방법 논문

내 피 엽 전환 성장 인자-β 신호 변환에 의해 유도 된의 분자 분석

DOI:

10.3791/57577

⸱

2018년 8월 3일

 ,  ,  , 
1David H. Koch Institute for Integrative Cancer Research, Massachusetts Institute of Technology, 2Department of Respiratory Medicine, Graduate School of Medicine, The University of Tokyo, 3Hastings Center for Pulmonary Research, Division of Pulmonary, Critical Care and Sleep Medicine, Department of Medicine, Keck School of Medicine, University of Southern California, 4Department of Molecular Pathology, Graduate School of Medicine, The University of Tokyo

이 논문에서

요약

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내 피 엽 전환 (EndMT)는 EndMT에 관련 된 세포 신호 경로 조사 하는 데 유용의 생체 외에서 유도 대 한 프로토콜을 설명 합니다. 이 실험 모델에서 EndMT MS-1 내 피 세포에서 TGF-β와 치료에 의해 유발 됩니다.

초록

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내 피 세포의 phenotypic가 소성 기초 심장 혈관 시스템 개발, 심장 혈관 질병, 및 기관 섬유 증과 관련 된 다양 한 조건. 이러한 조건에서 차별화 된 내 피 세포는 엽 같은 고기를 획득. 이 프로세스 내 피 엽 전환 (EndMT) 이라고 하 고 내 피 마커의 downregulation, 엽 마커 및 형태학 상 변화의 upregulation에 의해 특징입니다. EndMT 변형 성장 인자 (TGF)를 포함 하 여 여러 신호 통로 의해 유도-β, Wnt, 및 노치, 그리고 gastrulation, 조직 섬유 증에 대 한 비슷한 상피 엽 전환 (응급) 중요 한 분자 기계 장치에 의해 규제 및 암 전이입니다. EndMT의 메커니즘을 이해 하는 것은 EndMT를 대상으로 하는 진단 및 치료 접근을 개발 해야 합니다. 생체 외에서 EndMT의 강력한 유도 일반적인 유전자 식 서명 특성, druggable 분자 메커니즘을 식별 및 변조기 EndMT의 화면을 유용 합니다. 여기, 우리 EndMT의 유도 대 한 생체 외에서 방법을 설명합니다. MS 1 마우스 췌 microvascular 내 피 세포 TGF-β에 장기간된 노출 후 EndMT를 받아야 하 고 upregulation 엽 마커 및 형태학 적 변화 뿐만 아니라 여러 염증 성 발산 및 cytokines의 유도 보여줍니다. 예측에 관한 (미르) 변조 분석을 위한 방법 또한 포함 되어 있습니다. 이 메서드는 기본 EndMT 및 EndMT miRNAs의 기여 하는 메커니즘을 조사 하는 플랫폼을 제공 합니다.

서론

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내 피 엽 전환 (EndMT)는 차별화 된 내 피 세포 다양 한 섬유 아 세포와 같은 mesenchymal 세포1의 결과로 분자 변화를 겪 습 하는 과정입니다. EndMT 처음 심장2,3의 개발 하는 동안 내 피 세포 변환으로 설명 했다. 초기 심장 개발, 심장 관 내부 endocardium 및 외부 심근 구성 됩니다. 이 두 개의 레이어 심장 젤리 라고 하는 세포 외 매트릭스의 계층으로 구분 됩니다. 내 피 세포 마커를 획득, 배아 endocardial 셀 중간 엽 세포로 환승, 기본 심장 젤리, 침략 및 것 밸브 및 심장에 대 한 기초를 제공 하는 심장 쿠션의 형성을 촉진 그리고 semilunar 밸브입니다. 또한, EndMT 관상 동맥 혈관, 복 부 대동맥 및 폐 동맥4,,56을 포함 하 여 다른 배아 혈관 시스템에 pericytes 및 혈관 평활 근 세포의 소스를 되도록 제안 되었습니다. 또한, EndMT7돋 아 생리 신생에 연루 이다.

