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방법 논문

3 차원 선 동적인 인간 조직 Gingiva 등가물

9.6K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/57157

⸱

2018년 4월 3일

 ,  , 
1Department of Pharmacology, The Nippon Dental University, 2Department of Oral and Maxillofacial Surgery, The Nippon Dental University Hospital

이 논문에서

요약

프로토콜의 목적은 염증 인간의 gingiva 모델 시험관을 구축 하는 것입니다. 이 조직 모델 공동 세 가지 유형의 인간 세포, HaCaT keratinocytes, gingival fibroblasts 및 THP 1 대 식 세포, 3 차원 조건 하에서 양성. 치은 염 및 치 주 염 등 치 주 질환을 조사 하는 것이 모델을 적용할 수 있습니다.

초록

치 주 질환 (치은 염 등 치 주 염)는 성인에서 치아 손실의 주요 원인. Gingiva에 염증 치 주 질환의 근본적인 physiopathology입니다. 치 주 질환의 현재 실험 모델 동물의 다양 한 종류에 설립 되었습니다. 그러나, 동물 모델의 physiopathology는 인간의 세포 및 분자 메커니즘을 분석 하 고 치 주 질환에 대 한 새로운 의약품을 평가 하기가 어렵습니다 다릅니다. 여기, 우리 인간의 염증 성 조직 등가물 gingiva (iGTE) 체 외에서의 재구성에 대 한 자세한 프로토콜 제시. 우리는 먼저 인간의 gingival 섬유 아 세포 (HGF) 등 3 차원 조건 하에서 인간의 피부 상피 keratinocytes (HaCaT), 인간 세포의 두 종류를 이용 하 여 gingiva (GTE)의 인간의 조직에 해당 빌드. 우리는 GTE에 구멍을 펀치 조직 주먹을 사용 하 여 상처 모델을 만듭니다. 다음, 인간의 THP 1 monocytes 콜라겐 젤과 혼합는 GTE에 구멍에 주입 됩니다. 10 ng/mL phorbol myristate 12 13-아세테이트 (PMA) 72 h에 대 한 adimistration에 의해 THP-1 셀 GTE (iGTE)에서 양식 염증 foci 하 대 식 세포로 분화 (IGTE 또한 일 수 있다 stumilated lipopolysaccharides (LPS)의 2 µ g/mL와 염증을 시작 하 48 h에 대 한 ). IGTE 3 차원 구조와 인간 세포를 사용 하 여 염증 gingiva의 첫 번째 시험관에 모델입니다. IGTE 치 주 질환에 주요 학적 변화 (immunocytes activition, fibryoblasts, 상피 세포, monocytes 그리고 대 식 세포 중에서 세포 상호 작용)을 반영 한다. 치 주 질환에 대 한 상처 치유 공부를 다양 한 도구, 조직 재생, 염증, 세포 세포 상호 작용, 및 화면 잠재적인 약으로 GTE, 부상된 GTE, 및 iGTE을 사용할 수 있습니다.

서론

치 주 질환 성인에서 치아 손실의 주요 원인입니다. 치은 염 및 치 주 염 가장 일반적인 치 주 질병이 있습니다. 둘 다 gingiva에 biofilm 중재 급성 또는 만성 염증 성 변화를 제시. 치은 염 치 주 염이 만성 염증으로 일반적으로 선물 하는 반면 급성 염증, 특징 이다. 조직학 수준에 세균성 구성 요소는 대 식 세포, 림프 톨, 플라스마 세포, 돛대 세포1,2등 면역 세포의 활성화를 트리거합니다. 이러한 면역 세포 특히 대 식 세포, 지방 세포 (gingival 상피 세포, 섬유 아 세포, 내 피 세포, 및 osteoblasts 포함)와 상호 작용 결과로 치 주 조직3,4에 염증 성 병 변. 치 주 질환의 실험 모델 동물, 쥐, 등의 다양 한 종류에서 설립 되어 햄스터, 토끼, 흰 족제비, 개, 그리고 대주교. 그러나, 동물 모델의 physiopathology는 인간의 세포 및 분자 메커니즘을 분석 하 고 치 주 질환5의 새로운 의약품을 평가 하기가 어렵습니다 다릅니다. 치 주 박테리아와 단층 인간 구강 상피 세포의 공동 경작은 치 주 감염6의 메커니즘을 조사 하기 위해 사용 되었습니다. 그럼에도 불구 하 고, 구강 세포의 단층 문화 부족 그대로 조직;의 3 차원 (3D) 셀룰러 아키텍처 따라서, 그들은 체 외에 상황을 모방 수 없습니다.

