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방법 논문

마우스 감염 모델에서 뇌 막 염에 구 이렇게 뵙 Biofilms의 조사 역할에 대 한 감염 intracranial Subarachnoidal 경로

6.6K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/57658

⸱

2018년 7월 1일

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, 2Key Lab of Animal Bacteriology, Ministry of Agriculture, 3OIE Reference Lab for Swine Streptococcosis, 4School of Medicine, Tsinghua University, 5Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses

이 논문에서

요약

여기, 우리 구 이렇게 뵙 수 막 염에 biofilms의 역할을 공부 하는 쥐에 감염 intracranial subarachnoidal 경로 설명 합니다. 이 감염 모델은 또한 다른 세균성 수 막 염의 병 인 세균성 수 막 염에 대 한 새로운 약물의 효능을 연구 하 고 적합 합니다.

초록

구 이렇게 뵙 는 전세계 돼지의 주요 세균성 병원 체 뿐만 아니라 신흥 동물 매개 대리인입니다. 인간과 돼지, 뇌 막 염에서는 S. 이렇게 뵙 감염의 주요 징후입니다. 적당 한 감염 모델 병원 균으로 인 한 질병의 메커니즘을 이해 하는 필수적인 도구입니다. 마우스 감염의 여러 노선 S. 이렇게 뵙 감염의 병 인 연구 개발 되었습니다. 그러나, 감염의 복, intranasal, 그리고 정 맥 노선 공부 biofilms에서 기질 등 뇌에 직접 뇌 막 염에 S. 이렇게 뵙 표면 구성 요소의 역할에 대 한 적합 하지 않습니다. Intracisternal 접종 S. 이렇게 뵙 감염에 대 한 사용 되었습니다, 하지만 정밀 사출 사이트 설명 하지 하고있다. 여기, 감염 intracranial subarachnoidal 경로 S. 이렇게 뵙 수 막 염에 biofilms의 역할을 조사 하기 위해 마우스 모델에서 설명 했다. S. 이렇게 뵙 planktonic 셀 또는 biofilm 상태 셀 직접 3.5 m m는 bregma에서 rostral 위치한 사출 사이트를 통해 쥐의 거미 막 밑 공간에 주입 했다. Histopathological 분석 및 증가 mRNA TLR2의 표현과 biofilm 상태 셀을 주사 하는 생쥐에서 뇌 조직의 cytokines 명확 하 게 표시 S. 이렇게 뵙 biofilm S. 이렇게 뵙 수 막 염에 확실 한 역할을 합니다. 이 감염 경로 감염, 호스트-박테리아 상호 작용의 연구를 수의 다른 경로 통한 확실 한 장점이 있습니다. 그것은 평가, 뇌에 직접 호스트 면역 반응에 세균성 구성의 효과 허용 하는 또한, 그리고 중앙 신경 조직에 세균 입구를 모방. 감염의이 경로 다른 박테리아에 의해 발생 하는 뇌 막 염의 메커니즘을 조사에 대 한 확장할 수 있습니다. 또한, 그것은 또한 세균성 수 막 염에 대 한 약물의 효능을 테스트를 사용할 수 있습니다.

서론

이렇게 뵙 구 (S. 이렇게 뵙)은 수 막 염, 폐 렴, septicaemia, 심장 내 막 염, 관절염1등 심각한 질병을 일으키는 돼지, 전세계의 주요 세균성 병원 체 이다. 그것은 또한 새로운 동물 매개 대리인입니다. 지금까지, 그것은 9 serotypes 인간, 2, 4, 5, 9, 14, 16, 21, 24, 그리고 31 serotypes2,,34를 포함 하 여 감염을 일으킬 수 보고 되었습니다. 인간과 돼지, 뇌 막 염에서는 S. 이렇게 뵙 감염의 주요 임상 증상 중 하나입니다. 베트남, 태국, S. 이렇게 뵙 는 어른5에 수 막 염의 주요 원인입니다. 미생물 biofilms는 미생물을 서로 게 고착 하 고 집중 인터페이스; 그들은 세균 독성, 다양 한 환경에 항생제 저항5생존에 필수적입니다. Biofilms는 일반적으로 일반적으로 포함 하는 다 당 류, 단백질과 DNA6세포 외 매트릭스 둘러싸여 있습니다. 후자는 호스트 염증 성 반응과 cytokine 생산7유도 수 있습니다. Biofilm 형성은 이전 연구에서 연쇄 구 균 수 막 염에서 포함 되기 위하여 알려졌다. Biofilms는 연쇄 상 구 균 agalactiae 염 tilapia 물고기 모델에 기여할 biofilm 형성 뇌 조직 내에서 공개 되었습니다 하 고 meningeal 주위 vivo에서 내부 복 부 접종8표면. 수 막 염, 중 연쇄 상 구 균 균 biofilm 같은 상태 이며 이러한 biofilm 상태에 박테리아 했다 마우스 감염 모델9에 수 막 염 유도에 더 효과적. 또한 우리의 이전 연구, 생존 분석10여 세균 독성에 기여 하는 S. 이렇게 뵙 마우스 뇌에서와 관련 된 biofilm 상태. 그러나, S. 이렇게 뵙 수 막 염에서 biofilm 참여에 대 한 직접 증거 조사 더 필요합니다.