증거를 축적 하는 것은 EndMT도 여러 심혈 관 질환과 다른 질병1,8에 관련 된 것을 제안 했다. EndMT 관련 된 조건이 포함 혈관 석 회화, 동맥 경화 증, 폐 동맥 고혈압, 동굴 같은 기형, 기관 섬유 증, 정 맥 이식 개장, 이식 부전 신장 이식과 암8, 9,10,11,12,13,14,15,,1617, 18. 최근 보고서 설명 여러 분자 EndMT 마커 신장 이식17에서 신장 이식 부전의 진단 및 예 후 예측에 대 한 도구가 될 수 있습니다. EndMT 관련 세포 신호 통로의 변조 표시 되었습니다 심장 섬유 증을 포함 하 여 몇몇 질병 상태를 개량 하 고8,15모델 동물에 정 맥 이식 개장. 따라서, 메커니즘을 이해 기본 EndMT는 EndMT를 대상으로 하는 진단 및 치료 전략을 개발 해야 합니다.

EndMT-셀 접합, 철새 가능성, VE cadherin 같은 내 피 관련 유전자의 downregulation α-부드러운 근육 걸 (α-SMA)를 포함 한 엽 유전자의 upregulation의 손실에 의해 특징입니다. 또한, EndMT 및 상피 엽 전환 (응급), 중간 엽 세포, 상피 세포를 변환 하는 비슷한 과정 변경 된 생산의 발전에 기여할 수 있습니다 다양 한 세포 외 매트릭스 구성 요소와 연결 된 조직의 섬유 증8,19의.

최근, 여러 생체 외에서 연구 EndMT의 EndMT15,20의 분자 메커니즘의 세부 사항을 해명 했습니다. EndMT 변형 성장 인자 (TGF) 등 다양 한 신호 통로 의해 유도-β, Wnt,1단계 고. 그 중 TGF-β 응급 및 EndMT의 유도에서 중추적인 역할을 재생합니다. EndMT에 짧은 노출 부족21나타납니다 동안 노출 EndMT 다양 한 내 피 세포에서 TGF-β에 연장 한다. 우리는 여기 EndMT 유도, 어떤 마일 스벤 1 (MS-1)에서 마우스 췌 microvascular 내 피 세포 받 다 생체 외에서 EndMT TGF-β20에 장기간된 노출 후에 대 한 간단한 프로토콜을 설명 합니다. 이 모델에서 여러 다운스트림 분석 형태 변경, 내 피 마커의 downregulation 엽 마커 및 염증 성 유전자, cytoskeletal의 upregulation 포함 하 여 EndMT의 특징 기능 조사를 수행할 수 있습니다. 재배열, 및 콜라겐 수축 젤.

MicroRNAs (miRNAs)는 22 ~ nt 다양 한 mRNA 대상22,23posttranscriptional 억압을 직접 작은 규제 RNAs. 씨앗 시퀀스 중재 대상 인식, 통해 miRNAs 대상 유전자의 수백을 억제 하 고 세포 분화, 확산, 운동 성 등 다양 한 세포 기능을 조절. 이 구급 대 및 EndMT, 규제에 대 한 경우 이며 또한 몇몇 miRNAs 응급 및 EndMT,2425의 레 귤 레이 터로 보고 되었습니다. 이 검토에서 제시 하는 EndMT 모델 EndMT에서 miRNAs의 역할을 테스트 하려면 미르 변조 절차와 쉽게 결합할 수 있습니다. 현재 검토 MS-1 세포에서 TGF-β-유도 EndMT를 조사 하기 위해 우리의 실험 절차를 요약 하 고 또한 다른 내 피 세포에서 TGF-β에 의해 EndMT 유도의 조건의 비교를 포함 한다.

