이 원고 소설 설정과 운영 photoacoustic 현미경와 토끼 같은 더 큰 동물의 비 침범 성, 레이블 없는 chorioretinal 이미징 광학 일관성 단층 촬영 듀얼 모달 시스템의 절차에 설명 합니다.
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방법 논문
이 원고 소설 설정과 운영 photoacoustic 현미경와 토끼 같은 더 큰 동물의 비 침범 성, 레이블 없는 chorioretinal 이미징 광학 일관성 단층 촬영 듀얼 모달 시스템의 절차에 설명 합니다.
Photoacoustic 눈 이미징 신흥 이미징 기술을 음파에 빛 에너지를 변환 하 여 눈 조직을 시각화 noninvasively 수를 집중 조사를 받고 현재는 안과입니다. 그러나, 대부분 보고 날짜를 작업 작은 안구 크기 때문에 임상 인간의 번역에 대 한 도전 포즈는 쥐와 쥐, 작은 동물의 눈의 후부 세그먼트의 이미지에 초점을 맞추고. 이 원고는 소설 photoacoustic 현미경 (PAM) 토끼 같은 더 큰 동물의 눈의 뒤 세그먼트 이미징 광학 일관성 단층 촬영 (OCT) 듀얼-모달 시스템을 설명합니다. 시스템 구성, 시스템 맞춤, 동물 준비 및 듀얼-모달 실험 프로토콜 비보, 비 침범 성, 레이블 없는 chorioretinal 토끼에서 이미징에 대 한 자세히 나와 있습니다. 방법의 효과 망막과 안 맥 관 구조 팸과 10 월 여를 비롯 한 대표적인 실험 결과 통해 보여 줍니다. 이 원고는 토끼에서 이미징 결과 재현 하 고 더 큰 동물에 photoacoustic 눈 영상 발전에 실질적인 가이드를 제공 합니다.
최근 수십 년간 생물 의학 photoacoustic 이미징1,2,3,,45,6,7 분야의 폭발적인 발전을 목격 했다 ,8. 소리에 빛의 에너지 변환에 따라 신흥 photoacoustic 이미징 organelles, 세포, 조직, 장기에서 작은 동물 몸 전체에 비늘에 생물 학적 샘플을 시각화 수 및 그것의 해부학을 밝힐 수 있다, 기능, 분자, 유전, 그리고 대사 정보1,2,9,10,,1112. Photoacoustic 이미징 생물 의학 분야, 세포 생물학13,14, 혈관 생물학15,16, 신경과17,18 범위에서 고유 응용 프로그램을 발견 했습니다. , 종양학19,20,,2122, 피부과23,24, 약리학 및 혈액학25,26. 안과, 즉, photoacoustic 눈에 그것의 응용 프로그램 이미징, 과학자와 임상 모두에서 상당한 관심을 모으고 있다 고 현재 활성 조사를 받고 있습니다.
달리 일상적으로 사용 하 눈 이미징 기술27, fluorescein angiography (FA)와 녹색 indocyanine 제품은 (ICGA) (형광 대비 기준), 광학 일관성 단층 촬영 (OCT) (광 산란 대비 기준) 그리고 그것의 파생 10 월 혈관 (혈액 세포의 모션 대비 기준), 대비 메커니즘으로 사용 하 여 광 흡수를 이미징 photoacoustic 안구. 이것은 기존의 눈 이미징 기술과 하 고 독특한 도구 눈 조직28의 병 태 생리 상태와 일반적으로 관련 된 눈의 광 흡수 속성을 공부를 제공 합니다. 현재까지, 중요 한 뛰어난 작품 photoacoustic29,30,31,32,33,,3435, 이미징 눈에서 완료 되었습니다. 36,37, 하지만이 연구는 쥐와 쥐 같은 작은 동물의 눈의 뒤 세그먼트에 초점. 선구적인 연구 잘 인 photoacoustic 이미징의 타당성을 설명 하지만 여전히 쥐 및 쥐의 안구 크기부터 기술의 임상 번역 쪽으로 갈 길이 훨씬 더 작은 (1/3 미만) 보다 인간. 때문에 크게 장거리 초음파 파도의 전파, 신호 강도 및 이미지 품질 이미징 큰 눈의 뒤 세그먼트에 대 한 기법을 사용 하는 경우 크게 고통을 수 있습니다.
