프로토콜에는 회전 타원 체에 perfusable 혈관 네트워크를 설계 하는 방법을 설명 합니다. 회전 타원 체의 주변 microenvironment 신생 유도 microchannels 미세 장치에는 회전 타원 체 연결을 고안 이다. 메서드를 사용 하면 3 차원 문화에 오랫동안 기다려온 기술 회전 타원 체의 관류를 수 있습니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
프로토콜에는 회전 타원 체에 perfusable 혈관 네트워크를 설계 하는 방법을 설명 합니다. 회전 타원 체의 주변 microenvironment 신생 유도 microchannels 미세 장치에는 회전 타원 체 연결을 고안 이다. 메서드를 사용 하면 3 차원 문화에 오랫동안 기다려온 기술 회전 타원 체의 관류를 수 있습니다.
회전 타원 체 (다세포 집계)는 인간의 신체에서 살아있는 조직의 좋은 모델으로 간주 됩니다. 회전 타원 체 문화에서 중요 한 발전에도 불구 하 고 perfusable 혈관 네트워크는 spheroids에 유지 하 고 단백질 식 및 morphogenesis 같은 그들의 기능을 개발 하는 데 필요한 장기 문화에 대 한 중요 한 도전 남아 있습니다. 프로토콜 미세 장치에서 회전 타원 체 내 perfusable 혈관 네트워크를 통합 하는 새로운 방법을 선물 한다. Perfusable 혈관 네트워크는 회전 타원 체에 유도, 신생 콩나물 microchannels에 연결 된 인간의 폐 섬유 아 세포는 회전 타원 체에 경작에서 신생 요소를 활용 하 여는 회전 타원 체를 유도 했다. 신생 콩나물 회전 타원 체, 회전 타원 체, 공동 경작 하는 내 피 세포와 합병을 도달 하 고 지속적인 혈관 네트워크를 형성 했다. 혈관 네트워크 어떤 유출 없이 회전 타원 체의 내부를 perfuse 수 있습니다. 생성 된 혈관 네트워크 영양분의 공급과 혈액 순환 비보를 흉내 낸 폐기물의 제거에 대 한 경로로 추가 사용 수 있습니다. 메서드를 사용 하면 조직 생활의 더 나은 재현 부로 회전 타원 체 문화에서 새로운 플랫폼을 제공합니다.
생활의 세포질 기능을 모방 하는 문화 모델을 사용 하는 필요에 의해 자극 된다 3 차원 문화에 단층 (2 차원) 문화에서 변화 조직1,2,3. 일반적으로 세포 배양에 사용 하는 평평 하 고 단단한 플라스틱 기판 대부분을 인체에 extracellular 환경의 닮는 다 하지. 사실, 많은 연구가 보여주는 그 3 차원 문화 재현 조직 관련 건축, 기계 및 생 화 확 적인 신호 및 셀 통신, 기존의 2 차원 문화4에서에서 관찰 되었습니다 하지, 5,6,,78.
다세포 집계 또는 회전 타원 체,이 3 차원 문화9,10을 실현 하기 위해 가장 유망한 기술 중 하나입니다. 세포는 세포 외 기질 ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
1입니다. 미세 장치 금형의 제작
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
그림 1 에서는 설계 및 미세 소자의 사진. 그것은 3 개의 병렬 채널, 어느 채널에서 2는 회전 타원 체 잘 들어 있습니다. HUVEC 문화에 사용 되는 채널 1과 3 이며 채널 2는 회전 타원 체에 대 한. 각 채널 패턴 PDMS 하도록 설계 된 사다리꼴 microposts로 구분 됩니다. microposts에서 채널 1과 3에 표면 장력에 의해 새 채널 2에서에서 하이드로 겔을 방지 하 고 microchannels28회전 타원 체와 HUVECs 사이의 물질 교환 허용.
그림 7a 셀 시드 후 미세 소자의 센터를 보여 줍니다. 밝은 분야 및 형광 이미지 0에 찍은 섬유 소 젤 채널 1, 3에 채널 2 어떤 누설 .......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
이전 보고서 보기 hLFs angiopoietin 1, angiogenin, hepatocyte 성장 인자, 성장 인자 α, 종양 괴 사 인자와 일부 세포 외 기질 단백질29, 변형 등의 여러 신생 요인의 칵테일을 분 비 30. 이 분석 결과에서 coculture 회전 타원 체, 기술의 한계는 hLFs에서 신생 비에 의존 합니다. 따라서, 그것은 coculture 회전 타원 체와 채널 1과 3에서에서 HUVECs 사이의 거리를 단축 될 수 있다 우물의 바닥에 coculture 회전 타원 체를 설정 하는 안정적인 혈관 형성 중요 합니다. 짧은 거리는 안정적인 혈관 형성에 대 한 유리 섬유 아 세포에서 혈관 길이 내 피 세포 및 섬유 아 세포31, 사이의 거리에 반비례 했다. 그러나, 손상 채널 1 및 3 없이 회전 타원 체 구멍 (직경에서 1 m m)를 열고, 채널 2의 최소 폭 1.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.
