핵 accumbens에 있는 도파민 D1-알파 수용 체의 식별은 중앙 신 경계 질환 중 D1 수용 체 역 기능을 명확히 중요 합니다. 우리는 새로운 RNA 제자리에서 교 잡 분석 결과 시각화 특정 뇌 영역에 하나의 RNA 분자를 수행.
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방법 논문
탐지 기술 현장에서 혁신적인 RNA에 의해 설치류 핵 Accumbens에서 도파민 D1-알파 수용 체의 식별
이 논문에서
요약
초록
중앙 신경 조직에서 D1-알파 하위 수용 체 (Drd1α)은 가장 풍부한 도파민 (DA) 수용 체, 조절 신경 성장 및 개발에 중요 한 역할을. 그러나, Drd1α 수용 체 이상 행동 응답을 중재 하 고 변조 작업 메모리 기능을 기본 메커니즘을 아직 명확 하지 않다. 새로운 RNA 제자리에서 교 잡 분석 결과 사용 하 여, 현재 연구 식별 도파민 Drd1α 수용 체와 티로신 hydroxylase (TH) RNA 식 핵 accumbens (NAc) 지역과 substantia nigra 지역 (SNR)에 다 관련 회로에서 각각. Drd1α 식은 NAc에 얼룩 패턴 "개별 점"을 보여줍니다. 분명 성 다름 Drd1α 식에서 관찰 되었다. 반면, 일 "클러스터 된" 얼룩 패턴을 보여 줍니다. 일 식에 관한 여성 쥐 남성 동물을 기준으로 셀 당 더 높은 신호 식 표시. 여기에 제시 된 방법을 중앙 신 경계 질환의 진행 하는 동안 변경 내용을 도파민 시스템 장애에서를 조사 소설 현장에서 교 잡 기술을 제공 합니다.
서론
부전 striatal 도파민 시스템의 여러 neurocognitive 질병에서 관찰 하는 임상 증상의 진행에 포함 된다. 도파민 D1 수용 체는 두뇌의 전 두 엽 피 질 (PFC) 지역과 striatal에 존재 하 고 무 겁 게 영향 인지 프로세스1, 작동 메모리, 시간 처리, 및 기관차 동작2,3 등 , 4 , 5 , 6 , 7. 이전 연구는 도파민 D1 수용 체의 변화 주의 적자 과다 장애 (ADHD)8, 정신 분열 증9, 에 neurocognitive 증상의 진행과 관련 된 했다 해명 10 , 스트레스 감수 성11. 특히, 정신 분열 증, 양전자 방출 단층 촬영 (PET) 연구 엽 외피가 있는 도파민 D1 ....
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프로토콜
실험 프로토콜 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 사우스 캐롤라이나 대학에 의해 승인 되었다 (연방 보증 번호: A3049-01).
1입니다. 신선한 냉동된 뇌 섹션의 준비
- F344/N 쥐 긴장을 사용 하 여: 각 성의 3 쥐 13 개월, 몸 무게 약 320 g.
- 5% (sevoflurane의 과다) sevoflurane 농도 조정 합니다. 추가 분에 대 한 중지를 호흡 후 sevoflurane 노출을 계속 합니다.
- 목을 벨 쥐 하 고 두뇌를 제거 합니다.
- 15 액체 질소에 쥐 뇌 잠수함 s 조직 수확의 5 분 이내.
- -20 ° c에서 1 h cryostat 뇌 equilibrate
- 30 µ m 섹션을 잘라내어 슬라이드 ( 재료의 표참조)에 전송.
- 핵 accumbens 지역 Bregma14앞쪽 2.28 m m 약 2.76 m m에서에서 섹션을 선택 하십시오.
- 지속적으로 쥐의 stereotaxic 두뇌 구조에 따라 핵 accumbens 영역을 통해 후 각 전구에서 쥐 뇌를 슬라이스.
- 샘플 슬라이드에 탑재 합니....