이 목표를 향해 우리 최근 보고 비 침범 성, 살아있는 토끼를 사용 하 여 레이블 무료 chorioretinal 이미징 통합 photoacoustic 현미경 (PAM) 및 스펙트럼 도메인 OCT (SD-10 월)38. 시스템 우수한 성능을 있으며 망막과 맥락 막 생 흡수 및 산란 대비 안구 조직에 따라 더 큰 동물의 눈의 시각화 수 있습니다. 토끼에서 예비 결과 PAM noninvasively 개별 망막과 안 혈관 레이저 노출 복용량을 사용 하 여를 구별할 수 있는 표시 (~ 80 뉴저지) 미국 국립 표준 협회 (ANSI) 안전 한계 이하로 크게 (160 뉴저지) 570에 nm39; 그리고 다른 망막, 맥락 막, 레이어와 sclera OCT 해결 명확 하 게 수 있습니다. PAM을 사용 하 여 더 큰 동물의 후부 세그먼트 영상의 첫 데모 이며 토끼 (18.1 m m)40 의 안구 크기의 축 길이의 거의 80%는 고려 기술의 임상 번역을 향한 큰 걸음이 될 수도 있습니다. 인간 (23.9 m m)입니다.
이 작품에서 우리는 이중 적임 이미징 시스템 및 비 침 투, 레이블 없는 chorioretinal 이미징 생활 토끼에 사용 되는 실험 프로토콜에 대 한 자세한 설명을 제공 하 고 대표 망막을 통해 시스템 성능을 입증 하 고 안 이미징 결과입니다.
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토끼는 미국 농 무부 (USDA) 종 덮여 있습니다. 엄격한 규정에 따라 생물 의학 연구에 사용 해야 합니다. 모든 토끼 실험 대학 실험실 동물 프로토콜 승인 후 안과 및 비전 연구, 동물의 사용을 위한 ARVO (비전 및 안 과학에 있는 연구를 위한 협회) 문을 따라 수행 했다 위원회 및 동물 (UCUCA) 미시간 대학 (프로토콜 PRO00006486, PI Yannis Paulus)의 사용에.
1. 시스템 구성
2. 시스템 맞춤
3. 토끼 준비
4. SD 10 월 영상
5입니다. 팸 영상
6. 게시물 이미징
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이중 적임 이미징 시스템 및 실험 프로토콜 성공적으로 테스트 되었습니다 4 뉴질랜드 백색 토끼를 사용 하 여 작성자의 실험실에. 다음 몇 가지 대표적인 결과를 보여줍니다.
그림 1 팸과 SD 10 월 듀얼 적임 이미징 시스템의 회로도 보여준다. 그것은 다음 모듈의 구성 된다: photoacoustic 라이트 소스, 가변 레이저 감쇄 기, 빔 겨냥 틀, 에너지 미터, 스캔 머리, photoacoustic 검색 및 수집 모듈, 10 월 단위 및 동기화 전자. 자세한 시스템 구성 섹션 1.1에 항목별로 있습니다.
그림 2 에서는 일반적인 이미징 결과 토끼 ...
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그대로 하 고 정기적으로 눈물 필름 높은-품질 저 이미지에 대 한 필수적입니다. 불규칙 하 고 악화 눈물 영화 이미지 품질42저하 크게 수 있습니다. 눈물 영화의 무결성을 유지 하 고 각 막 표면 punctate 각 방지, 기름칠을 각 막 눈 속임을 사용 하 여 매우 빈번 하 게, 약 2 분 마다 중요 하다. 눈의 불투명도 관한 질문이 있다면 슬릿 램프를 사용 하 고 fluorescein 스트립 각 막 상태를 확인 하기.
여러 가지 어려움은 특히 높은 주파수 구성 요소, 각 막의 탈수 및 광학 착오에 대 한 거리와 photoacoustic 신호 감쇄를 포함 하 여 더 큰 동물의 눈의 뒤 세그먼트 이미징 존재할 수 있습니다. Photoacoustic 신호 진폭은 일반적으로 전에 바늘 모양의 초음파 트랜스듀서에 의해 감지 되 고 상당한 감쇄를 경험 한다. 큰 안구 크기, 더 큰 감쇠. 토끼 (~18.1mm)의 안구 크기는 약 3 배 쥐 보다...
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저자는 공개 없다.