S. 이렇게 뵙 감염의 동물 모델에서 마우스 복 (i.p.)11, intranasal (i.n.)12, 정 맥 (i.v.)13및 감염14, intracisternal (i.c.) 경로 사용 하 여 개발 되어 15 , 그러나 16., 감염의 i.p., i.n., 및 i.v. 노선 표면 구성 요소 S. 이렇게 뵙 는 뇌에 직접 뇌 막 염의 역할을 공부 하 고 적합 하지 않습니다. Biofilms에서 세포 외 기질 포함 됩니다. I.c. 접종 S. 이렇게 뵙 감염을 위해 사용 되었다, 비록 정확한 주사 부 하지 그 논문에서 설명 하고있다. 반면, stereotaxic 좌표 intracranial subarachnoidal 접종에 대 한 사출 사이트의 명확 하 게 이전 연구17에서 설명 하고있다. 이 접종 점과 더 단순한 실험 프로토콜의 쉽게 인식 허용. 또한, 감염 intracranial subarachnoidal 경로 sinuses 또는 중간 귀17, 그리고 중간 귀 및 S. 이렇게 뵙 로 인 한 수 막 염의 관계에서 중앙 신경 조직에 세균 입구를 모방 매드 슨 외18에 의해 증명 되었습니다. 또한, 마우스에서 감염 intracranial subarachnoidal 경로 적용 하 여 우리 시연 S. 이렇게 뵙 작은 RNA rss04 우리의 이전 연구10에 수 막 염에 기여 한다.

현재에서 연구, 감염 intracranial subarachnoidal 경로 S. 이렇게 뵙 수 막 염에 biofilms의 역할을 조사 하기 위해 쥐에 사용 되었다. 마우스 감염의이 경로 의해 planktonic 셀 또는 biofilm 상태 셀 S. 이렇게 뵙 의 감염 되었다. Histopathological 분석 및 TLR2 biofilm 상태 세포를 주입 하는 쥐의 뇌 조직에서 cytokines의 증가 mRNA 표현 명확 하 게 표시 S. 이렇게 뵙 biofilm 수 막 염에 기여.

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프로토콜

마우스 감염 실험 했다는 실험실 동물 모니터링 위원회의 장쑤 성, 중국에 의해 승인 및 실험 동물 센터의 난징 농업 대학교에서 수행 (허가 번호: SYXK (Su) 2017-0007).

1입니다. 박테리아의 준비

참고: S. 이렇게 뵙 serotype 2 악성 긴장 P1/7 수 막 염19병에 걸린 돼지 로부터 격리 했다. 스트레인 P1/7 토 드-휴이 트 국물에서 성장 했다 (THB, THB의 리터 당 수식: 심장 주입, 3.1 g, neopeptone, 20.0 g, 포도 당, 2.0 g, 염화 나트륨, 2.0 g; disodium 인산 염, 0.4 g, 나트륨 탄산염, 2.5 g)와 한 천 토 드-휴이 트 (THA, 리터 당 수식에 도금 그쪽으로: 심장 주입, 3.1 g; neopeptone, 20.0 g; 포도 당, 2.0 g; 염화 나트륨 2.0 g; disodium 인산 염, 0.4 g; 탄산 나트륨 2.5 g; 한 천, 15.0 g) 37 ° C, 5% CO2.

