. DC 정화 긍정적인 자기 구슬 선택에 의해

  1. 죽은 세포 제거 (3.2 단계), 다음 셀 아래로 회전 하 고 상쾌한, 제거 하 고 셀 펠 릿 1 x 107 셀 (PBS, 0.5% 열 비활성화 인간의 AB 혈 청 (HS), 2 mM EDTA) 당 80 µ L 자석 선택 버퍼에 resuspend.
  2. DC 인구의 긍정적인 선택에 대 한 CD1a 또는 CD14 자석 구슬 (20 µ L 자기 당 구슬 1 x 107 셀) 제조 업체의 지침에 따라 추가 합니다. 4° c.에서 15 분 동안 품 어
  3. 자기 선택 된 셀을 세척 하 고 스핀 다운, 버퍼를 완전히 제거. 자기 선택의 500 µ L의 최소 셀 resuspend
  4. 자석에 열을 연결 하 고 모든 나머지 세포 덩어리를 유지 하기 위해 열 상단 30 µ m 필터 추가. 필터 및 자기 선택 버퍼 권장 열 린스.
  5. 열에 세포 현 탁 액을 적용 합니다. 마그네틱 선택 3 번 린스 합니다.
  6. 15 mL 튜브에 열을 전송, 자기 선택 버퍼의 5 mL을 추가 하 고 열에서 선택한 셀을 출시 플런저를 적용.
  7. 순도 높이려면 새 열을 사용 하 여 복구 된 세포 단계 4.4-4.6을 반복 합니다. 마그네틱 비드 선택 후 셀 복구의 범위는 그림 1C에서 제공 됩니다.

5. 셀 순도의 평가: Flow Cytometry 그리고 현미경 검사 법

  1. 항 체 cytometry에 대 한 얼룩:
    1. 20%를 포함 하는 PBS의 106 셀 100 µ L x 1 resuspend 열 비활성화 Fc 수용 체를 차단 하 고 얼음에 10 분 동안 품 어 버렸습니다.
    2. 붙일 항 체 및 죽은 세포의 식별을 위해 시 약 분류는 원하는 추가 (예, 섹션 6.5 참조). 설정 하는 게이츠 고 보상 비즈를 사용 하 여 보상에 대 한 하나의 얼룩 컨트롤을 준비 하나 (FMO) 컨트롤 마이너스 형광을 설정 합니다. 사용 하는 항 체의 예는 표 1에 주어진 다. 빛 으로부터 보호 4 ° C에서 20 분 동안 품 어.
    3. 자기 선택의 2 mL로 세포 세척.
      참고: EDTA의 존재는 흐름 cytometric 분석에 대 한 응집 하는 세포의 형성을 피하기 위해 해야 합니다. 스핀 다운 하 고는 상쾌한 삭제.
    4. 튜브 당 2 %paraformaldehyde 솔루션의 100 µ L을 추가 하 여 셀을 수정.
    5. 교류 cytometer10,11에 샘플을 분석 합니다.
  2. 열 (예를 들어, cytospin) 스핀과 Giemsa 얼룩 형태 분석을 사용 하 여:
    1. 자기 선택의 200 µ L 셀 resuspend
    2. 5 분 동안 스핀에 스핀 열 로드. 슬라이드를 완전히 건조 보자.
    3. 수정 슬라이드 2 분 린스에 대 한 100% 메탄올에 침수에 의해 슬라이드 이온된 수로 그리고 건조 공기를 허용.
    4. 표준 Wrights Giemsa 얼룩을 수행 합니다. 오신 셀 커버 하 고 10 분 동안 품 어, 이온을 제거 된 물으로 씻어 말리 면. Wrights Geimsa 얼룩과 셀 커버, 1 분 동안 품 어, 이온을 제거 된 물으로 헹 구 고 건조 한 공기.
    5. 준비 (그림 2A, 40 X 목표) 거꾸로 현미경으로 검사 합니다.