여기, 3D 염증 인간의 조직 등가물 gingiva (iGTE)의 생체 외에서치 주 질환을 대표 설정 됩니다. 치 주 질환의이 3D 모델 단층 세포 배양 및 동물 모델 사이의 중간 위치를 차지 하고있다. 세 가지 유형의 HaCaT keratinocytes, gingival fibroblasts 및 THP-1 세포를 포함 하 여 인간 셀 공동 콜라겐 젤에 재배 있으며 iGTE 구축 염증 초기자에 의해 자극. IGTE는 밀접 하 게 세포 분화, 세포 세포 상호 작용 및 gingiva에 대 식 세포 활성화의 비보에 조건을 시뮬레이션합니다. 이 모델은 마약 검사 및 치 주 질환, 새로운 약리학 접근을 테스트 뿐만 아니라 상처 치유, 염증, 및 조직 재생에 세포질이 고 분자 메커니즘 분석을 위한 많은 가능한 응용.

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프로토콜

이 프로토콜은 인간의 gingival 조직 등가물, gingival 상처 모델 및 치은 염 모델을 만들 하도록 설계 되었습니다. 인간의 피부 상피 keratinocytes (HaCaT) 교수 노 버트 E. Fusenig 독일 Krebsforschungszentrum (하이 델 베르크, 독일)7의에서 친절 하 게 제공 되었다. 인간의 gingival 섬유 아 세포 (HGFs)8이전 게시 된 프로토콜 따라 gingival 조직에서 분리 했다. 미리 동의 얻어와 연구 윤리 위원회는 일본 치과 대학 학교 생활 치과의 도쿄에서 설정한 지침에 따라 승인 (승인 번호: NDU-T2012-35). 1-3 단계 프로토콜 셀 문화 후드에서 수행 되어야 합니다.

