이 문서에 설명 된 프로토콜 neuromuscular 접속점에 자발적인 기록 마우스 levator auris longus (LAL) 근육 및 신경 갖는 postsynaptic 잠재력 (전류 클램프)과 전류 (전압 클램프)를 사용 합니다. 이 기술 사용 하 여 정상과 질병 조건 하에서 시 냅 시스 전송의 기계 장치에 중요 한 통찰력을 제공할 수 있습니다.
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방법 논문
Levator Auris Longus 포유류 신경 근육 학 전송 전압 클램프 조건에서의 시험을 위한 준비
이 논문에서
요약
초록
이 프로토콜 전류 클램프 및 클램프 전압 조건 하에서 신경 근육 학 교차로에서 기록 시 냅 스 전송 하는 기법을 설명합니다. Levator auris longus (LAL)의 비보 전 준비 때문에 모터 종판에서 합 문 microelectrode에 대 한 신경 근육 접합의 쉽게 시각화를 제공 하는 얇은 근육 사용 됩니다. 이 메서드는 자발적인 미니어처 종판 전위와 전류 (mEPPs 및 mEPCs), 신경 갖는 종판 잠재력 및 전류 (엡 스와 Epc)의 기록 뿐만 아니라 모터 종판 막 속성에 대 한 수 있습니다. 이 방법에서 얻은 결과 quantal 콘텐츠 (QC), 소포 자료 사이트 (n)의 수, 확률의 소포 자료 (p확인해), 시 냅 스 촉진 및 우울증, 근육 막 시간 상수 (τ 포함 m) 및 입력 저항. 인간 질병의 마우스 모델에이 기술 적용 질병 상태에 주요 병 리를 강조 하 고 새로운 치료 전략을 확인할 수 있습니다. 완전히 전압 클램핑 단일 시 냅 스에 의해이 제공 합니다 현재 사용할 수 있는 시 냅 시스 전송의 가장 상세한 분석의 하나.
서론
신경 근육 학 교차로에서 시 냅 스 전송 공부 신경 및 골격 근육 시스템의 동적 관계에 통찰력을 제공 하 고 시 냅 스 생리학을 조사 하기 위한 우수한 모델입니다. Levator auris longus (LAL)은 얇은 근육, 쉽게 시각화에 신경 근육 접합부에 대 한 허용. 이전 보고서는 랄을 사용 하 여 시 냅 스 약물과 독 소를 검사 하 고 랄1,2의 골격 근육 섬유 유형 특성을 특징 하 편의 설명 했습니다. 수많은 연구는 신경 근육 학 생리학3,,45,6,7,8을 검사 하는 랄을 사용 했습니다. 전기 생리학, 랄 신경 근육 접합을 쉽게 관찰 하는 능력 모터 종판에 microelectrodes의 정확한 배치에 대 한 수 및 시 냅 스 전송 기록에 공간 클램프 문제를 크게 감소 시킨다. 전류 클램프 녹음 근육 막 속성 막....
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프로토콜
동물 관리 및 사용 위원회의 라이트 주립 대학 모든 동물 절차 수행 했다.
1. 마우스 안락사
- 증기 두건에서 마비 챔버는 밀폐 유리에 마우스를 놓습니다.
- 마우스 isoflurane (포화, 또는 25%)의 치명적인 복용량을 흡입을 통해 노출 합니다. 아니 호흡 관찰 될 수 있다 때까지 챔버에 마우스를 둡니다.
- 상공에서 마우스를 제거 하 고 안락사의 보조 방법으로 자 궁 경부 전위를 수행.
2. 머리 머리, 목, 및 뒤의 등 쪽 표면에서의 제거
- 마우스의 앞면과 뒷면의 머리, 목, 등 쪽 표면에 머리의 대부분을 제거 하는 전기 면도기를 사용 합니다. 또한, 주위와 왼쪽된 귀에 머리를 제거 합니다.
참고: 귀 주위 피부를 면도 때 조심, 피부 면도기의 칼 날에 잡힐 수 기본 근육 조직을 손상 될 수 있습니다. - 제 모 크림 면봉으로 나머지를 제거 하는 면도 영역에 적용 됩니다. 약 1 분을 기다려 고 짜기 세척 병을 사용 하 여 물으로 제 모 크림을 씻어 다음 멀리 어떤 나머지 크림 이나 면봉을 사용 하 여 머리 그리고 피부 건조 두 드려.
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결과
그림 8 12 주 된 야생 타입 R6/2 마우스에서에서 현재 펄스 (그림 8A)와 전류 클램프 아래 한 LAL 섬유에서 전압 응답 (그림 8B)의 예가 나와 있습니다. MEPPs의이 레코드 모터 종판에서 찍은 나타냅니다. 레코드는 정상적인 생리 염 분 해결책에서 얻은 했다. 이러한 전류 클램프 레코드 R에 그리고 τm 그 섬유16,,1920의 결정을 분석할 수 있습니다.
