지 루트 중추 (DRG) 주 문화 자주 생리 기능 또는 감각 신경에서 병리학 관련 이벤트를 공부 하는 데 사용 됩니다. 여기, 허리 DRG 문화 neuropeptide FF 수용 체 선택적 길 항 제와 함께 2 자극 입력 신경 전달 물질의 릴리스를 감지를 사용 하 여를 설명 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
지 루트 신경 절 (DRG) 포함 감각 뉴런의 셀 시체. 신경의이 유형은 의사는 유 니 폴라, 주변 조직, 피부, 근육, 내장 기관 뿐만 아니라 중앙 신경의 척수 등 혼을 자극 하는 두 개의 축 삭과 이다. 감각 뉴런 체세포 센 세이 션, 터치, 고통, 열, 및 고유 감각을 포함 하 여 전송 합니다. 따라서, DRG 기본 문화 nociception의 셀룰러 메커니즘, 감각 신경, 신경 발달의 생리 기능 연구에 널리 사용 됩니다. 교양된 신경 생리학, 신호 변환, 신경 전달 물질 방출, 또는 칼슘 이미징 연구에 적용할 수 있습니다. DRG 기본 문화권, 과학자 들은 단일 생 화 학적 변화를 모니터링 끊된 DRG 뉴런 문화 수 있습니다 또는 vivo에서 실험과 관련 된 많은 한계를 극복 하는 여러 셀. 에 비해 상업적으로 사용 가능한 DRG hybridoma 세포 선 또는 불멸 하 게 DRG 신경 세포 선, 구성 및 1 차 셀의 속성은 감각 신경 조직에 훨씬 더 비슷합니다. 그러나, 하나의 동물에서 격리 될 수 있는 교양된 DRG 1 차 셀의 제한 된 수의 그것은 연구 대상으로 하는 약물에 대 한 높은 처리 화면을 수행 어렵다. 현재 문서에서 DRG 컬렉션 및 문화를 위한 절차를 설명 합니다. 또한, 우리 교양된 DRG 셀 neuropeptide FF 수용 체 타입-2의 주 작동 근 유도 펩타이드 신경 전달 물질 (칼 시 토 닌 유전자 관련 펩 티 드 (CRGP)와 물질 P (SP))의 릴리스 (NPFFR2)의 처리를 보여 줍니다.
서론
감각 뉴런의 셀 시체 DRG 안에 포함 되어 있습니다. 이러한 뉴런 의사 유 니 폴라 그리고 주변 조직 및 중앙 신경 시스템을 자극. 근육, 피부, 내장 기관, 뼈, 다른 조직. 중에서 발견 되는 감각 신경의 말 초 신경 엔딩 그들은 신경 척수 등 쪽 뿔과 신호에서 엔딩 다음 체세포 센 세이 션1,2의 다른 상승 통로 통해 두뇌에 전송 주변 감각 신호를 전송 합니다. 체세포 센 세이 션 (즉, 터치, 고통, 고 열 감각)을 인식 하는 움직임과 공간 방향 (고유 감각)1,3시체가 있습니다. 4가 있다 골격 근육, 피부, 몸의에 응답 하는 그룹 II (Aβ) 섬유의 proprioception 응답 그룹 III (Aδ) (Aα) 섬유 및 그룹 V (C) 고통에 응답 하는 등 기본 구심 축 삭의 서브 그룹 I 고 온도입니다. 나머지는 다른도로 myelinated만 C 섬유 myelinated, 하지 않습니다.
Nociceptors는 기본 감각 신경, 수행 조직 손상에 대 한 잠재적인 유해 자극 (기계적, 열, ....
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프로토콜
실험 동물을 사용 하는 여기에 설명 된 모든 메서드는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 장 공 대학 (13-014 곳)에 의해 승인 되었다.
1. 실험 쥐에서 요 추 DRG 수집
- 요 추 DRG 컬렉션에 대 한 3 주 된 Sprague-Dawley (SD) 쥐에 2를 사용 합니다.
참고: DRG 뉴런 쥐에서 4 주 이상 수집 여기에 설명 된 문화 조건 하에서 잘 성장 하지 않습니다. - 압력솥에 모든 수술 기구를 소독.
- Tiletamine 및 zolazepam (20 mg/kg, 복 주입 (IP))의 1:1 혼합물으로 쥐를 anesthetize 하 고 동물 발가락 꼬 집 음 시험에서는 발 철수 응답 될 때까지 기다립니다.
참고: 다른 마 취 전략이이 프로토콜에 성공적으로 사용할 수 있습니다. - 상업적인 단두대로 잘린 여 쥐를 희생.
- 단두대를 사용 하 여 격리 forelimb와 대 퇴 골 사이 쥐의 몸 트렁크. 수집 지역의 다이어그램 그림 1A 를 참조 하십시오.