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프로토콜

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1입니다. EndMT의 유도

  1. 표준 문화 조건에 MS-1 세포를 유지 하 고 confluency을 피하기 위해. MS-1 셀의 소스 테이블의 자료에 설명 되어 있습니다. MS-1 셀에 10% 태아 종 아리 혈 청 (FCS), 50 U/mL 페니실린, 및 50 μ g/mL 스 최소 필수 매체-α (MEM-α)를 사용 합니다.
  2. 10 cm에 씻어 MS-1 셀 버퍼링 하는 인산 염 (PBS) x 1 접시 하 고 접시에 trypsin의 1.0 mL를 추가 합니다. 37 ° c.에 5 분 동안 품 어
  3. 문화 미디어의 9 mL를 사용 하 여 셀을 분리 합니다. 15 mL 튜브에 세포 현 탁 액을 수집 합니다.
  4. 실 온에서 5 분 동안 300-400 x g 에 세포 현 탁 액 원심
  5. 조심 스럽게는 상쾌한을 제거 하 고 미리 데워 진된 문화 미디어에 셀 펠 릿을 중단.
  6. Trypan 블루 솔루션 및 표준 hemocytometer 또는 자동 셀 카운터를 사용 하 여 가능한 셀을 계산 합니다.
  7. 긴 기간 문화에 대 한 c m2 당 103 셀 x 0.5에서 코팅된 표준 문화 접시에 접시 MS-1 셀. 예를 들어 당 6에서 잘 플레이트 5.0 x 103 셀 잘 격판덮개 문화. FCS의 동일한 농도 포함 하 여 동일한 문화 매체를 사용 합니다. MS-1 셀, TGF-β FCS의 사용으로 장기 문화 (적어도 48-72 h)에 EndMT을 유도합니다.
  8. 24 시간 후 TGF-β2 (1 ng/mL의 최종 농도)와 내 피 세포를 자극.
  9. (5% CO2, 37 ° C) 습도 인큐베이터에 문화 세포. 때 형태학 변화에 초점을 맞추고 세포를 매일 모니터링 합니다.
  10. 장기적인 문화에서 TGF-β와 치료의 48 h 후 TGF-β2를 포함 하는 신선한 미리 데워 진된 문화 미디어에 미디어를 바꿉니다.
  11. 다운스트림 분석을 진행 합니다. 일반적으로, 말라 개편 후 치료, 24 h 관찰 하 고 내 피 마커의 downregulation 및 엽 마커의 upregulation TGF-β와 치료의 48-72 시간 후 관찰 된다.

2. Immunocytochemical 분석

  1. MS-1 셀 표준 문화 조건에 유지 합니다.
  2. 플레이트 MS-1 셀 4에 잘 잘 (1.7 cm2) 당 103 셀 x 1.0에서 문화 챔버 슬라이드 세포. 슬라이드는 미리 젤라틴 코팅. 잘 당 문화 미디어의 사용 0.5-1.0 mL.
  3. 24 시간 후 TGF-β2 (1 ng/mL의 최종 농도)와 내 피 세포를 자극. 분석할 때 EndMT에 바위의 참여, TGF-β 치료 록 억제제 Y-27632 (10 μ M) 1 시간 전에 추가 합니다. TGF-β 신호 억제의 효과 평가할 때는 TGF-β 수용 체 키 니 아 제 억제제를 사용할 수 있습니다.
  4. (5% CO2, 37 ° C) 습도 인큐베이터에 문화 세포. 말라 개편 TGF-β와 치료의 24 h 후 MS-1 셀에서 관찰 됩니다. 다른 변경 후 48-72 h 치료의 명백한 될. 72 h 문화에 대 한 신선한 미디어 TGF-β와 치료의 48 h 후 TGF-β를 포함 미디어를 교체 합니다.
  5. F-말라 얼룩
    1. TGF-β 치료의 24 h 후 미디어를 제거 하 고 실 온에서 20 분에 대 한 1 x PBS에 4 %paraformaldehyde 셀 수정 1 x PBS 가진 세포를 씻어.
    2. 실 온에서 5 분에 대 한 Triton X-100 0.2% 품 어.
    3. 3 번 1 x PBS와 셀 린스.
    4. Phalloidin tetramethylrhodamine B isothiocyanate 버섯 phalloides 희석 150-fold에서 함께 품 어 실 온에서 1 h에 대 한 차단 버퍼.
    5. 3 번 1 x PBS와 셀 린스.
    6. 실 온에서 5 분 동안 cyanine 핵 산 바인딩 염료와 핵 얼룩.
    7. 린스 슬라이드 마운트 coverslips 미디어를 탑재 하는 슬라이드를 사용 하 여 슬라이드에 얼굴.
    8. Confocal 현미경으로 관찰 합니다. 543 nm 레이저와 560-615 nm의 방출 필터를 사용 하 여 phalloidin의 형광의 탐지를 위해. 633 nm 레이저와 650 이상 방출 필터를 사용 하 여 핵 얼룩에 대 한 nm. TGF-β와 치료, 시 두꺼운 스트레스 섬유의 형성 관찰 될 것 이다.
  6. VE cadherin와 α-SMA 얼룩
    1. TGF-β 치료의 72 h 후 미디어를 제거, 감기 50% 메탄올 및 50% 아세톤 셀 수정 (0.5-1.0 mL 잘 당) 5 분.
    2. 3 번 1 x PBS와 셀 린스 (0.5-1.0 mL 잘 당).
    3. 제조업체의 권장된 농도 따라 어둠 속에서 4 ° C에서 하룻밤 블로킹 버퍼에 1 차 항 체로 품 어. 사용 하 여 VE cadherin 단일 클론 항 체 (BV13, 1: 100 희석)와 α-SMA Cy3 활용 된 단일 클론 항 체 (1A4, 1: 200 희석)20.
    4. 3 번 1 x PBS와 셀 린스.
    5. 녹색 염료 활용 된 이차 항 체 제조 업체의 권장된 농도 따라 어둠 속에서 실 온에서 1 h에 대 한 블로킹 버퍼에 VE cadherin 항 체를 가진 세포를 품 어.
    6. 3 번 1 x PBS와 셀 린스.
    7. 실 온에서 5 분 동안 cyanine 핵 산 바인딩 염료와 핵 얼룩.
    8. 린스 슬라이드 마운트 coverslips 미디어를 탑재 하는 슬라이드를 사용 하 여 슬라이드에 얼굴.
    9. Confocal 현미경으로 관찰 합니다. 543 nm 레이저와 560-615 nm의 방출 필터를 사용 하 여 α-SMA (Cy3)의 탐지를 위해. 488 nm 레이저와 505-550 nm의 방출 필터를 사용 하 여 VE cadherin의 검출에 대 한. 일반적으로, TGF-β 치료와 치료, 따라 VE cadherin 신호 감소 하 고 α-SMA 신호에서 증가 관찰 될 것 이다.