이 작품은 국립 눈 연구소 4K12EY022299의 관대 한 지원에 의해 지원 되었다 (YMP), 싸움에 대 한 시력-국제 망막 연구 재단 FFS GIA16002 (YMP), 실명 방지 연구에서 무제한 부서 지원 및 미시간 대학 부 안과 고 비주얼 과학. 이 작품 비전 연구 국립 눈 연구소에서 P30 EY007003에 의해 투자를 위한 핵심 센터를 활용.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Dual-modality imaging system | |||
| OPO laser | Ekspla (리투아니아 빌뉴스) | NT-242 | |
| 빔 감쇠기 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | AHWP10M-600 | |
| 전동 회전 스테이지 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | PRM1/MZ8 | |
| 전동 회전 스테이지 컨트롤러 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | TDC001 | |
| 초점 렌즈 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | AC254-250-B | |
| 핀홀 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | P50S | |
| 시준 렌즈 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | AC127-030-B | |
| Photodiode | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | PDA36A | |
| 레이저 셔터 | Vincent Associates Inc. (토론토, 캐나다) | LS6S2T0 | |
| 레이저 셔터 드라이버 | Vincent Associates Inc. (토론토, 캐나다) | VCM-D1 | |
| Dichroic mirror | Semrock, Inc. (Rochester, NY, USA) | Di03-R785-t3-25× 36 | |
| 스캔 렌즈 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | OCT-LK3-BB | |
| 안과 렌즈 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | AC080-010-B-ML | |
| 초음파 트랜스듀서 | Optosonic Inc. (Arcadia, CA, USA) | Custom | |
| Amplifier | L3 Narda-MITEQ (Hauppauge, NY, USA) | AU-1647 | |
| 대역 통과 필터 | Mini-Circuits (미국 뉴욕 브루클린) | BLP-30+ | |
| 디지타이저 | DynamicSignals LLC (Lockport, IL, USA) | PX1500-4 | |
| 동기화 전자 제품 | National Instruments Corporation (Austin, TX, USA) | USB-6353 | |
| OCT 모듈 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | Ganymede-II-HR | |
| 분산 보상 유리 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | LSM03DC | |
| 조명 LED 조명 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | MCWHF2 | |
| 파워 미터 | Thorlabs, Inc. (Newton, NJ, USA) | S121C | |
| 전력계 인터페이스 | Thorlabs, Inc. (미국 뉴턴, 뉴저지) | PM100USB | |
| 높이 측정 도구 | Thorlabs, Inc. (미국 뉴저지주 뉴턴) | BHM1 | |
| 안저 카메라 | Topcon Corporation(일본 도쿄) | TRC 50EX | |
| Matlab | MathWorks(미국 매사추세츠주 나틱) | 2017a | |
| 오실로스코프 | Teledyne LeCroy(미국 뉴욕주 체스트넛 릿지) | WaveJet 354T | |
| <강>동물 실험 | |||
| 물 순환 담요 | Stryker Corporation(미국 미시건주 칼라마주) | TP-700 | |
| 케타민 염산염 주사 | Par pharmaceutical, Inc. (미국 뉴저지주 우드클리프 레이크) | NDC 코드 42023-115-10 | |
| 자일라진 염산염 | VetOne(미국 아이다호 보이시) | NDC 코드 13985-704-10 | |
| 트로피카미드 안과 | Akorn Pharmaceuticals Inc.(미국 일리노이주 레이크 포레스트) | NDC 코드 17478-102-12 | |
| 페닐에프린 염산염 안과 | Paragon BioTeck, Inc.(미국 오리건주 포틀랜드) | NDC 코드 42702-102-15 | |
| 눈 윤활제 | 허브 제약 LLC (미국 캘리포니아주 랜초 쿠카몽가) | NDC 코드 17238-610-15 | |
| Eyewash | Altaire Pharmaceuticals, Inc. (Aquebogue, NY, USA) | NDC 코드 59390-175-18 | |
| 테트라카인 염산염 점안액 | Bausch & Lomb, Inc. (Rochester, NY, USA) | NDC 코드 24208-920-64 | |
| Flurbiprofen sodium ophthalmic solution | Bausch & Lomb, Inc. (Rochester, NY, USA) | NDC 코드 24208-314-25 | |
| Neomycin 및 Polymyxin B Sulfates 및 Dexamethasone Ophthalmic Ointment | Bausch & Lomb, Inc. (미국 뉴욕주 로체스터) | NDC 코드 24208-795-35 | |
| Meloxicam injection | Henry Schein Inc. (Queens, NY, USA) | NDC 코드 11695-6925-1 |
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