이 작품은 크레스트 JST (보조금 번호 JPMJCR14W4), 사회 대는 승진의 과학 (JSP) KAKENHI (25600060, 16 K 16386 번호 부여), 문 부 과학성 및 JST, 프로젝트에서 키 평가 기술 개발에 초점을 맞춘 혁신 프로그램의 센터에 의해 지원 되었다 의료 연구 및 개발, 아메드, 미즈호 기초 과학의 승진을 위한 일본 기관. 소는 교토 대학교 나노 기술 허브에 의해 지원 되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| AutoCAD 2017 | Autodesk | AutoCAD 2017 | |
| AZP 1350으로 코팅된 크롬 마스크. | CLEAN SURFACE TECHNOLOGY | CBL2506Bu-AZP | |
| 마이크로 패턴 생성기 | 하이델베르크 | uPG101 | |
| MF CD-26 현상액 | Rohm and haas electronic materials | - | 프로토콜 1.4 |
| S-Clean | Sasaki Chemical | S-24 | 크롬 에칭액 프로토콜 1.5 |
| Aceton | Wako | 012-00343 | |
| 실리콘 웨이퍼 | Canosis | SiJ-4 | |
| Spin Coater | MIKASA | 1H-D7 | |
| Hexamethyldisilazane (HMDS) | Tokyo Ohka Kogyo | H0089 | |
| SU-8 3050 | MicroChem-Negative | Photoresist in protocol 1.9 | |
| UV Exposure | Nanometric Technology Inc | LA310s | |
| SU-8 개발자 | MicroChem | Y020100 | 프로토콜 1.13의 네거티브 포토레지스트에 대한 개발자 |
| 2-프로판올 | Wako | 163-04841 | |
| 표면 프로파일러 | Veeco | Dektak XT-S | |
| (Trichloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) 실란 | Sigma | 448931 | |
| Polydimethylsiloxane (PDMS) | Dow Corning Toray | 184W/C | |
| 생검 펀치 (1.0mm) | 카이 인더스트리 | BP-10F | |
| 바이옵시 펀치 (2.0mm) | 카이 공업 | BP-20F | |
| 플라즈마 시스템 | 펨토 사이언 | COVANCE | |
| 커버 유리 | MATSUNAMI GLASS | C024241 | |
| Culture Dishes | 이와키 | 1000-035 | |
| RFP 표현 인간 배꼽 정맥 내피 세포 | 혈관 단백 | cAP-0001RFP | |
| 정상 인간 폐 섬유 아세포 | Lonza | CC-2512 | |
| 내피 세포 성장 매체 | Lonza | CC-3162 | |
| 섬유 아세포 성장 미디어 키트 | Lonza | CC-3132 | |
| DMEM | Thermo Fisher Scientific | 11965092 | |
| 소 태아 혈청 | Thermo Fisher Scientific | 26140079 | |
| 페니실린-스트렙토 마이신 용액 | Wako | 168-23191 | |
| 0.05w/v% 트립신-0.53mmol/l EDTA• 4Na 용액과 페놀 레드 | Wako | 204-16935 | |
| PBS (인산염 완충염) | 타카라 바이오 | T900 | |
| 96-웰 플레이트 | 스미토모 베이클라이트 | 631-21031 | |
| 1000ul 칩 | NIPPON Genetics | FG-402 | |
| 200ul Chip | NIPPON Genetics | FG-301 | |
| 10ul Chip | NIPPON Genetics | 37650 | |
| CO2 인큐베이터 | Thermo Fisher Scientific | Model 370 | |
| GFP 발현 인간 배꼽 정맥 내피 세포 | Angio Proteomie | cAP-0001GFP | |
| 소 플라즈마에서 추출한 피브리노겐 | Sigma | F8630 | |
| 소 폐에서 추출한 아프로티닌 | Sigma | A6279 | |
| 콜라겐 I | Corning | 354236 | |
| 소 플라즈마에서 추출한 트롬빈 | Sigma | T4648 | |
| Hoechst 33342 | Invitrogen | H21492 | 프로토콜 5.5에서 핵을 염색하기 위한 형광 염료 파라 |
| 포름알데히드 용액 | Wako | 163-25983 | |
| 도립 형광 현미경 | OLYMPUS | IX71 | |
| 디지털 CCD 카메라 | OLYMPUS | ORCA-R2 | |
| 컨포칼 레이저 스캐닝 생물 현미경 | OLYMPUS | FV1000 | |
| 도립 형광 현미경 | OLYMPUS | IX-83 | |
| 플루오레세인 이소티오시아네이트-덱스트란 | 시그마 | FD70S |
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.