  1. 컬렉션의 스트레인 P1/7 planktonic 셀
    1. 중간 로그 단계 문화에서 planktonic 셀의 5 mL을 수집 (OD600= 0.6), 8000 × g에서 3 분 동안 원심 및 다음 PBS로 3 회 세척.
    2. 셀 5 튜브, aliquot THB에서 25% 글리세롤의 5 mL을 resuspend 하 고-80 ° c.에 저장
  2. 컬렉션의 스트레인 P1/7 biofilm 상태 셀
    1. 20 mL의 숙박 문화를가지고 고 신선한 THB;의 180 mL에 추가 10 라운드 배양 배지로 희석된 문화를 동등 하 게, 분한 다음 24 h에 대 한 5% CO2 에서 37 ° C에서 인큐베이터에 접시를 넣어.
    2. 부 화, 후 접시 resuspend은 접시를 준수 하지 박테리아를 부드럽게 흔들어 고 다음는 상쾌한 포부에 의해 무시.
      참고: 접시를 부드럽게 흔들어 하 고 resuspending는 앙금을 피하십시오.
    3. Biofilm 상태 셀을 수확, 퇴적 물을 완전히, resuspend 다음 새로운 튜브에 샘플을 전송 하는 PBS의 5 mL를 추가 합니다.
    4. 다음 매개 변수는 마지막 단계에서 biofilm 상태 셀 sonicate: 60 W, 4 사이클 5 s 오프 및 10 s.
    5. 8000 × g에서 3 분 centrifuge 고-80 ° c.에 상쾌한 저장
      참고:는 상쾌한 biofilm 구성 요소를 포함할 수 있습니다 그리고 동물 실험 (3 단계)에 설명 된 대로 감염 전에 biofilm 박테리아 resuspend를 사용할 수 있습니다.
    6. THB에 10 mL 25% 글리세롤과 앙금을 resuspend 하 고-80 ° c.에 biofilm 상태 셀을 저장

2. 스캐닝 전자 현미경 (SEM) 분석

  1. 수집 된 biofilm 상태 셀과 planktonic 셀 4 ° c.에 12-24 h에 대 한 4 %paraformaldehyde 사용 하 여 수정
  2. 증류수와 신속 하 게 샘플을 헹 구 고 탈수 순차적으로 30 분 각 솔루션에 대 한 에탄올 (25%, 50%, 70%, 90%, 및 100%)의 증가 농도와 샘플.
  3. 더블 양면 테이프와 홀더를 금속 금과 팔라듐으로 증발 기에서 마지막으로 코트 그들 말린된 샘플을 준수 합니다.
  4. 다음 매개 변수를 사용 하 여 스캐닝 전자 현미경에 의해 샘플을 관찰: EHT (여분 고전압) = 10 kV; WD (작동 거리) = 7.0 또는 8.0 m m; 확대 = 5000 ×; A 신호 SE1 =.

