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방법 논문

돌이킬 수 없는 Electroporation의 효과 공부 하는 Syngeneic 췌 장 암 마우스 모델

11K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/57265

⸱

2018년 6월 8일

 ,  ,  , 
1Moores Cancer Center, University California San Diego, 2Duke University School of Medicine

이 논문에서

요약

돌이킬 수 없는 electroporation (분노) 로컬 고급 췌장암의 치료에 사용 하는 비 열 제거 기술입니다. 비교적 새로운 기술 이기 때문에, 종양 성장에 분노의 효과 제대로 이해 된다. 췌장암에 대 한 분노의 효과 공부 하 고 용이 하 게 syngeneic 마우스 모델을 개발 했습니다.

초록

췌장암 (PC), 미국에서 약 40000 환자 년 죽이 질병은 성공적으로 유망한 immunotherapeutic 전략을 포함 한 여러 치료 접근을 피할 수 있습니다. 돌이킬 수 없는 electroporation (분노) 따라서 종양 혈관 가까이 매우에 수행 하는 절차를 사용 하면 인접 한 collagenous 구조의 파괴 없이 종양 세포 죽음을 유도 하는 비 열 제거 기술 이다. 열 제거 기술, 달리 분노 유발 즉시 제거 괴 사, 함께 점진적 apoptotic 세포 죽음에 결과 이며 현재 로컬 고급 PC 선택 된 환자에 대 한 임상 사용. 융 제, 분노 같은 비 대상 특정 절차 종양 microenvironment에 반응의 무수 한을 유도할 수 있다. 몇 가지 연구는 다른 종양 유형, 종양 성장에 분노의 영향을 해결 하지만 아무도 PC에 집중 했다. 우리는 다양 한 경도 연구 포스트 절차를 용이 하 게 높은 통제 속에서 분노와 피하 (SQ)와 orthotopic 종양 대우 될 수 있다 성공적으로 PC의 syngeneic 마우스 모델을 개발 했습니다. 이 동물 모델 분노와 분노의 임상 효능을 개선 하는 방법의 효과 연구 하는 강력한 시스템 역할을 합니다.

서론

췌 장 ductal 선 암 (PC) 20201주위 미국에서 암 사망의 두 번째 주요 원인이 될 전망 이다. PC 진단 환자의 대부분은 먼 전이성 질환2에서 결국 죽을 것 이다. PC microenvironment는 악명 높게 면역 및 chemoresistant. 그것의 desmoplastic 기질 포함 이펙터 (안티 종양) T 세포의 부족 및 종양 관련 된 대 식 세포 (Tam)을 포함 한 면역 백혈구의 굴지, 골수성 파생된 억제기 세포 (MDSCs), 및 규제 T 세포 (Tregs)3 . 이 microenvironment의 이러한 효과 중화 하는 복합 전략을 개발할 필요가 기반이 됩니다.

분노는 종양 절제의 비 열 방법으로 개발 되었습니다. 열 제거 기술, 달리 분노 빠른 coagulative 괴 사를 발생 하지 않습니다 있지만 대신 점진적 apoptotic 세포 죽음4에 결과. 중요 한 것은 췌 장 종양에 대 한 분노는 "열 싱크" 효과에 취약 하 고 혈관5옆 바로 수행할 수 있습니다. 이 기술은6 FDA 510(k) 허가 있으며 현재 사용 되 고 임상, 선택한 로컬 고급 또는 경계선 불과하다 췌장암 환자. 가장 큰 출판된 시리즈에서 분노의 PC7대, 분노를 받은 환자의 평균 생존 약 두 번 절제8,9없이 혼자 현대 화학 요법으로 치료 하는 환자의 생존이 했다.

몇몇 학문은 그 열 제거 (검토 추 외 에 다른 종양 유형에서 조직의 면역 반응 유도 설명 했다 10). 고주파 제거 (RFA) 동물 종양 모델 리드 증가 T 세포에에서 침투11,12, 간세포 암 환자13, 활성화 된 자연 킬러 (NK) 세포에 있는 증가 포함 하 여 14, 그리고 면역 Tregs 폐 암 환자15감소. 연구의 많은 더 작은 수는 면역, microenvironmental, 그리고 부상 응답 분노16을 시험 했다. 분노는 보조 (contralateral) 신장 세포 이식의 성장 또는 감소 했다 2 주 기본 종양의 분노를 예방할 immunocompetent 마우스 모델에서 조직의 면역 반응을 자극 하 표시 되었습니다 이전17. 그들은 또한 immunocompetent 쥐 immunocompromised 쥐 보다 완벽 한 회귀에 대 한 더 적은 전압 필요한 관찰. 그것은 분노의 열 제거, coagulative 괴에 비해 향상 된 항 원 프레 젠 테이 션 될 수 있습니다 하지만이 특별히 공부 하지는 가설 되어 있다.