EPC와 전압 클램프 조건에서 .......
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토론
여기에 설명 된 준비 및 신경 근육 학 전송 전류 또는 전압 클램프 조건 하에서 측정에 대 한 마우스 랄 근육의 사용 이다. 랄 개 해 부에 대 한 고려해 야 할 몇 가지 중요 한 포인트가 있다. 전극으로 전극 합 문 근육 에이즈에서 초과 결합 조직 청소 때 합 문에 대 한 위치 결합 조직 퍼 가기 수 있습니다. 그러나, 멀리 취할 수 있는 결합 조직 제거 쉽게 근육 손상의 기회를 제한 하기. 그것은 매우 섬세 하기 때문에 신경의 고립 주의 수행 되어야 한다. 신경 손상을 방지 하는 핀 접시에 신경 보호를 둘 수 있다 신경의 끝에 연결 된 주변 조직의 일부를 떠나 도움이 됩니다. 또한, 주의 하지 신경 신경 자극 기를 배치할 때 호감. 마지막으로, 전극은 섬유에 찔 려는 순서는 중요 하다.입니다. 무딘 전극 쉽게 푹 찌 르다 하 고 먼저 찔 려 한다. 날카로운 전극 먼저 찔 려 죽은 되었다, 경우 무딘 전극 수 근육 섬유 아래로 밀어 전에 가능 하 게 일으키는 섬유에서와 서 날카로운 전극 막 pierces. 이것은 섬유 날카로운.......
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
우리 감사 닥터 마크 M. 부자와 다니엘 미 란다 편집 의견, 아마 드 Khedraki이 기술, 그리고 라이트 주립 대학 재정 지원 (A.A.V. 시작 기금)에 대 한 설정 도움.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 올림푸스 복합 현미경 | 올림푸스 | BX51WI | |
| 10x 대물 | 올림푸스 | UMPLFLN10XW | |
| 40x 대물 | 렌즈 올림푸스 | LUMPLFLN40XW | |
| 붕규산 유리 | 셔터 기기 | BF150-86-7.5 | |
| CCD 카메라 | 산타 바바라 기기 그룹 | ST-7XMEI | |
| Mater-9 펄스 발전기 | AMPI | ||
| Iso-flex stimulus Isolator | AMPI | ||
| pCLAMP 10 데이터 수집 및 분석 소프트웨어 | 분자 장치 | 1-2500-0180 | |
| 동심원 양극 | 전극 FHC | CBDSH75 | |
| 볼 조인트 매니퓰레이터 | Narishige | ||
| 비금속 주사기 34 게이지 | 세계 정밀 기기 | MF34G-5 | |
| 니콘 실체 현미경 | 니콘 | SMZ800N | |
| No. 5 집게 | 정밀 과학 도구 | ||
| 스프링 가위 | 미세 과학 도구 | 15006-09 | |
| No. 2 집게 | Roboz | RS-5Q41 | |
| 미세 해부 가위 | Roboz | RS-5912SC | |
| Sylgard 184, 실리콘 엘라스토머 키트 | , 다우 코닝 | 2404019862 | |
| 제모 크림 | Nair | ||
| Grass, SD9 자극기 | , 잔디, 의료 | ||
| 모델, P-1000, 마이크로 피펫 풀러 | 셔터 악기 | P-1000 | |
| Axon Digidata 1550, 저소음 데이터 Acuisition 시스템 | 분자 장치 | ||
| 저역 통과 Bessell 필터 | Warner Instrument Corp. | LPF-8 | |
| 왼손잡이 Micromanipulator | Siskiyou Corp. | MX1641/45DL | |
| 오른손잡이 Micromanipulator | Siskiyou Corp. | MX1641/45DR | |
| 단일 모션 컨트롤러 | Siskiyou Corp. | MC100e | |
| 크로스 롤러 마이크로 매니퓰레이터 | Siskiyou Corp. | MX1641R | 이것은 z축을 전동화할 수 있도록 왼손잡이 및 오른손잡이 마이크로 매니퓰레이터의 Z축에 추가되었습니다. 이 맞춤형 설정은 4축 전동 마이크로 매니퓰레이터를 구입하는 것보다 저렴하고 부피가 적습니다. 또한 하나의 컨트롤러로 두 개의 미세 조작기를 모두 제어할 수 있습니다 |
| BTS | Toronto Research Chemicals | B315190 | |
| CTX | Alomone Labs | C-270 | |
| 이제 Fisher를 통해 주문되었습니다 |
참고문헌
- Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins. Neurosci Lett. 82 (1), 83-88 (1987).
- Erzen, I., Cvetko, E., Obreza, S., Angaut-Petit, D.
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