3. 3 차원 콜라겐 젤 수축 시험

  1. 콜라겐 젤 수축 시험 전에 72 h에 대 한 MS-1 세포와 함께/없이 TGF-β의 문화를 수행 합니다.
  2. 유형 준비 나 얼음에 콜라겐 젤. 믹스 차가운 콜라겐 솔루션, 집중 10 x 메모리 매체, 0.05 N NaOH, 2.2% NaHCO3및 8: 1에서 200 mM HEPES pH 7.4 포함 된 콜라겐 희석 버퍼: 1의 비율.
  3. 혼합 제어 또는 내 피 성장 세포 TGF-β-취급 정지 (106 셀/200 μ x 1.0) 200 mL와 콜라겐 젤 솔루션의 800 μ. TGF-β에 대 한 치료 샘플 추가 TGF-β2 (1 ng/mL)는 세포 현 탁 액을.
  4. 12 잘 문화 접시의 각 음에 혼합물의 1.0 mL를 추가 하 고 30-60 분 동안 37 ° C에서 인큐베이터에서 공고히 하 허용.
  5. 젤라틴, 후 1.0 mL MEM-α의 10 %FCS, 50 U/mL 페니실린, 및 50 μ g/mL 스 젤을 오버레이. TGF-β에 대 한 치료 샘플 추가 TGF-β2 (1 ng/mL)는 미디어.
    참고: TGF-β 처리 샘플에 대 한 젤 및 문화 미디어 TGF-β를 추가 합니다.
  6. 48 h에 대 한 37 ° C에서 부동 젤 품 어.
  7. 스캐너를 사용 하 여 접시의 아래쪽에서 젤의 이미지 스캔 합니다. 또는 젤은 젤 위에 고정 된 거리에서 디지털 카메라를 사용 하 여 이미지를 기록 합니다.
  8. ImageJ를 사용 하 여 픽셀 수에 따라 젤 표면적 계량. 자유형 선택 또는 관련된 선택 도구를 사용 하 여 젤을 선택 하거나 선택 하는 젤을 사용 하 여 "이미지 | 조정 | 색상 임계값"도구를, 그리고 다음의 젤을 사용 하 여 영역을 결정" 분석 | 측정"명령입니다.