KPC-뤽 4580 셀 선 (제이 예치 노스캐롤라이나 대학에서에서 선물), 남성 LSL Kra 개발한 종양에서 파생 되었다에서 PC의 syngeneic 마우스 모델 개발 했습니다G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL ROSA26 루크 / + 마우스, 분노18,19의 지역 및 조직의 효과 공부 하. 이 luciferase 표현 셀 라인 면역성 이며 또한 immunocompetent C57BL/6 쥐에 tumorigenic SQ orthotopically를 주입 하 고 안정적으로 생산 하는 간 전이 비장에 주입 했을 때. 우리 두 바늘 배열 조사 (5 m m 구분) 또는 광장 또는 orthotopic 종양, 플래티넘 트위터-trodes를 사용 하 여 1500 V/cm의 비 전압/거리에 전기의 100 µs 펄스를 제공 하는 프로그래밍 가능 구형 파 펄스 발생기 활용에서 각각, 작은 동물에 분노의 효과 모델링 하 쥐.

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프로토콜

모든 동물 실험 수행 다음이이 프로토콜 각 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인을 받아야 한다. 여기에서 설명한 모든 절차는 IACUC UCSD에 의해 승인 되었습니다.

1. 조달 받는 동물

참고: KPC 뤽 4580 셀 라인 LSL Kra에서 발생 하는 종양에서 설립 되었다G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL ROSA26 루크 / + 마우스 (KPC), C57BL/6 배경에 PC의 유전자 조작된 모델입니다. 이 셀 라인의 장점은 그것 constitutively orthotopic 모델에서 종양 모니터링 luciferase 활성화 표현 한다입니다. 그러나, 다른 셀 라인으로 그들은 받는 사람 쥐의 유전 배경와 호환 사용할 수도 있습니다.

  1. 사전에 실험 그룹 및 그룹 당 동물의 수를 결정 합니다.
  2. 나이 (6-10 주 오래 된 마우스 권장)을 선택 하 고 섹스 가설 및 셀 선 사용 되는 동물의 사용.

2. 문화 셀

  1. 사용 Dulbecco의 독수리 매체 (DMEM)을 수정: 영양소 혼합 F12 (50: 50) 미디어 KPC 뤽 4580 세포 성장 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 및 1% 페니실린 스 항생제 (완전 한 성장 매체).
  2. 동결, 해빙 세포 종양 이식 전에 4 일.
  3. 무 균 조건 하에서 5% CO2 와 95% 습도 37 ° C에서 세포 성장.
  4. 0.25% 셀 trypsinize 37 ° c를 도달 하기 전에 5 분 동안 트립 신 > 80 %confluency 트립 신 완전 한 성장 매체의 볼륨을 두 번 추가 하 여 무력화.
    참고: 이러한 셀 할 설정 하지 종양 효율적으로 쥐에 그들은 100 %confluency 사용 하는 경우 또는 그들은 이상 12 회에 대 한 passaged는 경우. 따라서, 그것은 최적의 confluency에서 이전 구절에서 세포를 고정 하는 것이 좋습니다.
  5. hemocytometer를 사용 하 여 셀의 개수 및 적절 한 숫자는 존재 하는 경우 종양 유도를 진행 (0.5-1 x 106 셀/마우스). 그렇지 않은 경우에 적절 한 세포 수는 때까지 한 더 많은 통로 대 한 셀을 확장.

