종양 세포의 Orthotopic intracranial 주사 공부 뇌 종양 생물학, 진행, 진화, 그리고 치료 응답을 암 연구에 사용 되었습니다. 여기 선물이 형광 분자의 단층 촬영 종양 xenografts 실시간 intravital 이미징 및 종양의 정량화 임상 세포종 모델에서 대량 제공.
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방법 논문
Vivo에서 이미징 세포종 Xenografts의 형광 분자 단층 촬영
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
Tumorigenicity는 종양을 형성 하는 암 세포의 기능 대량. 널리 사용 방식은 셀 tumorigenic 확인 암 세포와 immunodeficient 쥐를 피하 주입 되 고 만져 서 후 종양 질량을 측정 하 여. 암 세포의 Orthotopic 주사 가장 밀접 하 게 공부 되 고 종양의 기원의 조직 microenvironment에이 종이 식을 소개 하고자 합니다. 뇌 암 연구의 암 세포는 뇌의 독특한 microenvironment에서 종양 형성과 분석 수 있도록 intracranial 주입을 필요 합니다. Vivo에서 이미징 intracranial xenografts의 즉시 orthotopically engrafted 쥐의 종양 질량을 모니터링합니다. 여기 우리 뇌 종양 xenografts의 형광 분자 단층 (FMT)를 사용 하 여를 보고합니다. 암 세포는 먼저 가까운 적외선 형광 단백질으로 불리고 하 고 immunocompromised 쥐의 뇌에 주입. 동물 다음 시간의 연장된 기간 동안 종양 질량에 대 한 정량적 정보를 검색 합니다. 셀 라벨 미리 각 마우스에서 종양의, 재현성, 비용 효과적이 고 신뢰할 수 있는 정량화 할 수 있습니다. 우리는 이미징 기판, 주입에 대 한 필요성을 제거 하 고 따라서 동물에 스트레스 감소. 이 접근의 제한; 매우 작은 질량을 감지 하는 무 능력에 의해 표시 됩니다. 그러나, 그것은 다른 기술 보다 더 큰 대 중을 위한 더 나은 해결책이 있다. 그것은 약물 치료의 효 험 또는 glioma 셀 라인 및 환자 파생 된 샘플의 유전 변경 평가에 적용할 수 있습니다.
서론
암은 산업화 된 세계에서 인간에서 질병 관련 된 죽음의 주요 원인 중 하나입니다. 매우 높은 사망자와 새로운 처리는 시급히 필요. 세포종 님 (GBM)는 매우 치명적인 뇌 암, 뇌 종양, 실질, 그리고 면역 세포의 이질적인 인구의 구성 유형의 이다. 미국의 중앙 두뇌 종양 레지스트리 따르면 기본 악성 및 비 악성 뇌종양의 발생률 100000 당 대략 22 경우입니다. 약 11, 000의 새로운 사례는 20171미국에서 진단 되는으로 예상 된다.
전 임상 연구는 마약, 절차, 또는 인 간에 있는 테스트 전에 효과적 치료의 가능성을 조사. 전 임상 연구의 초기 실험실 단계 중 하나는 인간의 종이 식 모델로 정의 호스트 유기 체에 이식 하는 암 세포를 사용 하 여 약물 치료에 대 한 잠재적인 분자 표적 식별 됩니다. 이 컨텍스트에서 intracranial 뇌 종양이 종이 식 모델 환자 파생 xenografts (PDXs)를 사용 하 여 널리 사용 된 뇌 종양 생물학, 진행, 진화, 그리고 치료 응답, 연구와 바이오 마커 개발에 대 한 더 많은 최근 마약 검사, 및 맞춤 의학2,,3<....
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프로토콜
실험적인 연구 동물 lentivirus transduce 암 세포를 같은 전염 성 요원의 활용 기관 동물 관리 프로그램 및 기관 biosafety 위원회에 의해 사전 승인을 받아야 합니다. 이 프로토콜은 캘리포니아 대학 샌디에고 (UCSD)의 동물 보호 지침을 따릅니다.
1. FP635 또는 FP720 구문 세포종 세포의 라벨
- 생산 및 Tiscornia 그 외 여러분 에 의해 설명 하는 프로토콜에 따라 lentivirus 정화 12
- DMEM 플러스 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 15 cm 접시; 인간의 glioma 셀 라인에서 문화 약 2.0 x 106 셀 DMEM과 문화 2.0 x 106 인간의 세포종 환자 파생 (GBM-PDX) 분야 또는 F12 B27와 1:1 매체와 인간 재조합 표 피 성장 인자 (EGF, 20 ng/mL) 및 FGF 보완 / (10 ng/mL) T75 플라스 크에.
- 모든 셀에서 37 ° C, 5% CO2, 그리고 100% 상대 습도 유지 합니다.
- 세포 분열
- Glioma 셀:는 상쾌한 접시에서 제거 하 고 g....