4. 잠겨 핵 산 기반 미르 억제제 여 miRNA 활동의 억제

  1. MS-1 셀 표준 문화 조건에 유지 합니다.
  2. Transfect 잠겨 핵 산 (LNA) 미르 억제제, 합성 미르 duplexes 또는 siRNAs (20 또는 50 nM) 제조 업체의 지시에 따라 lipofection 시 약을 사용 하 여. 세부 사항 및 LNA 미르 억제제, 합성 미르 duplexes와 siRNAs의 소스 우리의 이전 보고서26,27에 설명 했다. MS-1 셀, 제조업체의 지시에 따라 표준 transfection 절차 LNA 미르 억제제, 합성 미르 duplexes 또는 siRNAs의 도입을 위해 잘 작동.
  3. 16-48 h 후 TGF-β2 (1 ng/mL의 최종 농도)와 내 피 세포를 자극.
  4. RNA 식 분석 (양적 RT-PCR 및 RNA 시퀀싱 (RNA-seq) 분석), immunocytochemical 분석 및 기자 시험을 포함 하 여 다양 한 다운스트림 분석을 진행 합니다. 다운스트림 분석 우리의 이전 보고서20,,2627에 설명 되어 있다.

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결과

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TGF-β는 다양 한 내 피 세포에서 EndMT의 강력한 유도. 24 시간 치료 후 MS-1 세포에서 TGF-β로, F 걸 대 한 얼룩 말라 스트레스 섬유 (그림 1A)20의 개편을 보여 줍니다. Y-27632 바위 억제제와 전처리 말라 개편20의 유도 억제. MS-1 내 피 세포 클래식 조약돌 모양의 형태에서 TGF-β 치료 (그림 1B)에 따라 엽 스핀 들 모양의 형태를 변경합니다. TGF-β-치료 세포 세포 세포 접촉을 잃게됩니다. 치료 후 TGF-β와 48-72 시간, immunocytochemical 분석 VE cadherin 감소 표현과 α-SMA (그림 1C)의 증가 식 보여 줍니다. TGF-β는 크게 후 치료 (<...

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토론

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그것은 24 h에 대 한 활성화 된 Ras 및 TGF-β 치료에 MS-1 셀, EndMT 유도 TGF-β 혼자21이 짧은 기간 EndMT를 유도 하는 데 실패 하는 동안 보고 되었습니다. 지속적으로, 우리는 TGF-β 실질적으로 유도 EndMT 더 이상 치료 (48-72 h) 후 MS-1 셀20에 관찰. 인간의 배꼽 등 다양 한 내 피 세포에서 TGF-β (2-6 일)와 장기 치료 정 맥 내 피 세포 (HUVEC), 인간의 피부 microvascular 내 피 세포 (HCMEC), 인간 관상 동맥 내 피 세포 (후 EndMT 반복적으로 관찰 되었다 HCEC), 마우스 폐 내 피 세포 (MLEC), 쥐 뇌 내 피 세포 (BEC), 소 대동맥 내 피 세포 (BAEC), 불멸 하 게 소 망막 microvascular 내 피 세포 (iBREC), 그리고 양 대동맥 밸브 내 피 세포8,

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공개 사항

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저자는 공개 없다.

감사의 글

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우리 지 시 Borok와 고헤이 Miyazono 원고 준비에 대 한 감사. 당사와 수소 우에하라 기념 재단 연구 친교에 의해 지원 되 고 당사 해외 유학에 대 한 수정 Hayaishi 기념 장학금에 의해 지원 됩니다. 이 작품은 다케다 과학 재단 (A.S.)에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
MS-1 세포미국식 배양 컬렉션CRL-2279
MEM-alphaThermo Fisher Scientific32571036
TGF-beta2R& D302-B2-002
4 웰 Lab-Tek II 챔버 슬라이드Thermo Fisher Scientific154526
Y-27632 Sigma-AldrichY0503
Blocking Onenacalai tesque03953-95
phalloidin-tetramethylrhodamine B isothiocyanateSigma-AldrichP1951
TOTO-3 요오드화물Thermo Fisher ScientificT3604
VE cadherin monoclonal 항체 (BV13)Thermo Fisher Scientific14-1441-82
alpha-SMA Cy3 monoclonal 항체 (1A4)Sigma-AldrichC6198
Alexa Fluor 488 goat anti-mouse IgG (H+L)Thermo Fisher ScientificA-11001
커버 슬립Thermo Fisher Scientific174934
콜라겐 용액Nitta gelatin Inc.Cellmatrix I-P
콜라겐 희석 완충액닛타 젤라틴 Inc.Cellmatrix I-P
LNA miRNA 억제제EXIQON miRCURY LNAmicroRNA 전력 억제제 (음성 대조군 B 및 타겟 miRNA)
합성 miRNA 듀플렉Qiagen miScript miRNA 모방
리포펙타민 RNAiMAXThermo Fisher Scientific13778030
리포펙타민 2000Thermo Fisher Scientific11668027
스