3입니다. 평방 종양의 유도

  1. 필요한 재료 준비: P1000 및 P100 펫, 팁, 1 mL 주사기 25 G 바늘, 지하실 멤브레인 매트릭스 (BMM) DMEM 기저 미디어, 1.5 mL 튜브 원심. 프로시저의 끝까지 모든 재료 살 균과 감기 (4 ° C)를 유지. 또한 발기를 유지 하 고 알코올 면봉 동물 사용에 대 한 준비.
  2. Trypsinize (에 의하여 2.4 단계) 하 고 셀, 2 배속 감기 DMEM의 107 셀/mL의 농도에서 그들을 resuspend.
  3. 100%의 동일한 볼륨을 추가 50%에서 최종 세포 현 탁 액을 만들기 위해 BMM BMM. 마지막 볼륨 세포 현 탁 액 요구 각 마우스의 50 µ L를 도달 해야 한다. 주사기에 pipetting 오류에 대 한 죽은 공간에 맞게 초과에서 10%를 준비 합니다.
  4. Aliquot 1.5 mL 원심 분리기 튜브에 550 µ L 볼륨에 정지 얼음에 배치.
  5. 동물 (6 주 오래 된 남성 C57BL/6 쥐)는 restrainer를 사용 하 여 억제 또는 수동으로.
    참고: 또는, 쥐 수 수 anaesthetized 2.5 %isoflurane 정밀 기화 기를 사용 하 여 2 L/min의 유량에서 산소 가스에서와 함께.
  6. 면도 선호 다리 위에 측면에 사용 하는 어 선 주사의 사이트. 알코올 면봉을 사용 하 여 두 번 주사의 사이트를 청소.
  7. 감기 1 mL 주사기에 107 셀/mL x 1-2의 최종 농도에 세포 현 탁 액의 250 µ L 그리고 피스톤을 아래로 이동 하 여 모든 기포를 제거. 주사기에 25g 바늘을 연결 하 고 바늘 내 공간을 채우기 위해 확인 한다.
  8. 조심 스럽게 옆구리, 복 막 구멍 또는 사지의 근육 바늘 피어스 하지 않습니다 확인 하 고 근처 시체에 30 ° 각도로 피부 밑에 바늘을 삽입 합니다.
  9. 평행 본문, 바늘을 평평 하 게 피부에 주름을 평평 하 게. 세포 현 탁 액의 50 µ L를 천천히 주사. 10에 대 한 주입의 위치에 바늘을 잡고 어떤 누설을 방지 하기 위해 응고 BMM 있도록 s.
  10. 천천히 그것을 유지 하는 어떤 측면 운동 없이 병렬 바늘 철회. 부드럽게 알코올 면봉과 주사의 사이트를 청소 하 고 그 주택에 마우스를 놓습니다.
    참고: 마우스는 절차 동안 마 취를 하는 경우 그것은 righting 반사를 차릴 때까지 동물을 모니터링 합니다.
  11. 직경에서 5mm를 도달할 때까지 정기적으로 캘리퍼스를 사용 하 여 종양의 성장을 모니터링 합니다.