6. 수용자 자극 DC 세포 기능을 평가 하기 위해 분석 결과

  1. 해 동 냉동된 주변 혈액 단 세포 (PBMCs)
    1. 10% 셀 문화 미디어 따뜻한 HS 37 ° c
    2. 적은 양의 언된 셀 미디어는 cryotube에 남아 때까지 37 ° C 물 목욕에는 cryotube를 배치 하 여는 PBMCs를 녹여. 메 마른 환경에서 미리 데워 진된 셀 문화 미디어 10%의 10 mL에는 cryotube의 내용을 전송 15 mL 튜브에 HS.
    3. 원심에서 ~ 500 x g 7 분에 대 한 미디어를 제거, 펠 릿을 분산, 셀 문화 미디어 10 %HS, 그리고 원심 분리기의 10 mL에는 PBMCs resuspend 셀.
    4. 세척 단계는 제 3 시간을 반복 합니다. 셀을 계산 합니다.
  2. 순진한 T-셀 선택:
    1. 부정적인 선택 자기 항 체 셀 선택 키트를 사용 하 여 제조 업체의 프로토콜에 따라 순진한 T-세포를 분리.
    2. 절연, 후 CD45RA 및 CCR7 항 체를 사용 하 여 순도 확인 하십시오.
      참고: 일반적인 순도 > 99% naïve T 세포입니다.
  3. 순진한 T 세포 확산 염료 얼룩이 지기:
    1. 600 µ L 셀 확산 염료, 염료를 보호 하는 빛에 노출에서의 2 배 솔루션의 준비.
    2. 순진한 T-세포 2 워시 x PBS. 500 µ L PBS에 셀 resuspend
    3. 부드럽게 vortexing 동안 biosafety 내각에 셀 순 T-세포를 확산 염료의 500 µ L를 추가 합니다.
    4. 37° c.에서 10 분에 대 한 셀을 품 어
    5. 세포 배양 10%의 5 mL을 추가 하 여 셀 라벨 중지 셀에 HS. 5 분, 빛 으로부터 보호에 대 한 얼음에 품 어.
    6. 원심에서 셀 ~ 7 분, 500g x 미디어, 발음 및 세포 배양 10%의 4 ° C에 셀 resuspend HS. 3 세척의 총에 대 한 두 번 더 반복 합니다. 마지막 원심 분리 이전 계산 셀의 약 수를 가져가 라.
      참고: 일반적으로, 최종 순 T-셀 번호 초기 PBMC 세포 수의 15%와 5% 사이 범위 것입니다.
    7. 10%로 셀 문화 미디어 셀 resuspend 원하는 셀 농도에서 HS.
  4. DC 수용자 naïve T 세포 공동 문화:
    1. 1시 15분에서 격리 된 Dc와 순진한 T-세포는 96-글쎄, 라운드-하단 접시에서 접시 T-세포에 Dc의 비율. 3000 및 5000 셀/잘 Dc 범위에 대 한 최적의 수를 확인 합니다.
    2. 원심에서 접시 ~ 500 x g 3 분 셀 우물의 센터에서 위치 확인. 셀 연락처 적절 한 신호 발생을 위해 중요 하다.
    3. 6 일 동안 37 ° C에서 품 어. 확산 발생, 현미경 검사 법 (그림 3A)와 우물에 표시 되는 셀의 클러스터를 모니터링 합니다.
  5. Flow cytometry 확산을 평가 하기 위해 얼룩:
    1. 6 일 후 세포 cytometry에 의해 시험 될 수 있다. Cytometry에 대 한 공동 문화 얼룩.
    2. PBS에서 노란색 생존 염료 (최대 방출 572 nm)의 2 배 솔루션을 준비 합니다.
      참고: 혈 청 하지 않고 PBS 사용 하 여 중요 한, 혈 청으로 단백질 방해 염료).
    3. 에 세포 격판덮개 원심 ~ 5 분 동안 500 x g.
    4. 상쾌한의 100 µ L을 제거 합니다.
      참고:이 시점에서 수집 하 고 저장 성 요인의 별도 분석을 위한 상쾌한.
    5. 두 번 PBS로 세포 세척: 150 µ L/잘 PBS의 추가에 원심 ~ 5 분 동안 500 x g 150 µ L를 피펫으로와 상쾌한의 제거. 각 잘에 남아 상쾌한의 50 µ L 인지 확인 합니다.
    6. 각 우물에 2 x 생존 염료의 50 µ L를 추가 합니다. 빛 으로부터 보호 하는 10 분 동안 실내 온도에 품 어.
    7. 부 화, 중 원하는 항 체 마커 마스터 혼합물을 준비 합니다. 예: CD3 APC/Cy7, PE CD4, CD8 FITC, 등
    8. 각 우물에 항 체의 혼합물을 추가 합니다. 빛 으로부터 보호 하는 10 분 동안 실내 온도에 품 어.
    9. 셀 2 워시 x PBS + 2 %HS: 150 µ L/잘 PBS + 2%의 추가 HS. 원심에서 ~ 500 x g를 피펫으로와 상쾌한의 5 분 제거 150 µ L에 대 한.
    10. 100 µ L / 2% 파라 포름알데히드의 우물을 추가 하 여 셀을 수정. 필요한 경우: 폴 리 프로필 렌 흐름 cytometry 튜브에 세포와 미디어를 전송. 튜브 4 ° C에서 보관 고 흐름 cytometric 분석까지, 빛에서 보호 될 수 있습니다.
    11. 교류 cytometer에서 읽기 튜브입니다.