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sanchez-Duffhues, G., Garcia de Vinuesa, A., Ten Dijke, P. Endothelial-to-mesenchymal transition in cardiovascular diseases: Developmental signaling pathways gone awry. Developmental Dynamics. , (2017).
  2. Markwald, R. R., Fitzharris, T. P., Smith, W. N. Structural analysis of endocardial cytodifferentiation. Developmental Biology. 42 (1), 160-180 (1975).
  3. Eisenberg, L. M., Markwald, R. R. Molecular regulation of atrioventricular valvuloseptal morphogenesis. Circulation Research. 77 (1), 1-6 (1995).
  4. Chen, Q., et al. Endothelial cells are progenitors of cardiac pericytes and vascular smooth muscle cells. Nature Communications. 7, 12422(2016).
  5. DeRuiter, M. C., et al. Embryonic endothelial cells transdifferentiate into mesenchymal cells expressing smooth muscle actins in vivo and in vitro. Circulation Research. 80 (4), 444-451 (1997).
  6. Arciniegas, E., Neves, C. Y., Carrillo, L. M., Zambrano, E. A., Ramirez, R. Endothelial-mesenchymal transition occurs during embryonic pulmonary artery development. Endothelium. 12 (4), 193-200 (2005).
  7. Welch-Reardon, K. M., Wu, N., Hughes, C. C. A role for partial endothelial-mesenchymal transitions in angiogenesis. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 35 (2), 303-308 (2015).
  8. Zeisberg, E. M., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition contributes to cardiac fibrosis. Nature Medicine. 13 (8), 952-961 (2007).
  9. Chen, P. Y., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition drives atherosclerosis progression. Journal of Clinical Investigation. 125 (12), 4514-4528 (2015).
  10. Bostrom, K. I., Yao, J., Guihard, P. J., Blazquez-Medela, A. M., Yao, Y. Endothelial-mesenchymal transition in atherosclerotic lesion calcification. Atherosclerosis. , 124-127 (2016).
  11. Qiao, L., et al. Endothelial fate mapping in mice with pulmonary hypertension. Circulation. 129 (6), 692-703 (2014).
  12. Ranchoux, B., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition in pulmonary hypertension. Circulation. 131 (11), 1006-1018 (2015).
  13. Maddaluno, L., et al. EndMT contributes to the onset and progression of cerebral cavernous malformations. Nature. 498 (7455), 492-496 (2013).
  14. Krenning, G., Zeisberg, E. M., Kalluri, R. The origin of fibroblasts and mechanism of cardiac fibrosis. Journal of Cell Physiology. 225 (3), 631-637 (2010).
  15. Cooley, B. C., et al. TGF-beta signaling mediates endothelial-to-mesenchymal transition (EndMT) during vein graft remodeling. Science Translational Medicine. 6 (227), 227ra234(2014).
  16. Wang, Z., et al. Transforming Growth Factor-beta1 Induces Endothelial-to-Mesenchymal Transition via Akt Signaling Pathway in Renal Transplant Recipients with Chronic Allograft Dysfunction. Annals of Transplantation. 21, 775-783 (2016).
  17. Xu-Dubois, Y. C., et al. Markers of Endothelial-to-Mesenchymal Transition: Evidence for Antibody-Endothelium Interaction during Antibody-Mediated Rejection in Kidney Recipients. Journal of the American Society of Nephrology. 27 (1), 324-332 (2016).
  18. Zeisberg, E. M., Potenta, S., Xie, L., Zeisberg, M., Kalluri, R. Discovery of endothelial to mesenchymal transition as a source for carcinoma-associated fibroblasts. Cancer Research. 67 (21), 10123-10128 (2007).
  19. Pardali, E., Sanchez-Duffhues, G., Gomez-Puerto, M. C., Ten Dijke, P. TGF-beta-Induced Endothelial-Mesenchymal Transition in Fibrotic Diseases. International Journal of Molecular Sciences. 18 (10), (2017).
  20. Mihira, H., et al. TGF-beta-induced mesenchymal transition of MS-1 endothelial cells requires Smad-dependent cooperative activation of Rho signals and MRTF-A. Journal of Biochemistry. 151 (2), 145-156 (2012).