4입니다. 유도 Orthotopic 종양의

  1. 필요한 재료를 준비 합니다. 오토 클레이 브는 수술 도구 등 지적 scalpels, 바늘 드라이버가 위 및 평면 밀고 집게. 편리한 무 균 봉합 (흡수 6-0 및 비 흡수 4-0), 알코올 면봉, 헤어 클리퍼 스, depilatory 크림, 눈 윤 활 유, 면화 거 즈, 10 %povidone 요오드 솔루션, 수술 커튼, 난방 패드, buprenorphine, 및 마 취 에이전트 유지.
  2. (되도록이면 같은 배경 orthotopic 모델에 필요한)의 기증자 마우스를 안락사 느린 채우기 CO2 챔버를 사용 하 여 SQ KPC 종양을 들고. 소독 집게와 곧 orthotopic 이식 전에 microscissors를 사용 하 여 BSL-2 후드에서 무 균 조건 하에서 신중 하 게 평방 종양 삭제하시오 종양 절제 동안 복 막 구멍 찌를 세척 살 균 PBS의 2 교류와 즉시 종양을 주의.
  3. 살 균 scalpels를 사용 하 여 1 m m3 조각으로 삭제 종양을 말하다, 그들 감기 균 DMEM 기저 미디어를 포함 하는 배양 접시에 놓고 이식까지 얼음에 저장.
  4. 관리 받는 사람 마우스 0.05-1 mg/kg buprenorphine 진통제 SQ, 수술 전에 30 분.
  5. 정밀 기화 기 (또는 다른 마 취 에이전트)를 사용 하 여 산소 (2 L/min)에서 2-3 %isoflurane 받는 사람 마우스 anesthetize 프로시저의 전체에 대 한 패드를가 열 하는 37 ° C에 마우스를 유지. 건조를 방지 하기 위해 눈에 윤활제를 적용 합니다. 놀라운 반사 처음의 부족에 의해 마 취의 깊이 테스트 하 고 부드러운 발가락 핀치에 페달 반사의 부족에 의해 외과 비행기 마 취를 확인 합니다. 전체 수술 중 마 취를 유지 합니다.
  6. 그것의 뒤에 마우스를 놓고 부드럽게 복 부의 왼쪽 노출 되도록 그것의 오른쪽으로 설정 합니다. Depilatory 크림을 사용 하 여 마우스의 복 부를 제거 하 고 무료로 머리카락 복 부 게시물 절 개 입력 되도록 거 즈로 청소. 피부 소독에 알코올 잎사귀 뒤 10 %povidone 요오드의 3 주기를 사용 하 여 수술에 대 한 왼쪽된 복 부를 준비 합니다.
  7. 살 균 메스를 사용 하 여 만들 1.5 c m 가로 또는 경사 절 개 피부, 흉 곽, 아래 중간의 왼쪽에 1 cm에서에서 비장을 약간 중간. 그런 다음, 복 부 근육, 미러링 overlying 표면 절 개를 통해 절 개를 확장 합니다.
  8. 평면을 사용 하 여 비장 집게를 밀고 찾아서 부드럽게 복 부 구멍에서 그것을 외부화. 메 마른 면 주걱을 사용 하 여 비장을 철회 하 고 비장의 하단에 부착 된 췌 장의 꼬리를 찾을.
  9. 평면 밀고 집게를 사용 하 여, 췌 장의 꼬리 옆으로 철회.
  10. 소독 집게를 사용 하 여 위치를 벌금 (6-0) 살 균 suturing 바늘의 팁과 기증자 마우스에서 하나의 잘게 다진된 종양 조각 들고.
  11. 동안 부드럽게 췌 장의 꼬리/몸 옆으로 축소, 췌 장의 꼬리에 종양 조각 포함 된 봉합 바늘을 삽입 합니다. 천천히 들고 췌 장 꼬리를 접촉 하 여 종양 조직을 통해 봉합을 전달 합니다. 조직에 관하여 단편의 방향에 따라 하나 또는 두 개의 추가 봉합을 적용 합니다.
  12. 조직에서 바늘을 완전히 제거 하 고 췌 장/비장 추가 60 externalized 계속 출혈 또는 누출의 어떤 표시 든 지를 검사 하는 동안 s. 무딘 집게를 사용 하 여 복 부 구멍으로 그들을 부드럽게 internalize 다음.
  13. 복 부 근육으로 6-0 흡수 봉합 사를 사용 하 여 연속 또는 중단 스티치 닫고 overlying 피부는 3-0 6-0 비 흡수 중단된 봉합 사를 사용 하 여 닫습니다. 이 시점에서 마 취를 중단 합니다.
  14. 마우스와 음식 및 물의 홈 장에 복구를 허용 합니다. 회복을 촉진 하는 생리대에 케이지를 놓습니다. 복구 프로세스 동안 관류 등, 호흡 등 생체 신호를 모니터링 합니다.
  15. 일단 마우스를 복구, 그리고 다음 반환 케이지 일반 주택 수 있는 반사를 righting의 징후를 확인 합니다.
  16. Buprenorphine 0.05-0.1 mg/kg를 관리, 수술 후 8-12 h 그리고 고통의 표시를 위해 필요에 따라 절차 후 모든 8-12 h.
  17. 종양의 성장은 vivo에서 생물 발광 이미징 시스템을 사용 하 여 모니터링 ( 재료의 표참조).
    1. 이미징 orthotopic 이식 후 4 일에 시작 하 여 종양의 성장에 따라 고 이미징 일주일에 두 번 수행 합니다.
    2. 화상의 날 (복 주입) 관리 D-소는 마 취에 30 mg/kg (산소 (2 L/min)에서 2-3 %isoflurane) 받는 사람 마우스 이미징 하기 전에 10 분.
    3. 5 s 노출 자동 형광 무료 열띤된 무대와 쥐에 대 한 마 취 유지 하면서 발광 영상에서의 최소 배출 필터 없이 발광 설정을 사용 하 여 luciferase 활동에 대 한 이미지.