1. 3D 인체 조직 등가물 Gingiva (GTE) (그림 1A)의 준비

  1. 10% 혼합 콜라겐 타입-A의 젤 집중 MEM-알파와 10% 재건 버퍼 (2.2 g NaHCO3 및 4.47 g HEPES 100 ml 0.05 N NaOH) pipetting으로 15 mL 무 균 튜브에. 사용 될 때까지 얼음에 혼합된 콜라겐 솔루션을 유지.
  2. 24 잘 문화 삽입 (기 공 크기 3.0 µ m) 24-잘 접시에 놓습니다.
  3. 0.25% trypsin EDTA 용액을 사용 하 여 문화 표면에서 HGFs를 제거 합니다. 10 ml 문화 매체 A의 세포를 중단 (MEM-알파 + 20 %FBS + 1 %GlutaMAX). Bürker-터크 셀 카운터로 셀을 계산.
    1. 셀 (1-5 x105 셀/mL), 원하는 수량을 추출 후 4 분 190 x g에서 원심.
    2. 혼합된 콜라겐 솔루션에 셀을 일시 중단 합니다. 다음 단계까지 얼음에 혼합물을 유지.
  4. 모든 거품을 생산 하지 않고 문화 삽입으로 셀 콜라겐 혼합 (0.5-2.5 x 105 셀/잘) 0.5 mL를 추가 합니다. 젤에 혼합물을 응고를 37 ° C에서 5% CO2 습도 분위기에서 10-30 분을 위한 혼합물을 품 어.
    참고:의 문화 삽입 되지 않도록 불평등 콜라겐 젤을 중심으로 콜라겐 혼합물을 추가 합니다.
  5. 잘 삽입으로 0.5 mL으로 문화 매체의 1 mL를 추가 합니다. 24 h에 대 한 문화 접시를 품 어 또는 37 ° c.에 5% CO2 습도 분위기에서 하룻밤
  6. 0.25% trypsin EDTA 용액을 사용 하 여 문화 표면에서 HaCaT 세포를 제거 합니다. 10 ml 매체 B의 셀을 일시 중단 (DMEM + 10 %FBS + 1 %GlutaMAX) 셀을 카운트. 추출 셀 (1-5 x5 셀/10ml) 피 펫, 190 x g.에서 4 분에 대 한 원심 분리기의 필요한 수량 중단 중간 b 세포
  7. 열망 하 여 HGF 콜라겐 혼합물을 포함 하는 문화 삽입에서 매체를 제거 합니다. HGF 콜라겐 혼합 상단 HaCaT 세포 현 탁 액 (0.5-2.5 x 105 셀/잘) 0.5 mL를 추가 합니다. 24 시간 또는 하룻밤에 대 한 문화를 품 어.
    참고:이 시간이 시점에서 문화에 매체 잘 해야 중간 A 문화 삽입에 중간 중간 B. 해야 하는 동안
  8. KSR 매체 (공동 문화 매체)와 문화 매체를 대체 (메모리 알파 + 15% 녹아웃 혈 청 교체 + 1 %GlutaMAX) + 5 %FBS. 잘 하 고 문화 삽입으로 0.5 mL 문화에 문화 매체의 1 mL를 추가 합니다. 24-48 h에 대 한 문화를 품 어.
  9. KSR 매체 + 1% 문화 매체를 대체 FBS. 잘 문화에 1 mL 및 문화 삽입으로 0.5 mL를 추가 합니다. 24 시간 또는 하룻밤에 대 한 문화를 품 어.
  10. 문화에서 문화 매체 0.7-1 잘 바꿉니다 mL KSR 매체. (문화 표면 공기에 노출 한다) 문화 삽입에서 매체를 완전히 제거 합니다. 1-2 주에 대 한 문화를 품 어. 일주일에 2 번 잘 문화에서 매체를 변경 합니다.
    참고: (상위 레이어 구성 keratinocytes) 문화 표면 위의 중간 수준 상승을 못하게 합니다. 항상 문화 표면 건조 유지.

2. 부상된 GTE (그림 1B)의 준비

  1. 1-3 m m 직경 조직 주먹을 준비 합니다. 20 분 동안 121 ° C에 압력솥으로 소독.
  2. 밀어 조직 주먹 수직 GTE 300 µ m 깊이 대 한 그리고 상처를 시뮬레이션 하기 위해 조직에 구멍을 펀치.
  3. 이 단계에서 부상된 GTE를 사용 하 여 상처 치유 및 조직 재생을 조사. 또는, GTE 조직학 분석을 수행 하기 위해 10% 포 르 말린 중립 버퍼 솔루션을 사용 하 여 수정 합니다.

3. 염증 GTE (iGTE) (그림 1B)의 준비

  1. 이전 보고서9에 따르면 THP-1 세포 배양.
  2. 10% 혼합 콜라겐 타입-A의 젤 집중 RPMI 1640, 10% 재건 버퍼 (2.2 g NaHCO3 및 4.47 g HEPES 100 ml 0.05 N NaOH)과 10 ng/mL PMA. 사용까지 얼음에 혼합된 콜라겐 솔루션을 유지.
  3. 수 1-2 x 106 THP-1 세포와 190 x g.에서 4 분 동안 원심 분리기 혼합된 콜라겐 솔루션의 1 mL에 셀을 일시 중단 합니다. 다음 단계까지 얼음에 혼합물을 유지.
  4. GTE의 부상된 지역으로 10-30 µ L THP-1-콜라겐 혼합물을 추가 합니다. 0.7-1 문화 매체를 대체 PMA의 10 ng/mL를 포함 하는 mL KSR 매체.
  5. 5% CO2 72 h에 대 한 37 ° C에서 습도 분위기에서 혼합물을 품 어.
  6. 치은 염 이나 치 주 질환 조사에 대 한 모델을 사용 하 여 (예를 들어 추가 잠재적인 항 염증 제 약 cytokine 릴리스10에 그것의 효과 볼 수 iGTE). 또는, 72 h PMA 처리를 생략 2 µ g/mL LPS의 문화에 추가 하 고 조직 5% CO2 48 h11,1237 ° C에서 습도 분위기에서 품 어.