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결과
현재의 연구는 관찰 F344/N 쥐 (그림 1A)에서 NAc의 도파민 D1-알파 수용 체 (Drd1α)에서 RNA 식에 대 한 패턴을 얼룩이 지기 "개별 점". 개별 형광 신호 쉽게 확인 하 고 각 셀 내에 단일 RNA 사본을 나타내는 단일 "점"으로 볼 수 있습니다. "이산 점 들" 얼룩 패턴을 표시 하는 NAc에서 이미지에 대 한 우리 반 정량 분석 (그림 1A, 그림 2A및 2B)를 사용 하 여 식의 동적 범위를 평가 합니다. 각 셀은 "0-9에서" 셀 당 도트 수에 따라 득점 했다. 이 "교배 신호"-점수 (H 점수) 방법 따라서 평가할 수 범위와 변화 Drd1α 식에 대 한 개별 셀에 걸쳐.
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토론
이 프로토콜에 우리가 현장에서 교 잡 신선한 냉동 두뇌 분할 영역 핵 accumbens (NAc)에 Drd1α 수용 체 식과 티로신 hydroxylase (TH) 식 substantia nigra (SNR) 지역에서 평가 하의 소설 기법을 설명 합니다. 우리는 또한 다른 얼룩 패턴에 대 한 데이터 분석의 방법 제공: "개별 점" 또는 "클러스터".
교 잡 시험 현장에서 성공적인 멀티플렉스 형광 RNA에 대 한 중요 한 단계가 포함 되어 있습니다. 일단 목이 쥐 그리고 두뇌 제거 액체 질소 5 분 이내에 뇌 동결 4 %paraformaldehyde 고정까지-20 ° C에서 뇌 섹션을 유지. 전처리 4의 외피의 30 분 후 슬라이드 15 분 이상 1 x PBS에 체류 하지 해야 합니다. 뇌를 섹션 증폭 단계 사이 밖으로 건조 하지 마십시오. Confocal 영상 보여주는 명확한 얼룩 신호 조직 샘플에서 높은 품질의 이미지를 제공 하는 매우 도움이 됩니.......
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공개 사항
선언 하는 관심의 없습니다 충돌을 확인 하 고 있습니다.
감사의 글
현재 작품은 HD043680, MH106392, DA013137, 및 NS100624 건강 (NIH)의 국가 학회에 의해 지원 되었다. 부분 기금 NIH T32 훈련 그랜트 생물 행동 과학에 의해 제공 되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| HybEZ 오븐 시스템 | 고급 세포 진단 | 310010 | |
| RNAscope 프로브 - Rn-Drd1a | 고급 세포 진단 | 317031 | 색상 채널 1, 녹색 |
| RNAscope 프로브 - Rn-Th-C2 | 고급 세포 진단 | 314651-C2 | 컬러 채널 2, 오렌지 |
| RNAscope 형광 멀티플렉스 시약 키트 | 고급 세포 진단 | 320850 | |
| ImmEdge 소수성 장벽 펜 | 벡터 연구소 | H-4000 | |
| SuperFrost Plus 슬라이드 | Fisher Scientific | 12-550-154% | |
| 4% 파라포름알데히드 | Sigma-Aldrich | 158127-500G | |
| Sevoflurane | Merritt 수의학 공급 | 347075 | |
| Tissue-Tek 수직 24 슬라이드 랙 | Fisher Scientific | NC9837976 | |
| Tissue-Tek 염색 접시 | Fisher Scientific | NC0731403 | |
| 정밀 범용 수조 | ThermoFisher Scientific | TSGP28 | |
| 전처리 4 | 고급 세포 진단 | 320850 | 키트의 부품 |
| ProLong Gold 안티-페이드 시약 | Life Technologies | P36930 | |
| Amp 1-FL | Advanced Cell Diagnostics | 320850 | 키트 |
| 부품 Amp 2-FL | Advanced Cell Diagnostics | 320850 | 키트 부품 |
| Amp 3-FL | Advanced Cell Diagnostics | 320850 | 키트 부품 |
| Amp 4-FL-Alt | A 고급 셀 진단 | 320850 | 키트의 부품 |
| EZ-C1 소프트웨어 패키지 | Nikon Instruments | 버전 3.81b | |
| SAS/STAT 소프트웨어 | SAS Institute, Inc., | 버전 9.4 |
참고문헌
- Goldman-Rakic, P. S., Castner, S. A., Svensson, T. H., Siever, L. J., Williams, G. V. Targeting the dopamine D1 receptor in schizophrenia: insights for cognitive dysfunction. Psychopharmacology (Berl). 174 (1), 3-16 (2004).
- Beaulieu, J. M., Gainetdinov, R. R.
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재인쇄 및 허가
