Murine 원심 인공 인간의 전환 colitis, 지저분한 스트림에서 제외 콜론 세그먼트에서 주로 림프 colitis 위한 murine 모델을 제공 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
양 대 장 염 (DC)는 환자에서 발생 하는 diverting enterostomy의 결과로 지저분한 스트림에서 제외 장 세그먼트와 자주 임상 조건입니다. 이 질병의 병 인 병이 정의 남지만 크 론 병과 궤 양성 대 장 염 같은 클래식 선 동적인 장 질병의 차이가 나타납니다. 이 질병의 개발을 선도 pathophysiological 메커니즘을 해독 하기 위한 연구는 적절 한 murine 모델의 부족에 의해 심각 하 게 방해 되었습니다. 이 프로토콜은 면역 체계의 역할 및 DC의 개발에 미생물와의 상호 작용의 연구를 용이 하 게 하는 DC의 murine 모델을 생성 합니다. C57BL/6 동물을 사용 하 여이 모델에 콜론의 원심 부분 원심 인공 항문을 만들어, 약한 염증 제외 장 세그먼트에 보통의 개발 트리거링 및 인간의 전형적인 병 변 재현으로 지저분한 stream에서 제외 됩니다. 적당 한 조직의 염증 반응으로 Dc입니다. 쥐 모델 달리 많은 유전자 변형 murine 모델 C57BL/6 배경에 사용할 수 있습니다. 우리의 모델이 동물의 조합 수 있습니다 개별 cytokines, 발산, 또는 생리 활성 분자 (예를 들어, 인터 루 킨 (IL)-17;의 수용 체의 잠재적인 역할을 IL-10, chemokine CXCL13, CXCR5 및 CCR7, chemokine 수용 체 그리고 sphingosine 1 인산 염 수용 체 4) DC의 병 인에 평가. C57BL/6 백그라운드에 congenic 쥐 긴장의 가용성은 크게 다른 종류의 세포는 병 인에 관련 된 DC의 역할을 설정 하는 전송 실험 용이. 마지막으로, 모델 및 비 영향을 영향을 받는 장 세그먼트에서 점 막 면역에 지역 개입 (예를 들어, 로컬 미생물 또는 로컬 염증 치료의 수정)의 영향을 평가 하기 위해 기회를 제공 하 고는에 조직의 면역 항상성입니다.
서론
최근 몇 년 동안, 고아 한 선 동적인 장 질병 (IBDs; 다른 비 감염 성 대 장 염 엔터티의 상당수 즉., Crohn의 질병 또는 colitis ulcerosa)는 임상 및 histopathologically 특징 되었습니다 인간에서. 이러한 colitis 형태의 개발을 선도 병 태 생리 기계 장치는 완전히 이해 되지 부분적으로 적절 한 동물 모델은 부족 때문에. 양 대 장 염이 최근 설명된 엔터티 중 하나입니다. 기간 Glotzer1에 의해 1980 년에 화폐로 주조 되었다, 비록 비슷한 표현 형의 초기 설명 Morson2에 의해 1972 년에 주어졌다. 질병 개발 50%에 enterostomy, 우회 환자의 91%에 그리고 그것의 임상 강도 다릅니다3,4. 아메리카 합중국에서에서 약 120000 인공 환자의 연간 발생률을 감안할 때,이 질병 엔터티는 중요 한 건강 문제를 구성 합니다.
이 프로토콜을 개발의 전반적인 목표는 인간 DC에서 본 비슷한 colitis 트리거에 의존 하 고 하는 인간 질병의 기본 histopathologi....
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프로토콜
여기에 설명 된 모든 방법 수의 정부 기관 (Landesamt에 Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit 및 Fischerei 메클렌부르크-포어 폼 머 른, (LALLF M-V))에 의해 승인 되었습니다가지고.
1. 수술 전 치료와 동물의 준비
- 동물 시설에 도착, 비슷한 크기의 그룹으로 동물 (C57Bl/6)를 분할 하 고 각 그룹을 함께, 케이지 그룹 실험 내내 일정 하 게 유지.
참고: 같은 섹스의 동물을 사용 합니다. 설명 결과 남성 쥐와 함께 얻은 했다.
참고: 남성 동물 사용 되는 경우, 케이지 그룹 함께 시작 하는 때 그들은 나이의 7 주 계층 구조를 설정할 수 있도록, 따라서 위험을 최소화 공격적인 행동의 실험 중. - 적어도 1 주일 전에 수술, 높은 에너지로 전환 (> 14 MJ/kg) 및 고 단백 (> 20%) 모든 필수 미 량 원소와 비타민을 포함 하는 피드 (자세한 자료의 목록 참조).
참고: 수술을 수행할 때 모든 마우스 무게 이상 25 g을 확신 합니다. - 케 타 민 (i.p. 87 mg/kg) 및 xylazine 염 산 염 (i.p. 13 mg/kg)의 복 주사로 마 취 및 진통 유발. 마우스는 기계적 자극, 예를 들면 발가락 피치, 모터 응답 없이 허용 될 때....