4. 고정 및 전체 마운트 Immunostaining GTE와 iGTE의 문화

  1. 문화는 고정
    1. 24-잘 접시에서 문화 매체를 제거 합니다. 워시 버퍼 인산 염 (PBS)와 2 회 조직.
    2. 문화를 잘 10% 포 르 말린 중립 버퍼 솔루션 삽입 하 고 1 mL의 1 mL를 추가 합니다. 하룻밤 냉장고에서 4 ° C에 24-잘 접시를 남겨 주세요.
    3. 다음 날 10% 포 르 말린 중립 버퍼 솔루션을 제거 합니다.
    4. 전체 산 immunostaining에 대 한 고정 후 PBS로 3-4 회 조직을 씻어.
    5. 되며 오신 (H & E) 얼룩 및 일반 immunostaining, 탈수, 파라핀 포함, 및 단면 진행.
      참고: 전체 산 immunostaining에 대 한이 단계를 생략할 수 있습니다.
  2. 전체 마운트 immunostaining
    참고:이 프로토콜 참조 13에서에서 수정 되었습니다.
    1. 3 조직 세척 PBS 0.5-1에서에서 x % 트리톤, 10-30 분 각 시간.
    2. 블로킹 버퍼에서 30 분 동안 두 번 조직을 품 어 (PBS 1% 트라이 톤 + 10 %BSA), 실내 온도에.
    3. 블로킹 버퍼, 5-10 분 때마다 조직 2 ×를 씻어.
    4. 삽입에 필요한 희석/농도에서 1 차적인 항 체 솔루션의 50 µ L를 추가 합니다. 얇은 플라스틱 집착 영화를 사용 하 여 조직에 밖으로 건조 하지 않도록 하려면 삽입 하.
    5. 4 ° c.에 1 ~ 2 일에 대 한 조직을 품 어
    6. 씻어 조직 3 번, PBS에서 30 분 1% 트라이 톤 + 10 %BSA. 씻어 PBS에서 5 분, 3 번 다시 1% 트라이 톤.
    7. 블로킹 버퍼에 이차 항 체의 50 µ L를 추가 (PBS 1% 트라이 톤 + 10 %BSA) 및 각 삽입을 Hoechst 33342 솔루션 (NucBlue 라이브 셀 얼룩)의 5 µ L. 얇은 플라스틱 집착 영화를 사용 하 여 조직에 밖으로 건조 하지 않도록 하려면 삽입 하.
    8. 4 ° c.에 1 ~ 2 일 동안 품 어 젖은 종이 타월에 24-잘 접시를 포장 하 고 보육 전반에 걸쳐 사용을 비닐 팩에 넣어.
    9. PBS 1% 트라이 톤에서 10 분 조직 3 번 씻어
    10. 날카로운 바늘을 사용 하 여 얻을 조직 문화 삽입의 막 잘라. 장소는 슬라이드에 막입니다.
      참고: 조직 막에 있어야 한다.
    11. 형광 마운트 매체의 2-3 방울을 추가 합니다. 커버 글라스와 어둠 속에서 4 ° C에서 저장 조직 분석까지 커버.
    12. Confocal 레이저 스캐닝 현미경 (LSM) 조직 보기

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결과

HaCaT 세포 단계 대조 현미경 관찰 (그림 2A)에서 전형적인 keratinocyte 형태 표시. 전자 현미경 (SEM) 이미지 스캐너 HaCaT 세포 표면 많은 microvilli에 의해 덮여 있었다 보였다. HaCaT 세포 사이의 세포 연결 막 프로세스 (그림 2B)에 의해 중재 했다. HaCaT 세포 gingival 상피 마커 K8/1814, HaCaT 세포 적합 gingiva 재건 (그림 2C) 나타내는 표현.