3. 동물 실험

  1. SPF 6 주 오래 된을 사용 하 여이 연구에서 여성 BALB/c 마우스. 그 주사 부는 있는 3.5 m m는 bregma에서 rostral 감염의 intracranial subarachnoidal 경로 통해 모든 쥐를 감염. 사출 사이트의 stereotaxic 좌표 Chiavolini 외17에 의해 명확 하 게 설명 했다.
    1. Histopathological 분석, 대 한 감염 쥐 (그룹 당 5 쥐)의 2 개 그룹 planktonic 셀 또는 biofilm를 사용 하 여 상태 세포 3 × 107 콜로 니 형성 단위 (CFU)의 복용량에 그리고 또 다른 5 마우스 컨트롤 PBS를 주입 했다.
    2. TLR2 및 두뇌에서 cytokines의 mRNA 표현의 검색 감염 쥐 (그룹 당 6 쥐)의 두 개의 추가 그룹에 대 한 3 × 107 CFU의 복용량에 상태 세포 planktonic 셀 또는 biofilm를 사용 하 여.
    3. 그쪽으로에 직렬 희석을 도금 하 여 실행 가능한 박테리아의 수를 결정 합니다.
    4. 추가 연구에 대 한 감염 된 후 12 h에서 모든 마우스 안락사
      참고: 재고 매체에 글리세롤 감염 하기 전에 제거 되어야 합니다. Planktonic 전지와 biofilm 상태 셀-80 ° C에서 복구 PBS로 3 회를 씻어 있습니다. Planktonic 세포는 PBS를 가진 resuspended 그리고 감염;에 대 한 적절 한 복용량을 희석 biofilm 상태 셀 (1.2.5 단계)에서 저장 된 상쾌한와 함께 resuspended 고 감염에 대 한 적절 한 복용량을 희석. 감염에 대 한 볼륨 50 µ L 해서는 안됩니다.
  2. 뇌 조직에서 TLR2 및 cytokines의 mRNA 표현 검색
    1. 뇌 조직의 RNA 추출 키트를 사용 하 여에서 총 RNA를 추출 합니다.
      1. 각 마우스에 대 한 전체 뇌 조직의 RNA를 추출 하기 위한 사용 합니다. 전체 뇌 조직을 5 튜브 나눕니다. 100mg 뇌 조직에 차지 하 고 키트에 의해 제공 lysing 매트릭스를 포함 하는 각 관에 세포 솔루션의 1 mL를 추가 합니다.
      2. 40 대 한 균질 화기에 튜브를 처리 6.0, 그리고 원심 분리기 튜브 12000 × g와 4 ° C에서 5 분에 대 한 설정에서 s.
      3. 원심, 후 위 단계는 새로운 microcentrifuge 튜브 전송.
      4. 실내 온도;에 5 분에 대 한 전송된 샘플을 품 어 클로 프롬, 10에 대 한 소용돌이의 300 µ L 추가 s, 다음 실 온에서 5 분 동안 품 어 고.
      5. 12000 ×에서 튜브 원심 g 및 4 ° C 5 분에 대 한 새로운 튜브에 위 단계를 전송.
      6. 5 시간 동안 그것을 반전 하기 전에 튜브를 감기 절대 에탄올의 500 µ L을 추가 하 고 적어도 1 시간 동안-20 ° C에서 샘플을 저장.
      7. 12000 ×에서 튜브 원심 g와 15 분 및 제거는 상쾌한 4 ° C. RNase 무료 H2o. 찬 75% 에탄올 500 µ L와 펠 릿을 세척
      8. 제거는 에탄올, 공기 건조 실 온, RNase 무료 H2o.의 100 µ L에서 resuspend RNA에서 5 분 동안 펠 릿
      9. 실 온에서 5 분 동안 RNA를 품 어 고 RNA bioanalyzer를 사용 하 여 RNA 농도 결정 합니다.
    2. CDNA 합성을 한 thermocycler 반전 녹음 방송 (RT) 시 약 키트와 함께 사용 하 여 게놈 DNA (gDNA)의 제거를 포함 하 여 수행 합니다.
      1. RNA의 1 µ g는 튜브 포함 2 µ L 5 x gDNA 제거 버퍼의, 1 µ L gDNA 제거 효소, RNase 무료 H2O의 때까지 추가 볼륨 도달 10 µ L. Incubate 42 ° c.에서 2 분
      2. 믹스 마스터의 10 µ L을 추가 (RT 효소의 1 µ L 믹스 나, RT 뇌관 믹스의 1 µ L, 버퍼 2, x 5의 4 µ L 및 RNase 무료 H2O 4 µ L) 마지막에서 반응 솔루션 단계 및 다음 부드럽게 섞는다. RT 반응으로 즉시 진행: 37 ° C 15 분 그리고 85 ° C 5에 대 한 s.
      3. SYBR 실시간 정량 Pcr 키트와 함께 실시간 PCR 기계를 사용 하 여 실시간 정량 PCR (RT-정량) 분석을 수행. 20 µ L의 총 볼륨까지 효소 x 2의 10 µ L, 앞으로 뇌관, 역방향 뇌관의 0.8 µ L, 0.4 µ L를 이용한 참조 염료 II x 50의,의 cDNA 템플릿과 RNase 무료 H2O 2 µ L의 0.8 µ L를 추가 합니다.
      4. 다음 열 매개 변수를 사용 하 여 3 중에서 각 샘플을 실행: 30 94 ° c s 5의 40 주기 다음 95 ° c, s 및 34 s 15의 마지막 단계와 60 ° C에서 95 ° C, 60 ° C에서 1 분에 그리고 15 s 95 ° c.에 실시간 정량 Pcr를 위한 뇌관은 표 1에 나열 됩니다. 하우스키핑 유전자 B2m 및 18s rRNA 내부 제어로 사용 되었다.
    3. 2-ΔΔCt 방법에 따라 상대 겹 변경을 계산 합니다.
  3. 조직학 단면도의 관찰
    1. 24 시간 10% 포 르 말린으로 고정, 후 조직 조각 2-3 m m에서의 적절 한 크기로 고정된 뇌 조직을 재구성 합니다.
    2. 조직 조각을 포함 카세트에 넣고 자동 진공 탈수로 탈수에 대 한 새로운 통 솔루션에 몰두.
    3. 고정된 조직에 밖으로가 고 각 솔루션에서 30 분 (70%, 80%, 95%, 95%, 및 100%) 에탄올의 농도 증가에 순차적으로 탈수.
    4. 15 분 동안 크 실 렌과 샘플을 transparentize 하 고 90 분 동안 60 ° C에 액체 파라핀에 찍어 후 포함 기계를 사용 하 여 포함.
    5. 파라핀 블록 포함 조직 3 µ m 조각으로 잘라, 45 ° C에서 물에 조각 타일 그리고 공기에서 건조.
    6. 60 ° C에서 3 h에 대 한 섹션을 품 어, haematoxylin 및 오신 (그)를 사용 하 여 메서드, 얼룩 그리고 중립 껌 함께 인감.
    7. 광학 현미경으로는 뇌의 histopathological 변화를 관찰 합니다. 4-포인트 그레이 딩 시스템 조직학 변화를 평가 하기 위해 사용 되었다. 짝이 없는 t 테스트를 사용 하 여 통계 분석을 위해.
      혼잡/출혈: 결 석, 점수 0; 초점 혼잡/출혈의 작은 영역 점수 1; 초점 혼잡/출혈의 넓은 지역 또는 초점 혼잡/출혈의 작은 지역의 여러 사이트 점수 2; 3 개 큰 초점 혼잡/출혈 사이트까지 점수 3; 혼잡/출혈 확산, 4 점수.
      괴 사: 결 석, 점수 0; 초점 괴 사 점수 1; 1-10 회 저 성 세포의 발생을 확산, 점수 2; confluent 괴 사의 foci 점수 3; 광범위 한 confluent 괴 사, 4 점수.
      선 동적인 세포 침투: 결 석, 점수 0; 몇 고 초점 침입, 점수 1; 다 초점 침투 또는 집계의 형성으로 침입 점수 2; 3 집계까지 점수 3; 그리고 더 이상의 집계 점수 4.

