마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법

요약

마우스에 독도의 omental 이식 하는 방법을 소개 합니다. 격리 된 독도 히드로와 혼합 하 고 혼합 당뇨 마우스의 omental 주머니에 배치 됩니다. 그리고, 혈액 포도 당 감시 면역 조직화 학적인 분석을 수행 합니다.

초록

타입-1 당뇨병에 대 한 잠재적인 치료를 작은 섬 이식 제안 되었습니다. 최근 강력한 증거 나타냅니다 혈관 내 섬 주입 이상 까지입니다 이며 따라서는 omentum 섬 이식에 대 한 잠재적으로 가치 있는 사이트로 다시 신흥. 이 실험에는 고품질 독도의 고립과 당뇨병 받는 사람에 게 독도의 주입 필요합니다. omentum에 이식 수술 단계를 더 시각적으로 설명 될 수 있다 필요 합니다. 여기,이 절차에 대 한 자세한 내용은 표시 됩니다. 당뇨병 쥐의 omental 주머니에 혼합물을 배치 하기 전에 히드로와 격리 된 독도 혼합의 두 가지 방법은 여기 설명 되어 있습니다. 다른 hydrogels 다른 조건을 위해 사용 됩니다. Syngeneic 독도 omentum에서 받는 사람 당뇨 마우스의 혈당은 최대 35 일 동안 감시 되었다. 일부 동물 면역 조직화 학적인 분석을 수행 하기 위해 14 일 후에 희생 되었다. 전 임상 이식 이렇게 예비 데이터 임상 이식에 번역을 사용할 수 있습니다.

서론

국제 당뇨병 연맹 (IDF)에 따르면 당뇨병 mellitus 현재 382 백만 사람들, 2035¹592 백만 명 예상된 증가 함께 적용 됩니다. 두 수용자와 xenogeneic 섬 이식 조직 면역 치료가 필요 합니다. 면역 억제, 없이 면역 거부 이식 손실²의 주요 원인입니다. 또한 중재 인스턴트 혈액 염증 반응 (IBMIR)^3,4인 이식된 섬 손실의 중요 한 문제가입니다. 그러나, syngeneic와 같은 면역 반응의 부재에도 자동 이식 모델, 작은 섬 세포는 문맥을 통해 간으로 이식 가난한 혈액 등 불리 한 환경 조건, 또는 염증 때문에 손실 됩니다 또는 공급 감소 산소 및 영양소^5,6. 그 결과, 장기 신진 대사 기능을 보장 하기 위해 높은 섬 번호는 감소 engraftment⁷초기 세포 손실을 보상 하는 데 필요한.

섬 engraftment를 최적화 하기 위해 시도, 여러 대체 해 부 사이트 실험적으로....

프로토콜

이 연구에 사용 된 모든 마우스 의료 동물 센터의 광 동성에서 얻은 했다. 동물의 사용은 동물 복지의 원칙에 따라 윤리 검토 위원회의 심천 제 2 인민 병원에 의해 승인 되었다.

1. 섬 이식은 Omentum 하

참고:이 프로토콜 2 인을 달성 하기 위해 필요 합니다.

1. 표 1에 나열 되는 수술 재료를 조립 한다. 커튼 및 disposables와 같은 메 마른 재료로 외과 영역에서 무 균 필드를 준비 하 고 수술을 통해 무 균 상태를 유지. 모든 수술 기구를 소독. 멸 균 가운 착용.
2. 독도 stereomicroscope에서 200 µ L 피 펫 팁을 사용 하 여 선택 합니다. 각 마우스 450-500 섬 상응 (IEQ) tansplant 당 받게 됩니다. 각 동물에 대 한 CMRL-1066 매체의 100 µ L 살 균 1.5 mL 스냅-탑 튜브에 단일 이식에 대 한 충분 한 독도 놓습니다.
   참고: 독도 이식의 날에 고립 될 수 있다 하지만 격리 프로세스에 대 한 복구를 허용 하도록 하루 전에 그들을 분리 하는 것이 좋습니다.
3. 이식 준비까지 얼음에 독도 스냅-탑 튜브를 유지.
4. 지하실 막 매트....