그림 3A GTE의 성공적인 예를 보여 줍니다 그리고

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토론

이 프로토콜 gingival 조직 등가물 및 이전 보고서8,,2122에 의해 설명 된 피하 지방 조직 등가물을 만드는 방법을 기반으로 합니다. 이 간단 하 고 쉬운 방법 이지만, 일부 단계 특별 한 주의가 필요 합니다. 예를 들어 콜라겐 혼합 솔루션에서 젤 형성을 피하기 위해 사용 될 때까지 얼음에 유지 되어야 한다. 문화 삽입으로 콜라겐 혼합물을 추가할 때 솔루션 편견된 젤 ( 그림 3B처럼) 형성을 피하기 위해 삽입의 센터에서 주사 확인 하십시오. GTE에 구멍을 펀칭 기술을 걸립니다. 조직 주먹 가끔 조직 너무 젖은 경우는 조직을 선택할 수 없습니다. 조직 생 검 시스템 또는 집게의 쌍 유용할 것; 그러나, 부상된 위치 크기 많이 변경 됩니다. 그것은 또한 날카로운 바늘과 주사기를 사용 하 여 구멍을 펀칭...

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공개 사항

저자는 충돌의 관심을 선언합니다.

감사의 글

이 작품 지원 부분에서 일본 사회에 의해 과학 진흥 (JSP) 선진적인 과학 연구 (26861689 및 17 K 11813) 한다. 저자 나 다니엘 그린 씨 교정 하는 것을 감사 하 고 싶습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
콜라겐 유형 I-ANitta Gelatin IncGTE
MEM-alphaThermo Fisher Scientific11900073세포 배양 매체
세포 배양 삽입물 (24-웰 플레이트 용)의 진피 제조용, 기공 크기 3.0 μ 엠코닝, Inc.353096조직 배양용
GlutaMAXThermo Fisher Scientific35050061세포 배양 시약
DMEMThermo Fisher Scientific31600034 세포 배양 배지
녹아웃 혈청 교체Thermo Fisher Scientific10828028세포 배양 시약
조직 펀처Shibata 시스템 서비스 co., LTDSP-703용 GTE
RPMI 1640Thermo Fisher Scientific31800022세포 배양 배지
BSASigma-AldrichA3294
Hoechst 33342 (NucBlue Live Cell stain)Thermo Fisher ScientificR37605핵 형
광 마운트 배지Dako면역 염색
후 시료 장착용Anti-Cytokeratin 8+18 항체 [5D3]abcamab17139상피 식별용
스캐닝 전자 현미경Hitachi, Ltd.HITACHI S-4000시료의 표면 지형 및 조성 관찰용
컨포칼 레이저 스캐닝 현미경 LSM700; 공급자:Carl Zeiss Microscopy Co., Ltd.LSM 700샘플의 면역 형광 염색 관찰
Anti-Cytokeratin 19 항체abcamab52625상피
Anti-vimentin 항체abcamab92547섬유 아세포 및 활성 대식 세포 식별
Anti-TE-7 항체MilliporeCBL271진피의 섬유 아세포
식별 Anti-CD68 항체Sigma-AldrichSAB2700244대식 세포 식별용
Human CD14 AntibodyR& D SystemsMAB3832-SP대식세포 식별용
Alexa Fluor 594-conjugated secondary goat anti-rabbit 항체Thermo Fisher ScientificA11012면역형광 염색용
Alexa Fluor 488-conjugated secondary goat anti-mouse 항체Thermo Fisher ScientificA11001면역형광 염색용
EVOS FL 세포 이미징 시스템Thermo Fisher Scientific시료의 면역형광 염색
THP-1 세포Riken BRC 세포 은행RCB1189iGTE
PMA(Phorbol 12-myristate 13-acetate)Sigma-AldrichP8139THP-1 세포 분화용
의 펀칭 홀 면역 염색용 라벨링용 : 용 관찰 제작용