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결과

SEM 분석 실험 조건에서 biofilm 형성 검사를 수행 했습니다. 그림 1에서 보듯이 planktonic 세포 (그림 1A)와 biofilm 주 세포 (그림 1B) 사이의 biofilm 형성에 상당한 차이가 있다. SEM 분석 biofilm 박테리아 덩어리에 있던 여러 레이어와 그들은 쌌 다 했다 기질, 동안 planktonic 박테리아 훨씬 조밀 하 고 주로 분산 개별적으로 보여주었습니다.

Biofilms, DNA 등의 세포 외 매트릭스의 구성 요소 호스트 염증 성 반응과 사이토카인 생산을 유도 할 수 있습니다. TLR2 cytokines ...

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토론

여기서 설명 하는 감염 intracranial subarachnoidal 경로 감염의 다른 경로 통한 확실 한 장점이 있습니다. 호스트-박테리아 상호 작용 및 중앙 신경 조직에 세균 입구를 모방 하는 뇌에 직접 호스트 면역 응답에 세균성 구성의 효과 연구 조사 수 있습니다. 따라서,이 감염 경로 조사 다른 박테리아에 의해 발생 하는 뇌 막 염의 메커니즘에 대 한 확장할 수 있습니다. 또한, 그것은 또한 세균성 수 막 염에 대 한 약물의 효능을 테스트를 사용할 수 있습니다.