5입니다. SQ 종양의 분노

  1. 필요한 재료 준비: 정사각형 웨이브 electroporator, 안전 발 스위치, 전극 (족집게 trode 대 바늘 배열), 및 어댑터. 무 균 봉합 (비 흡수 4-0), 알코올 면봉, 헤어 클리퍼 스, depilatory 크림, 눈 윤 활 유, 면화 거 즈, buprenorphine, 및 마 취약 또한 근처.
  2. 족집게를 소독 하거나 살 균 가스를 사용 하 여 배열 전극 바늘. 압력가 마로 소독을 권장 하지 않습니다. 유리 구슬 소독 기를 사용 하 여 동물 사이의 전극 소독.
  3. 관리 buprenorphine 0.05-0.1 mg/Kg는 종양 방위 쥐 절차 전에 30 분.
  4. 단계 4.4-4.5 평방 종양 이식 5 m m 직경에 도달 하면 성공적으로 마우스 마 취를 유도 합니다.
  5. 측면에 평방 종양에 액세스 하는 측면에 마 취 마우스를 놓습니다. 머리 깍 고 알코올 면봉을 사용 하 여 깨끗 한 피부를 사용 하 여 제거 합니다.
  6. 평방 종양 2 바늘 배열 전극 사용 하 여. 집게를 사용 하 여 종양 사이트 바로 아래 피부를 상승 하 고 복 막 구멍을 침투 하지 않는 다는 것을 확인 하는 신체에 평행 하 게 피부를 통해 전극을 삽입. 일단 피부를 통해 그들은 종양 대괄호 같은 방법으로 전극 위치.
  7. 100 µs 펄스 150 펄스의 총 1500 V/cm에서 1 Hz의 주파수에 전달 하기 위해 electroporator 프로그램. 발 페달을 사용 하 여 펄스를 제공 합니다. 10 10 펄스의 각 집합을 별도 s, 방열에 대 한 허용 하 고 전극의 올바른 위치를 확인.
    참고: 마비 에이전트를 사용 하지 않고 마우스는 수동으로 확보 하지 않는 한 전극의 변위를 일으킬 수 있는 분노와 근육 수축 발생 합니다.
  8. electroporator에 표시 되는 실제 전압 전달, 200 미 레코드를 초과 하지 않아야 완전 한 주입 후 전극을 제거 합니다. 수 단계 4.14-4.16 당 분노를 다음 복구 하 쥐.

6입니다. Orthotopic 종양의 분노

참고: orthotopic 종양의 분노는 따라서 시작 하기 전에 현지 IACUC에서 특별 한 승인 요구 같은 마우스에 두 번째 생존 수술을 포함 한다.

  1. 필요한 재료 준비: 압력솥 scalpels,가 위, 바늘 드라이버, 수술 도구 겸 자, 그리고 평면 집게를 밀고. 뿐만 아니라 인근 다음 유지: 무 균 봉합 (흡수 6-0 및 비 흡수 4-0), 알코올 면봉, 헤어 클리퍼 스, depilatory 크림, 눈 윤 활 유, 면화 거 즈, 10 %povidone 요오드 솔루션, 수술 커튼, 난방 패드, 구형 파 electroporator 안전 발 스위치, 전극 및 그들의 어댑터, buprenorphine, 및 마 취약.
  2. Vivo에서 화상 진 찰에 의해 orthotopic 종양 성장 위한 쥐를 평가 (단계 4.17 참조) intraperitoneally D 소의 30 mg/kg을 주입 하 여.
    참고: orthotopic 종양 종양 췌 장에 Luciferase 발광 이미지 ( 대표 결과참조)에서 볼 수 명확 하 게 표시 하 고 여전히 제한 된 때 분노 치료 8 ~ 10 일 포스트 주입에 이상적입니다.
  3. 단계 4.4-4.9, 이식된 종양을 찾으려고 합니다. 종양 쉽게 찾을 하지 않으면 무딘 코 집게를 사용 하 여 위장과 비장 종양 식별을 부드럽게 이동.
  4. 무딘 코 집게와 종양을 외부화 하 고 족집게 trode의 백 금 전극으로 단단히 종양. 단계 10 펄스 발 스위치에 의해 제어의 세트에서 구형 파 electroporator를 사용 하 여 5.7에서에서 프로그래밍 electroporation 펄스를 제공 합니다.
  5. 적어도 60 s 게시물 출혈의 어떤 표시 든 지에 대 한 모니터링을 분노 externalized 종양을 유지. 기술된 이전 (단계 4.13-4.16)로 절 개 종양 복 부 구멍에 다시 삽입 닫고 복구 될 때까지 마우스를 모니터링 합니다.
  6. 단계 4.17에 의하여 luciferase 이미징 vivo에서 를 사용 하 여 종양의 성장에 분노의 효과 모니터링 합니다.