참고문헌

  1. Cekici, A., Kantarci, A., Hasturk, H., Van Dyke, T. E. Inflammatory and immune pathways in the pathogenesis of periodontal disease. Periodontology 2000. 64 (1), 57-80 (2014).
  2. Hasturk, H., Kantarci, A., Van Dyke, T. E. Oral Inflammatory Diseases and Systemic Inflammation: Role of the Macrophage. Frontiers in Immunology. 3, 118(2012).
  3. Koh, T. J., DiPietro, L. A. Inflammation and wound healing: The role of the macrophage. Expert reviews in molecular medicine. 13, e23(2011).
  4. Mescher, A. L. Macrophages and fibroblasts during inflammation and tissue repair in models of organ regeneration. Regeneration. 4 (2), 39-53 (2017).
  5. Struillou, X., Boutigny, H., Soueidan, A., Layrolle, P. Experimental Animal Models in Periodontology: A Review. The Open Dentistry Journal. 4, 37-47 (2010).
  6. Han, Y. W., et al. Interactions between Periodontal Bacteria and Human Oral Epithelial Cells: Fusobacterium nucleatum Adheres to and Invades Epithelial Cells. Infection and Immunity. 68 (6), 3140-3146 (2000).
  7. Boukamp, P., Petrussevska, R. T., Breitkreutz, D., Hornung, J., Markham, A., Fusenig, N. E. Normal keratinization in a spontaneously immortalized aneuploid human keratinocyte cell line. J Cell Biol. 106 (3), 761-771 (1988).
  8. Xiao, L., Miwa, N. Hydrogen-rich water achieves cytoprotection from oxidative stress injury in human gingival fibroblasts in culture or 3D-tissue equivalents, and wound-healing promotion, together with ROS-scavenging and relief from glutathione diminishment. Hum Cell. 30 (2), 72-87 (2017).
  9. Tsuchiya, S., Yamabe, M., Yamaguchi, Y., Kobayashi, Y., Konno, T., Tada, K. Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1). Int J Cancer. 26 (2), 171-176 (1980).
  10. Ara, T., Kurata, K., Hirai, K., Uchihashi, T., Uematsu, T., Imamura, Y., Furusawa, K., Kurihara, S., Wang, P. L. Human gingival fibroblasts are critical in sustaining inflammation in periodontal disease. J Periodontal Res. 44 (1), 21-27 (2009).
  11. Park, E. K., Jung, H. S., Yang, H. I., Yoo, M. C., Kim, C., Kim, K. S. Optimized THP-1 differentiation is required for the detection of responses to weak stimuli. Inflamm Res. 56 (1), 45-50 (2007).
  12. Sharif, O., Bolshakov, V. N., Raines, S., Newham, P., Perkins, N. D. Transcriptional profiling of the LPS induced NF-kappaB response in macrophages. BMC Immunol. 8, 1(2007).
  13. Abcam. Whole mount fluorescent immunohistochemistry. , Available from: http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/whole_mount_fluorescent_ihc.pdf (2017).
  14. Shetty, S., Gokul, S. Keratinization and its disorders. Oman Med J. 27 (5), 348-357 (2012).
  15. Klinge, B., Matsson, L., Attström, R. Histopathology of initial gingivitis in humans. A pilot study. J Clin Periodontol. 10 (4), 364-369 (1983).
  16. Nagarakanti, S., Ramya, S., Babu, P., Arun, K. V., Sudarsan, S. Differential expression of E-cadherin and cytokeratin 19 and net proliferative rate of gingival keratinocytes in oral epithelium in periodontal health and disease. J Periodontol. 78 (11), 2197-2202 (2007).
  17. Goodpaster, T., Legesse-Miller, A., Hameed, M. R., Aisner, S. C., Randolph-Habecker, J., Coller, H. A. An immunohistochemical method for identifying fibroblasts in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue. J Histochem Cytochem. 56 (4), 347-358 (2008).
  18. Langeland, K., Rodrigues, H., Dowden, W. Periodontal disease, bacteria, and pulpal histopathology. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 37 (2), 257-270 (1974).
  19. Holness, C. L., Simmons, D. L. Molecular cloning of CD68, a human macrophage marker related to lysosomal glycoproteins. Blood. 81 (6), 1607-1613 (1993).
  20. Mor-Vaknin, N., Punturieri, A., Sitwala, K., Markovitz, D. M. Vimentin is secreted by activated macrophages. Nat Cell Biol. 5 (1), 59-63 (2003).
  21. Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. The effect of squalane-dissolved on adipogenesis-accompanied oxidative stress and macrophage in a preadipocyte-monocyte co-culture system. Biomaterials. 31 (23), 5976-5985 (2010).
  22. Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. Highly hydroxylated fullerene localizes at the cytoskeleton and inhibits oxidative stress in adipocytes and a subcutaneous adipose-tissue equivalent. Free Radic Biol Med. 51 (7), 1376-1389 (2011).

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