Diabetogenic 환경 화학 물질에 대 한 Murine 췌 장 섬 세포 기반 검사

요약

여기 우리는 잠재적인 diabetogenic xenobiotic 화학 물질 식별는 xenobiotics에 의해 선생님 inductions을 심사에 대 한 마우스 췌 장 섬 세포 격리 프로토콜을 제시.

초록

인간과 동물에서 특정 환경 화학 물질에 노출은 타입-2 당뇨병 mellitus (T2DM)의 개발으로 이어질 것 이다 췌 장 β 세포의 세포 손상을 발견 되었습니다. 화학 유도 β 세포 손상에 대 한 메커니즘은 불분명 하 고 복잡 한 것 같다, 비록 한 되풀이 발견은 이러한 화학 물질에 손상을 유발합니다 과도 한 반응성 산소 종 (선생님)의 생성을 선도 하는 산화 스트레스 유발 β 세포입니다. 우리 C57BL/6 마우스의 췌 장 섬 세포과 교양된 섬 셀 96 잘 세포 배양 배지;에 있는 고립 된 잠재적인 diabetogenic 환경 화학 물질 식별, 그리고, 작은 섬 세포는 화학 물질과 복용 했다 선생님 세대 2', dichlorofluorescein (DCFH-다)-7' 형광 염료에 의해 발견 되었다. 이 방법을 사용 하 여, 우리는 bisphenol A (BPA), Benzo [a] pyrene (BaP), 그리고 비페닐 (PCBs), 그들은 잠재적으로 작은 섬 세포에 손상을 유발 수 있습니다 제안 하는 선생님의 상부 유도 수 있습니다. 이 메서드는 diabetogenic xenobiotics를 심사 하는 데 유용 해야 합니다. 또한, 경작된 작은 섬 세포 췌 장 세포에서 화학 유도 된 독성의 생체 외에서 분석에 맞게 수도 있습니다.

서론

T2DM의 보급에 있는 증가 최근 몇 년 동안 공중 보건¹에 심각한 위협이 포즈 세계 보건 위기 되고있다. 많은 요인이 발견 되었습니다 원인이 되는, T2DM의 개발에 연결 될 반복 결과 것이 좋습니다 이러한 요소에 대 한 하나의 일반적인 집중 포인트의 과도 한 선생님² 세대에 이르게 산화 스트레스의 유도 ^{, 3}.

환경 화학 물질 PCBs, 다이옥신, BaP 등의 다양 한 스펙트럼 유발 산화 스트레스, 췌 장 β 세포의 기능을 손상 하 고 인슐린 저항 및 T2DM⁴이어질 수 있습니다 발견 되었습니다. 선생님의 생리 적 수준 세포 기능에 중요 한 역할을, 비록 항 산화 시스템의 용량을 초과 하는 선생님에 노출 세포/조직에 손상 귀착되 고 질병⁵리드. 췌 장 β 세포 항 산화 효소의 낮은 수준의 표현 되며 따라서 산화 스트레스 중재 손상^6,7에 대 한 중요 한 목표. 선생님의 상부에 만성 노출은 췌 장 세포 스트....

프로토콜

모든 동물 실험은 모든 관련 지침, 규정 및 규제 기관에 따라 실행 했다. 지도 및 게놈 의학 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 텍사스 A & M 연구소의 승인 아래 프로토콜 입증 되 고 수행 되었다.

1. 솔루션 준비

1. 두 배 증류수 H₂O, 1 x 10 x 행 크의 균형된 소금 솔루션을 희석 하 고 4 ° c.에 저장
2. HEPES (10 m m), MgCl₂ (1 m m), 포도 (5 m m)를 추가 하 여 격리 솔루션을 준비 합니다. PH 7.4에 조정 하 고 얼음에 계속.
3. 유형 4 콜라에서 콜라 솔루션을 준비 합니다.
   참고: 특히, 콜라 유형 4 건조 중량의 밀리 그램 당 160을 U 포함 되어 있습니다. 콜라 유형 4의 1 g 5 mL 두 배 증류수 H₂O 200 mg/mL의 농도로 희석입니다. 희석된 콜라의 2 mL 30 mL 얼음 차가운 격리 솔루션에 추가 되 고 콜라 솔루션의 6 mL 50 mL 튜브 각 마우스에 대 한 전송 됩니다.
4. 1mm CaCl₂ 격리 솔루션에 추가 하 여 세척 솔루션을 준비 합니다.
5. 찬 polys....

결과

건강 한 고립 된 섬의 현미경 사진 그림 2, 독도 원형 또는 타원형 모양으로 비교적 균일 한 크기 (비록 크기 균일성 스트레인 스트레인에서 다를 수 있습니다)를가지고 있는에 표시 됩니다. 우리 다음 조사 생체 외에서 분석 결과에서 췌 장 섬 기능 분리는 섬 하 고 문화 독도에서 인슐린 분 비를 자극. 그림 3 GSIS 분석 결과 3.3 m m와 16.7 m m 포도 당⁹에 의해 유도 된 C57BL/6 마우스 고립 된 독도에서 우리의 일반적인 분석을 보여준다.

플레이트 형식 화면 메서드를 사용 하 여 우리는 작은 섬 세포 (그림 4) 선생님의 중요.......

토론

환경 화학 물질에 노출을 제안 증거를 축적 T2DM의 개발에 중요 한 역할. Xenobiotics 유도 선생님 T2DM의 발전에 기여 하는 잠재적인 etiological 요인으로 인식 하고있다. 인간은 다양 한 xenobiotic 화학 물질에 노출 되는 그리고 췌 장 이용과 효과적으로 식별 하 고 췌 장 세포에 독성의 기계 장치를 조사 하는 새로운 연구 기법에 대 한 큰 필요.

¹⁴, 게시 된 절차 따라 본이 연구에서는 우리 췌 장 세포를 산화 스트레스 유발 손상 xenobiotic 화학 물질과 세포 마우스와 화면에서 췌 장 독도 격리 프로토콜 개발 했습니다. 우리는 또한 xenobiotic 화합물에 의해 유도 된 췌 장 특정 독성 응답을 조사 하기 위해이 절차를 사용 합니다. 마우스에서 췌를 얻으려면, 우리는 혈액 포도 당 수치를 변경 하지 않습니다 하기 때문에 췌 장^15,.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
10&번; 행크' S 균형 잡힌 소금 용액	GIBCO	14185-052
콜라겐분해효소 타입 4	Worthington Biochemical Corporation	CLS-4
폴리수크로오스/디아트리조산 나트륨 용액	Sigma	10771
2',7'-dichlorofluorescein (DCFH-DA)	Sigma	D6883-50MG
형광 마이크로플레이트 리더	Biotek
L-글루타민	시그마	G8540-25G
스트렙토마이신	GIBCO	15140148
FBS	GIBCO	26140079
RPMI 1640	GIBCO	11875-085
avertin	시그마	T48402-25G
쥐/마우스 인슐린 ELISA 키트	Millipore	EZRMI-13K
96웰 플레이트용	원심분리기	Sorval	Sorval RT7
Microplate reader	광 판독용	Biotek	Epoch 2

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