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결과

다음 조직 소화, 상피 시트와 땀 샘의 릴리스 관찰 될 수 있다, 그림 1A;와 같이 이것은 효소 소화 성공적인 나타내는 긍정적인 컨트롤입니다. 총 실행 가능한 세포 및 조직의 그램 당 복구 Dc의 숫자도 표시 됩니다 그림 1B 및 그림 1C, 각각. 면역 세포 밀도 원심12,13이전 stromal 세포의 5-30% 사이 나타냅니다. 그림 2 는 형태 (그림 2A)와 격리 된 Dc의 순도 (그림 2B, C). 2 라운드 ...

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토론

점 막 Dc는 조직 환경, 조직3입력 일단 그들의 표현 형 및 기능 변경에 의해 강하게 영향을 희귀 세포 인구. 혈액 파생 하는 동안 Dc 매우 유용한 모델, 그들은 조직에서 발견 되는 DC 인구의 다양성을 완전히 대표 하지 않는다. 따라서, 점 막 Dc의 독특한 특성을 이해, 조직에서 1 차 셀의 격리 필요 하다. Dc는 FRT에 다른 해 부 사이트에서의 절연 DC 기능에서 생체 외에서 연구 하 고 DC 하위 집합 및 해 부 위치 사이 비교 기회를 제공 합니다.

여기 우리는 생체 외에서 기능적 특성의 평가 대 한 인간의 FRT 조직에서 Dc의 정화를 허용 하는 프로토콜을 제공 합니다. 이후 Dc 낮은 숫자에 점 막 사이트에서 찾을 수 있습니다, 우리 밀도 그라데이션 원심 분리 및 자석 구슬 가진 셀 격리 전에 죽은 세포 제거 하 여 조직 세포 준비를 풍부 하 게 하는 프로토콜을 개발 했다. 죽은 세포의 ...

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공개 사항

저자 공개할 게 없다

감사의 글

NIH 지원 연구는 AI102838 및 AI117739 (CRW)을 부여 합니다. 우리는 기술 지원을 위한 리처드 Rossoll 감사합니다. 흐름 cytometric 분석은 DartLab, Dartmouthsupported (P30CA023108-37)에 의해 (P30GM103415-15)에서 공유 리소스에에서 실시 됐다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
행크스 밸런스 솔트 솔루션 (HBSS)하이클론SH30015.03
페니실린-스트렙토마이신하이클론SV30010
헤페스 (1M)하이클론15630-080
콜라겐 분해 효소 IV시그마C5138
데옥시리보뉴클레아제 I워딩턴 생화학LS002140
D-포도Sigma Aldritch50-99-7
0.22 um Stericup 500 mL  필터MilliporeSCGPU05RE
100mm x 15mm 폴리스티렌 페트리 접시FisherbrandFB0875712
150mm x 15mm 폴리스티렌 페트리 접시FisherbrandFB0875714
150mm x 25mm 폴리스티렌 접시Corning430599처리된 세포 배양 접시
Isotemp 인큐베이터Fisher ScientificFICO3500TABB5.0% CO2
American Rotator VAmerican DADER4140
250 um 나일론 메쉬Sefar03-250/50
20 um 나일론 메쉬Sefar03-20/14
Beckman GS-6R 원심분리기Beckman358702
X-VIVO 15 with Gentamicin L-Gln, 페놀 레드, 1 LLonza04-418Q
Human AB SerumValley BiomedicalHP1022
Histopaque-1077Sigma Aldritch10771
인산염 완충 용액(PBS)National DiagnosticsCL-253pH 7.4
데드 셀 제거 키트Miltenyi Biotec130-090-101
사전 분리 필터(30um)Miltenyi Biotec130-041-407
LS칼럼Miltenyi Biotec130-042-410
Quadro MACS 분리기Miltenyi Biotec130-090-976
MACS 멀티 스탠드Miltenyi Biotec130-042-303
EDTAUSB15694
CD1a Microbeads, humanMiltenyi Biotec130-051-001
CD14 Microbeads, humanMiltenyi Biotec130-050-201
eFluor 670 세포 증식 염료eBiosciences65-0840-85
96 웰 라운드 바닥판Falcon9/8/2866
좀비 옐로우 생존 염료Biolegend423104
CD3 APC/Cy7, anti-humanTonbo Biosciences25-0038-T100
CD4 PE, anti-humaneBiosciences12-0048-42
CD8a FITC, anti-humanTonbo Biosciences35-0086-T100
Gallios 유세포 분석기Beckman Coulter Life SciencesB4361810 color, VBR
MACSquant Analyzer 10Miltenyi Biotec130-096-3438 color, VBR
당

참고문헌

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  6. Schulke, L., Manconi, F., Markham, R., Fraser, I. S. Endometrial dendritic cell populations during the normal menstrual cycle. Hum Reprod. 23 (7), 1574-1580 (2008).
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Phenotypical 및 기능 연구에 대 한 인간의 여성 생식 관에서 수지상 세포의 고립
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