이 모델을 사용 하 여 좋은 결과 얻으려면 다음 중요 한 단계는 명시적. Biofilm 형성 실험 조건 하에서 시험 될 필요가 있다. 현재의 연구에서는 그것은 스캐닝 전자 현미경 분석을 사용 하 여 시험 되었다. 조직 문화 접시 방법 및 튜브 방법21와 같은 다른 방법 또한 biofilm 형성 검사를 사용할 수 있습니다. 감염, 전에 1 일 planktonic 셀과 b...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 작품은 국가 주요 연구 및 개발 프로그램의 중국 [2017YFD0500102];에서 교부 금에 의해 지원 되었다 [31572544]; 중국의 국가 자연과학 기초 수의 Etiological 생물학 [SKLVEB2016KFKT005]; 주 키 연구실 상하이 농업 기술 개발 프로그램, 중국 [G2016060201] 적용.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Todd Hewitt Broth(THB)Becton, Dickinson and CompanyDF0492078정제수 1L에 분말 30g을 용해시킵니다. 121°에 오토클레이브; 15 분 동안.
한천DSBIO16C0050가루 15g을 THB 1L에 녹입니다. 121°에 오토클레이브; 15 분 동안.
Milli-Q Reference Water Purification SystemMerck KGaAZ00QSVCUSDnase/ Rnase
NaCl없이 Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd10019318정제수 1L에 8g NaCl, 0.2g KCl, 1.42g Na2HPO3, 0.27g KH2PO4를 용해합니다. 121°에 오토클레이브; 15 분 동안. KOH를 사용하여 pH를 7.4로 조정합니다.
Na2HPO3Xilong Scientific Co., Ltd9009012-01-09정제수 1L에 8g NaCl, 0.2g KCl, 1.42g Na2HPO3, 0.27g KH2PO4를 용해합니다. 121°에 오토클레이브; 15 분 동안. KOH를 사용하여 pH를 7.4로 조정합니다.
KClXilong Scientific Co., Ltd9009017-01-09정제수 1L에 8g NaCl, 0.2g KCl, 1.42g Na2HPO3, 0.27g KH2PO4를 용해합니다. 121°에 오토클레이브; 15 분 동안. KOH를 사용하여 pH를 7.4로 조정합니다.
KH2PO4Xilong Scientific Co., Ltd9009019-01-09정제수 1L에 8g NaCl, 0.2g KCl, 1.42g Na2HPO3, 0.27g KH2PO4를 용해합니다. 121°에 오토클레이브; 15 분 동안. KOH를 사용하여 pH를 7.4로 조정합니다.
KOHXilong Scientific Co., Ltd9009014-01-09정제수 1L에 8g NaCl, 0.2g KCl, 1.42g Na2HPO3, 0.27g KH2PO4를 용해합니다. 121°에 오토클레이브; 15 분 동안. KOH를 사용하여 pH를 7.4로 조정합니다.
글리세롤Sionpharm 화학 시약 10010618정제수의 동일한 부피로 희석, 121°deg에서 오토클레이브, 15분 동안
4% 파라포름알데히드Sionpharm 화학 시약 Co., Ltd80096675
25% 글루타르알데히드Sionpharm 화학 시약30092436고정을 위해 정제수로 10배 희석.
에탄올Sionpharm 화학 시약 Co., Ltd10009218
클로로포름Sionpharm 화학 시약 Co., Ltd10006818
SpctrophotometreDeNovix Inc.DS-11+
초음파 세포 분쇄기NingBo Scientz Biotechnology Co., LtdJY96-IIN
원심분리기Hitachi Koki Co., LtdCT15RE
냉장고Aucma Co., LtdDW-86L500
주사 전자 현미경ZeissEVO-LS10
FastRNA Pro Green KitMP Biomedicals#6045-050
FastPrep-24 기기MP Biomedicals116005500
PCR용 기기SensoQuest GmbH1124310110
QuantStudio 6 FlexThermo Fisher Scientific4485689
SYBR Premix Ex Taq IITakara Biomedical Technology (Beijing) Co., LtdRR820A
PrimeScript RT 시약 키트(gDNA 지우개포함)Takara Biomedical Technology (Beijing) Co., LtdRR047A
완전 밀폐형 조직 처리기Leica Biosystems Nussloch GmbHASP200S
가열 파라핀 임베딩 모듈Leica Biosystems Nussloch GmbHEG1150H
반자동 로터리 마이크로톰Leica Biosystems Nussloch GmbHRM2245
파라핀 섹션용 수조Leica Biosystems Nussloch GmbHHI1210
Autostainer XLLeica Biosystems Nussloch GmbHST5010
Agilent 2100Agilent TechnologiesG2939A
광학 현미경OlympusBX51

참고문헌

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