  21. Hashimoto, N., et al. Endothelial-mesenchymal transition in bleomycin-induced pulmonary fibrosis. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 43 (2), 161-172 (2010).
  22. Suzuki, H. I., Miyazono, K. Dynamics of microRNA biogenesis: crosstalk between p53 network and microRNA processing pathway. Journal of Molecular Medicine (Berl). 88 (11), 1085-1094 (2010).
  23. Suzuki, H. I., Miyazono, K. Emerging complexity of microRNA generation cascades. Journal of Biochemistry. 149 (1), 15-25 (2011).
  24. Nicoloso, M. S., Spizzo, R., Shimizu, M., Rossi, S., Calin, G. A. MicroRNAs--the micro steering wheel of tumour metastases. Nature Reviews Cancer. 9 (4), 293-302 (2009).
  25. Lagendijk, A. K., Goumans, M. J., Burkhard, S. B., Bakkers, J. MicroRNA-23 restricts cardiac valve formation by inhibiting Has2 and extracellular hyaluronic acid production. Circulation Research. 109 (6), 649-657 (2011).
  26. Katsura, A., et al. MicroRNA-31 is a positive modulator of endothelial-mesenchymal transition and associated secretory phenotype induced by TGF-beta. Genes Cells. 21 (1), 99-116 (2016).
  27. Suzuki, H. I., et al. Regulation of TGF-beta-mediated endothelial-mesenchymal transition by microRNA-27. Journal of Biochemistry. 161 (5), 417-420 (2017).
  28. Camenisch, T. D., et al. Temporal and distinct TGFbeta ligand requirements during mouse and avian endocardial cushion morphogenesis. Developmental Biology. 248 (1), 170-181 (2002).
  29. Krenning, G., Moonen, J. R., van Luyn, M. J., Harmsen, M. C. Vascular smooth muscle cells for use in vascular tissue engineering obtained by endothelial-to-mesenchymal transdifferentiation (EnMT) on collagen matrices. Biomaterials. 29 (27), 3703-3711 (2008).
  30. Medici, D., Potenta, S., Kalluri, R. Transforming growth factor-beta2 promotes Snail-mediated endothelial-mesenchymal transition through convergence of Smad-dependent and Smad-independent signalling. Biochemical Journal. 437 (3), 515-520 (2011).
  31. Krizbai, I. A., et al. Endothelial-mesenchymal transition of brain endothelial cells: possible role during metastatic extravasation. PLoS One. 10 (3), e0119655(2015).
  32. Arciniegas, E., Sutton, A. B., Allen, T. D., Schor, A. M. Transforming growth factor beta 1 promotes the differentiation of endothelial cells into smooth muscle-like cells in vitro. Journal of Cell Science. 103 (Pt 2), 521-529 (1992).
  33. Deissler, H., Deissler, H., Lang, G. K., Lang, G. E. TGFbeta induces transdifferentiation of iBREC to alphaSMA-expressing cells. International Journal of Molecular Medicine. 18 (4), 577-582 (2006).
  34. Paranya, G., et al. Aortic valve endothelial cells undergo transforming growth factor-beta-mediated and non-transforming growth factor-beta-mediated transdifferentiation in vitro. American Journal of Pathology. 159 (4), 1335-1343 (2001).
  35. Maleszewska, M., et al. IL-1beta and TGFbeta2 synergistically induce endothelial to mesenchymal transition in an NFkappaB-dependent manner. Immunobiology. 218 (4), 443-454 (2013).
  36. Ubil, E., et al. Mesenchymal-endothelial transition contributes to cardiac neovascularization. Nature. 514 (7524), 585-590 (2014).
  37. Xu, X., et al. Epigenetic balance of aberrant Rasal1 promoter methylation and hydroxymethylation regulates cardiac fibrosis. Cardiovasc Research. 105 (3), 279-291 (2015).
  38. Xiao, L., et al. Tumor Endothelial Cells with Distinct Patterns of TGFbeta-Driven Endothelial-to-Mesenchymal Transition. Cancer Research. 75 (7), 1244-1254 (2015).

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