결과

췌 장 post-digestive 상태는 그림 1A에 표시 됩니다. 순화 독도 그림 1B에서 표시 됩니다. Dithizone 얼룩이 지 고는 독도의 생존 테스트는 그림 2에 표시 됩니다. omentum 작은 섬 이식의 주요 단계는 그림 3에 나와 있습니다. 혈액 포도 당 수준은 omental 이식 후 받는 사람의 그림 4에 나와 있습니다. 이식의 조직학 분석은 그림 5에 표시 됩니다.

토론

문맥을 통해 간 섬 이식 가장 일반적으로 사용 되는 작은 섬 이식의 방법 인간, 하지만 여전히 포털 정 맥 혈전 증과 간 steatosis¹⁷등 효율성과 안전 문제입니다. 최근 연구는 omentum 간, 하지만 더 많은 연구 필요 임상 번역^12,14,,1819전에 실시 해야 적당 한 대안이 있을 수 있습니다 보여줍니다.

마우스 섬 이식에 대 한 사이트는 omentum 테스트를 위해 적합 한 모델입니다. 마우스에는 omentum는 위 벽 아래 있으며 일반적으로 접혀 있다. 그러나, 쥐에서 omentum의 크기는 작고 접근 하기 어려운. 이식에 대 한 사용, 그것은 부드럽게 전체 크기에 그것을 밖으로 확산 다음 독.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Equipment
5 inch (12-13 cm) 가위	RWD 생명 과학	S12030-11
세밀한 집게	RWD 생명 과학	F11010-13
작은 상처 클립	RWD 생명 과학	R33003-01
Acutenaculum	RWD 생명 과학	F31044-13
2 쌍의 조직 집게	RWD 생명 과학	F13023-10
4-0 바늘 봉합사	Chenghe, 중국	17094
200 μ L 피펫 및 팁	Gilson	PN11
One Touch ultraeasy Basic 혈당 모니터링 시스템	존슨 & Johnson	33391713
면도날	Philips	HC1099/15
Material and animals
Pentobarbital Sodium	Sigmaaldrich.com	P3761	마취용
하이드로겔	bdbiosciences.com	356234	베이스먼트 멤브레인 매트릭스
피브린-트롬빈 하이드로겔	Baxter.com	1501250	성분은 혼합시 응고
70% 에탄올	Yingniu medical, 안후이, 중국	23170608
요오도퍼	Lierkang 의료 기술, Shangdong, 중국	170521
생리식염수	Baxter.com	2B1324
Cephalosporin	Lukang medical, Shangdong, China	150303
Cefazolin	Baxter.com	2G3508
윤활제 안연	203964		주요 제약
스트렙토조토신	Sigmaaldrich.com	S0130
콜라겐 분해 효소 V 형	Sigmaaldrich.com	C9262
CMRL-1066 미디어	celltrans, 온주, 중국	X018D1
histopaque	Sigmaaldrich.com	10771	밀도 구배
PE50 튜빙	Braintreesci.com	PE50 100 FT	폴리에틸렌 .023" x .038
Calcein AM	Sigmaaldrich.com	C1359
Propidium iodide	Sigmaaldrich.com	P4864
최적 절단 온도 화합물 (OCT)	Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL	4583	임베딩 배지
인슐린 항체	세포 신호 기술, Danvers, MA 01923	8138S
헤마톡실린 염색 매체	세포 신호 전달 기술, Danvers, MA 01923	14166S
에오신 염색 매체	Beyotime Biotech, China	C0109
DAPI	Thermo Fisher Scientific Inc.	D1306
C57Bl/6 생쥐	의학 동물 센터 광동성	/
태아 소 혈청	GE 헬스케어 생명 과학	SH30084
T175 플라스크	팔콘	353112
1.5 mL 스냅 탑 튜브	Axygen	MCT-150-C