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결과
수술은 모두 실험 (인공), 가짜 (colotomy) 그룹에 잘 용납입니다. 수술 및 수술 관리 올바르게 수행 하는 경우 수술 사망률 10%를 넘지 말아야 한다. 첫 수술 후 주에 상당한 체중 감소 실험와 가짜 그룹에서 볼 수 있다. 가짜 그룹의 동물 달성 4 번째 수술 후 날 향해 일반적으로 그들의 체중 최하 하지만 실험 그룹의 뒷부분에 나오는 1 일 발생. 체중 감량은 초기 체중의 21.7%에 도달 하는 실험적인 그룹에 더 발음 됩니다. 반면, 가짜 동물 그들의 초기 몸 무게 (그림 2)6의 10.8%를 잃게됩니다. 수술 후 첫 주에 체중 nadir 후 몸 무게 두 실험 그룹에서 하지만 실험적인 그룹에서 느린 경사로 지속적으로 상승. (즉, 피 묻은 방전 또는 어느 실험도 가짜 그룹6에서 발생 하는 액체 배변) 심.......
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토론
이 프로토콜에 안정적으로 제공 하는 DC의 murine 모델 (예를 들어, 드 노 보 개발 염증이 대 장 세그먼트, 단축, 토 굴 및 절감 submucosa 림프 낭의 인간 DC의 histopathological 기능을 재현 잔 셀 번호)입니다. 이 이점 이외에도이 모델 매우 비슷한 트리거링 요인에 의해 유발 고 가장 영향을 받는 인간의 경우 가벼운 심각도에 온건한의 임상 과정을 선물 한다.
재현할 결과 및 허용 수술 치, microsurgical 기술에서 연습이 필요 하다. 그러나, 인공 및 가짜 작업 (colotomy) 매우 낮은 수술 mortalities 수행할 수 있습니다 (< 10%). 일부 작업 단계는 매우 중요: 1) 긍정적으로 확인 결 장 그리고 맨끝 회장. 경우 어디 명확 하지 ileocecal 지역의 해부학, Peyer의 패치의 존재에 의해 형성된 된 대변의 존재와 터미널 회장으로 콜론을 확인할 수 있습니다. 2) 때 인공 루프,.......
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공개 사항
모든 저자 들은 아무 경쟁 관심사를 선언 합니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 작동 재료 | |||
| 열 밑받침, 6 와트 | ThermoLux, Witte + Sutor GmbH | 461265 | |
| 에탄올 70% (메틸에틸케톤 포함) | Greifswald | ||
| 나무 애플리케이터, 작은 면 머리 단면, 나무 막대기, 길이 150mm | Centramed GmbH, 독일 | 8308370 | 작업 필드 소독용 |
| 가위 | Aesculap (BRAUN) | BC064R | |
| 외상성 DeBakey 집게 | Aesculap (BRAUN) | OC021R | |
| 바늘 홀더 | Aesculap (BRAUN) | BM012R | |
| Vasofix Safety i.v. 캐뉼라 22G | Braun Melsungen AG, 독일 | 4268091S-01 | |
| VICRYL Plus 4-0 바이올렛 브레이드; V-5 17m 1/2c; 70cm | 에티콘, Inc. | ||
| PDS II 6-0 모노필; V-18 13mm 3/8C; 70cm | 에티콘, Inc. | Z991H | |
| BD Plastipak 1 mL (멸균 내부가있는 바늘이 달린 주사기) | BD Medical | 305501 | |
| Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin) | ANTISEPTICA, Germany | 18824-01 | 초음파 욕조에서 수술 기구 소독 |
| 약물 | |||
| ketamine 10%, 100 mg/mL (ketamine hydrochloride) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 9089.01.00 | 87 mg/kg i.p. |
| Xylasel, 20 mg/mL (xylazine hydrochloride) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 400300.00.00 | 13 mg/kg i.p. |
| NaCl 0.9% | Braun Melsungen AG, Germany | 6697366.00.00 | |
| Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine) | Bayer, Germany | PZN: 01498870 | 0.1 mg/kg s.c. |
| Tramal Drops, 100 mg/mL (트라마돌 염산염) | Grü nenthal GmbH, 독일 | 10116838 | 1 mg/mL 식수 |
| Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone) | Cephasaar GmbH, 독일 | PZN: 08844252 | 체중 25mg/kg i.p. |
| metronidazole 5 mg/mL | Braun Melsungen AG, Germany | PZN: 체중 05543515 | 12.5mg/kg 체중 i.p. |
| >Food | |||
| ssniff M-Z Ereich | ssniff, 독일 | V1184-3 | |
| 고체 음료 Dehyprev Vit BIO, 파우치 | TripleATrading, 네덜란드 | SDSHPV-75 | |
| 장비 | |||
| Nikon Eclipse Ci-L | Nikon Instruments Europe BV, 독일 | 광학 현미경 | |
| VetScan HM 5 | Abaxis, 미국 | 770-9000 | 50 µ의 수의학 혈액학 분석기; l 정맥 EDTA - 혈액 |
| Bandelin SONOREX (초음파 욕조) | Bandelin electronics, Germany | RK 100 H | 수술기구 소독 |
| Software< / em> | |||
| NIS Element BR4 소프트웨어 | Nikon Instruments Europe BV, Germany | ||
| GraphPad Prism Version 6 | GraphPad Software, Inc. |
참고문헌
- Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream. Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).
- Morson, B., Dawson, I. Gastrointestinal Pathology. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).
- Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F.
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재인쇄 및 허가