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결과
세포종 세포 U87EGFRvIII (U87 셀-EGF 수용 체 변형 III 표현) 1.2 단계에 따라 경작 했다. Lentivirus 생산과 단계 1.1에 따라 정화 했다. 바이러스 농도 p24에 의해 결정 되었다 ELISA 분석. 셀은 lentivirus 단계 1.8에 따르면 적외선 형광 단백질을 운반으로 불리고 있었다. FP72010,11 인코딩 플라스 미드 박사 V.V. Verkhusha에서 제공한 친절 하 게 그리고 FP635 벡터 상업용 공급 업체에서 구입한. 대상 셀 FACS 상위 10% 형광 세포 인구 (그림 1A)에 대 한 풍부 하 게 정렬 했다. 형광 신호를 증가 형광 단층 촬영 시스템의 감도 향상 시킵니다. Orthotopic 이식 전에 붙일 라는 세포의 신호 강도 확인 하기 위해 우리 FMT 영.......
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토론
종양 xenografts 암 연구에 광범위 하 게 사용 되 고 다양 한 잘 설립 된 이미징 기술 개발 되었습니다: 라스; 자기 공명 영상 (MRI); 양전자 방출 단층 촬영 (PET), 계산 된 단층 촬영 (CT); FMT입니다. 각이 방법 마다 장점과 단점을 함께 제공 하지만 궁극적으로 제공 하는 정보의 종류와 서로 보완. 가장 일반적으로 사용 되는 vivo에서 이미징 기술 중 하나입니다 씨5,6,,78. 라스 및 FMT 두 세포 공학 (luciferase 효소 또는 적외선 형광 단백질) 유전자 발현에 영향을 미칠 수 있는 필요 합니다. 씨는 더 작은 종양 질량에 대 한 민감한 하지만 최대 배포 10-12 분;에 신체에 도달 하는 기판 (소)의 복 주입 필요 하지만 가벼운 냉각 및 수.......
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공개 사항
저자 관심 없음 충돌 선언합니다.
감사의 글
우리 닥터 프레드릭 랭, 메릴랜드 앤더슨 암 센터를 GBM PDX neurospheres에 대 한 감사합니다. 이 작품은 패배 GBM 연구 협력, 국가 뇌 종양 학회 (프랭크 나리), R01-NS080939 (프랭크 나리), 제임스 미 맥도 넬 재단 (프랭크 나리);의 자회사에 의해 지원 되었다 호르헤 베 니 테 스는 수상에서에 미국 뇌 종양 협회 (ABTA);에 의해 지원 되었다 Ciro Zanca 미국-이탈리아어 암 재단 박사 후 연구 친교에 의해 부분적으로 지원 되었다. 프랭크 푸 르 나리 암 연구에 대 한 루드비히 연구소에서 추가 지원과 급여를 받습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| DMEM/고혈당 | HyClone/GE | SH30022.1 | |
| DMEM/F12 1:1 | Gibco | 11320-082 | |
| FBS | HyClone/GE | SH30071.03 | |
| Accutase | 혁신적인 세포 기술 | AT-104 | |
| Trypsin | HyClone/GE | SH30236.01 | |
| B27 보충제 | Gibco | 17504044 | |
| 인간 재조합 EGF | Stemcell Technologies | 2633 | |
| 인간 재조합 FGF | Stemcell Technologies | 2634 | |
| DPBS | Corning | 21-031-00 | |
| FACS 튜브 | Falcon | 352235 | |
| DAPI | ThermoFisher Scientific | 62248 | |
| Blasticidin | ThermoFisher Scientific | A1113903 | |
| p24 엘리사 | Clontech | 632200 | |
| Xylazine | Akorn | NDC 59399-110-20 | |
| Ketamine | Zoetis | NADA 043-403 | 규제 물질 |
| 연고 | Dechron | NDC 17033-211-38 | |
| 흡수성 봉합사 | CpMedical | VQ392 | |
| 5 ul 주사기 | Hamilton | 26200-U | 카탈로그 번호 판매 Sigma-Aldrich |
| 세포 분류기 | Sony | SH8007 | |
| 마우스 스테레오택시 프레임 | Stoelting | 51730 | |
| 모터화된 스테레오택시 인젝터 | Stoelting | 53311 | |
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| 마우스 워밍 패드 | Ken Scientific Corporation | TP-22G | |
| 형광 단층 촬영 시스템 | PerkinElmer | FMT 2500 XL | |
| TrueQuant 이미징 소프트웨어 | 퍼킨 엘머 | ||
| Ultra-centrifuge Optima L-80 XP | Beckman Coulter | 392049 | |
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| 조직 배양 150mm 접시 | Olympus Plastics | 25-203 | |
| 조직 배양 플라스크 T75 | Corning | 430720U | |
| 50 mL 원뿔형 튜브 | Corning | 430290 | |
| 15 mL 원뿔형 튜브 | Olympus Plastics | 28-101 | |
| 원심분리기 Avanti J-20 | Beckman Coulter | J320XP-IM-5 | |
| 튜브, 폴리프로필렌, Thinwall, 5.0 mL | Beckman Coulter | 326819 | |
| , Thinwall, 폴리프로필렌, 38.5 mL, 25 x 89 mm | Beckman Coulter | 326823 | |
| Athymic 누드 마우스 | Charles River Laboratories | 스트레인 코드 490 (동형접합성) | 기관 동물 관리 프로그램 및 기관 생물안전성 위원회의 사전 승인이 필요합니다. |
참고문헌
- Ostrom, Q. T., et al. CBTRUS Statistical Report: Primary Brain and Other Central Nervous System Tumors Diagnosed in the United States in 2009-2013. Neuro-Oncology. 18 (suppl_5), v1-v75 (2016).
- Pauli, C., et al.
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재인쇄 및 허가