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결과

우리는 절차를 따라 위에서 설명한 고 5-6 주 오래 된 야생 타입 C57BL/6 쥐 50 %1 x 106 세포 주사에 평방 종양 생성 BMM. 종양 크기 직경에서 5-6 m m에 도달 하면 쥐의 몇 가지 했다 안락사, 그들의 종양 excised 했다 orthotopically 받는 사람 C57BL/6 쥐에 이식. 그림 1에 타임 라인에 같이 분노 수행된 10 일 게시물을 이식 했다. 분노는 베어링 평방 종양 나머지 쥐에서 수행 되었다.

SQ에 종양, 분노 전압 및 펄스 기간 했다 일정 하 게 유지 1500 V/cm 및 100 µs, 각각, 하지만 펄스 수 변화. 그림 2 는 몇 가지 생쥐에서 평방 종양 150 펄스 분노 하지만 뿐만 아니...

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토론

이 연구에서 우리가 종양 성장에 분노의 효과 연구 하는 데 사용할 수 있는 PC에 대 한 immunocompetent 마우스 모델을 증명 하고있다. 현재, 분노 먼 질병의 수술 치료의 달 후에 진행 하지 않은 매우 선택한 로컬 고급 PC 환자에만 비 열 제거 기법으로 사용 됩니다. 그것의 사용 그러므로 제한 되었습니다 로컬 고급 PC 가진 대부분의 환자는 먼 전이성 질환20를 개발 하기 때문에. 이 모델은 다양 한 확장된 치료 매개 변수 및 조합을 사용 하 여 PC에 분노의 효과 평가 하는 연구를 기반으로 될 것입니다.

프로토콜 중 고려해 야 할 가장 중요 한 것은 분노를 수행 하는 종양의 크기. 쥐 모델에 대 한 상업적으로 이용 가능한 프로브는 그들의 전극 거리 (5-10 m m)에 의해 제한 됩니다. 따라서,에서 전극 거리 보다 훨씬 더 큰 종양, 불완전 절제가 일어난다. 평방 종양에 대 한 트위터-trodes 이상의 2 바늘 배열 ...

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공개 사항

저자는 아무 관련 재정 공개를 있다.

감사의 글

이 공동 번역 상 연구 보조금 샌디에고 C3 박찬호 페달에 의해 자금 원인 (#PTC2017) 작동 RRW 지원을 받고 있다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
ECM 830 사각 파 전기포레이터하버드 장치BTX # 45-0002 ( 58018-004 )
2 바늘 배열 전극하버드 장치45-0167
안전 풋 스위치하버드 장치45-0211
플래티넘 핀셋 트로드하버드 장치  45-0486
DMEM-F12 매체ThermoFisher Scientific11320-033
소 태아 혈청ThermoFisher Scientific10437028
TrypsinThermoFisher Scientific25200056
MatrigelCorning 354230
이소플루란시그마-알드리치, Inc.
LacrilubeFisher Scientific 
부프레노르핀피셔 사이언티픽 
D-luciferrinPerkin Elmer122799
IVIS  스펙트럼 In Vivo 이미징 시스템Perkin Elmer124262
Mouse strain C57BL/6JThe Jackson Laboratory 000664/블랙 6
세포주(KPC-Luc 4580)노스캐롤라이나
BD Precisionglide 주사기 바늘Sigma-Aldrich, Inc.
알코올 면봉 (70 % 이소 프로필 알코올BD326895
디지털 캘리퍼스ThermoFisher Scientific14-648-17
일회용 메스, 멸균VWR21909
코튼 팁 애플리케이터VWR89198
봉합 바늘, 45cm, 크기 6-0Harvard Apparatus72-3308
봉합 바늘, 45 cm, 사이즈 4-0하버드 장치72-3314
포비돈-요오드 10%BD29900-404
일회용 보온 패드 켄트 사이언티픽 코퍼레이션TP-3E
마우스 이발기KENT SCIENTIFIC CORP.CL8787
외과용 드레이프하버드 장치59-7421
인산염 완충 식염수ThermoFisher Scientific10010023
79263219090646NC1292810대학교 J.J. Yeh LabZ192406)

참고문헌

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