참고: 꼬리 커트 라인 대 퇴 골에 그냥 rostral 이어야 한다. 요 추 L6 DRG 컷된 사이트는 척추에서 너무 높....
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결과
24-잘 접시에 배양 쥐 요 추 DRG 뉴런 glial 세포 증식을 억제 하기 위해 추가 아 라-C와 신경 성장을 지원 하기 위해 NGF 문화 매체에서 성장 했다. 생활의 형태 DRG 세포 관찰 되었다. 그림 3에서 같이, 단일 뉴런의 세포 체 하루 1 접시의 바닥에 연결 되었고 관찰에 대 한 선택. 축 삭 성장 하루 1-3에서에서 모니터링 했다. Glial 세포 복제 하 고 프로세스를 둘러싸고 감각 뉴런의 세포 체를 확장. 다른 문화에서 CGRP 단백질은 신경 세포의 형태를 공개 하 스테인드. 그림 4, CGRP 단백질 얼룩 세포질 및 감각 신경 세포의 축 삭에 표시 됩니다. 신경 그리고 glial 세포의 핵 형태학은 DAPI 물 들일 때 가지. 뉴런 glial 세포 보다 더 크고 더 둥근 핵을가지고. 비교 함으로써, 명과의 핵은 더 타원형 모양 (
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토론
현재 문서에서 수집, 효소 분리 및 쥐 요 추의 문화 시연 DRG. NGF는 科 지원, DRG 뉴런의 축 삭 셀 시드 후 3 일 이내 연장. 확장된 축 삭 후 셀 셀 소마에서 합성 되 고 축 삭 섬유 따라 전송 CGRP 단백질에 대 한 스테인드 했다 명확 하 게 관찰 했다. 위성 세포 또한 확장을 일 이내 뉴런을 둘러싸고이 나누어 glial 세포를 허용 처리 합니다. 이 프로토콜에 의해 성장 주 DRG 세포는 감각 신경 조절 세포 메커니즘에 대 한 조사에 적합 합니다. 여기, 우리는 neuropeptides, CGRP와 SP는 선택적 NPFFR2 주 작동 근, dNPA에 의해 경작된 DRG 뉴런에서의 릴리스 자극. NPFFR2는 NPFF에 대 한 동족 수용 체 이며, 고통 감각 및 규정 경로22,23에 참여할 것으로 보고 되었습니다. NPFFR2-의존 CGRP와 SP 출시의 NPFFR2 siRNA의 사용에 의해 더 확인 했습.......
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
우리는 영어 편집 박사 M. Calkins 감사합니다. 이 작품은 장 궁 기념 병원 (CMRPD1F0482), 장 공 대학, 정상 노화 연구 센터 (EMRPD1G0171) 사역의 과학 및 기술 (105-2320-B-182-012-MY2)에 의해 지원 되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| tiletamine과 zolazepam의 혼합물 (Zoletil) | Virbac | Zoletil 50 | 마취제 |
| 소 태아 혈청 | Biological Industries | 04-001-1 | 배양 배지 |
| 피루브 나트륨 | 시그마 | S8636 | 배양 배지 |
| 페니실린 / 스트렙토 마이신 | Biological Industries | 03-033-1 | 배양 배지 |
| DMEM-F12 | Invitrogen | 12400024 | Culture Medium |
| Poly-l-lysine | Sigma | P9011 | 코팅 접시 |
| 콜라겐 분해 효소 IA | Sigma | 9001-12-1 | 효소 소화 |
| Hank's Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-112 | Culture |
| Medium Trypsin EDTA | Biological Industries | 03-051-5 | 효소 소화 |
| 파스퇴르 피펫 | Hilgenberg | 3150102 | Cell trituration |
| Cytarabine (Ara-C) | Sigma | C6645 | Culture Medium |
| NGF | Millipore | NC011 | Culture Medium |
| NPFFR2 siRNA | Dharmacon | L-099691-02-0005 | Transfection |
| Non-targeting siRNA | Dharmacon | L-001810-10-05 | Transfection |
| NeuroPORTER 시약 | Genlantis | , T400150 | , 형질주입, 시약 |
| dNPA, | Genemed Synthesis | N/A, | NPFFR2, 작용제 |
| CGRP, CGRP, ELISA, | Cayman, | 589001 | EIA |
| SP, ELISA, | Cayman | 583751 | EIA, |
| CGRP, 항체 | Calbiochem | PC205L | IHC, DAPI |
| Roche | 10236276001 | IHC |
참고문헌
- Bear, M. F., Connors, B. W., Paradiso, M. A. Neuroscience: exploring the brain. , 3 edn, Lippincott Williams & Wilkins. (2007).
- Hunt, S. P., Mantyh, P. W. The molecular dynamics of pain control. Nat Rev Neurosci. 2 (2), 83-91 (2001).
- Kandel, E. R., Schwartz, J. H., Jessell, T. M.
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재인쇄 및 허가
