인쇄 Glycan 배열: 작은 동물에 반대로 탄수화물 항 체 순환의 레 퍼 토리의 분석에 대 한 민감한 기술

요약

이 작은 동물에 반대로 탄수화물 항 체 순환의 분석에 대 한 인쇄 glycan 배열 (PGA) 기술의 잠재력을 보여줍니다.

초록

주어진된 개인의 반대로 탄수화물 항 체 순환의 레 퍼 토리는 종종 면역 상태와 연결 됩니다. 뿐만 아니라 개별 면역 상태 결정 내부 및 외부 잠재적인 위협 신호를 퇴치에 성공 하지만 순환 안티 glycan 항 체 (및 그들의 혈 청 학적인 수준 변화)의 특정 패턴의 존재도 될 수는 발병과 병 적인 특정 조건의 진행의 중요 한 표식입니다. 여기, 우리는 매우 높은 감도; glycan 목표의 수백을 측정 하는 기회를 제공 하는 인쇄 Glycan 배열 PGA 기반 방법론 설명 샘플은 일반적인 제한 때 작은 동물의 최소 금액을 사용 하 여 (쥐, 쥐, 햄스터 등) 주소 측면 인간의 질병의 모델로 사용 됩니다. 이 방법의 대표적인 예를 들어, 우리는 자연 안티 glycan BALB/c 마우스에 항 체의 레 퍼 토리의 분석에서 얻은 결과 보여줍니다. 우리는 유전으로 동일 하 고 동일한 조건 하에서 유지 되 고에도 불구 하 고 연구에 참여 각 BALB/c 마우스 자연 안티 탄수화물 항 체의 특정 패턴을 개발 보여줍니다. 이 작품을 레 퍼 토리 (특이성) 조사 PGA 기술의 사용과 반대로 탄수화물 항 체, 건강에 어떤 병 적인 상태와 순환의 수준을 확장 하 주장 한다.

서론

항 체는 직접 보완 시스템^4,5 를 활성화 하 여 바이러스^1,2 , 박테리아^2,3, 중화 하 여 병원 균 침입에 대 한 우리의 방어에 중심 역할을 담당 그리고 먹어서⁶의 향상입니다. 또한, 그들은 암 타겟팅 및 악성 세포⁷및 항상성 유지 보수^8,9의 제거에 필수적인 요소입니다.

면역 시스템의 장애 자가 면역 및 염증 성 질환 및 암^{10 11}발생할 수 있습니다. 이러한 병 적인 조건을 이상적으로 효율적인 치료에 대 한 신속한 진단 요구. 자가 면역 질환의 경우 대부분의 경우에는 신경의 혈 청 학적인 존재 면역¹⁰

프로토콜

1. Glycochips 생산

1. Microarray 준비
   1. Glycans (50mm)를 인쇄 및 6에서 버퍼링 된 식 염 수 (PBS, pH 8.5)를 사용 하 여 N-hydroxysuccinimide-derivatized 유리 슬라이드에 복제 300 m m 인산에서 류 (10 µ g/mL) 비-접촉 로봇 arrayer (볼륨 ~ 900 드롭 pL). 각 슬라이드는 6 번 반복 하위 배열 (그림 1A, 색상에서)의 4 다른 블록을 포함 합니다. 모든 단일 하위 배열 컨트롤 (8 행 × 14 열)를 포함 하 여 다른 glycan 112 관광 명소에 의해 형성 된다 (그림 1B).
      참고: Glycan 관련 정보는 보충 표 1에 제공 됩니다. 인쇄 마이크로 칩에 사용 되는 glycan 라이브러리 IBCh 팀;의 장기 합성 노력의 결과 이다 관련된 출판물^29,30,31,32

결과

여기, 우리는 20 BALB/c 마우스의 인구에 있는 자연 안티 glycan 항 체의 레 퍼 토리의 정량화에서 얻은 대표적인 결과의 요약을 제시. 이 연구에 사용 된 glycochips 419 다른 glycan 구조 포함. 대부분 glycans 채널으로 종합 되었다₂CH₂CH₂NH₂ 스페이서 무장 O-배당 체,-CH₂CH₂NH₂ 또는-NHCOCH₂NH₂ 배당 체로 여러 경우에. 모든 glycan 구조 고해상도 특징 이었다 (700-800 mhz) NMR 분광학, 정화 및 HPLC, 테스트 나타내는 그들의 > 95% 순도. 우리는 IgM 결정 동시에 + 마우스 혈 청의 제한으로 인해 안티 glycan 항 체 IgG. PGA에서 우리는 항 체 바인딩 (이 값은 최고 glycans.......

토론

Glycan microarrays 단백질 glycan 상호 작용⁴⁰공부에 대 한 필수적인 도구가 되고있다. 현재 일 PGA BALB/c 마우스 항 체 항 탄수화물의 순환의 레 퍼 토리를 연구 기술을 기반으로 하는 프로토콜을 설명 합니다. PGA 스크린 다 수 알 수 없는 생물학 glycans의 가능성을 제공 합니다, 이후 그것은 매우 편리한 검색 도구^13,15,28. 제안된 된 방법 측정, 동일한 실험 설정 수백 glycan 구조 serological 샘플 (50 µ L)의 감소 금액을 사용 하 여 가능성을 제공 합니다. 이것은 특히 중요 한 작은 동물 (작은 순환 혈액 양), 경우 또는 그것은 여러 번 같은 실험 동물 로부터 혈액을 추출 하는 데 필요한 때 이다.

우리가.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Antibodies
biotinylated goat anti-human Igs	Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA	Ref. #: 31782
비오틴화 염소 anti-mouse IgM + IgG	Thermo Fisher Scientific	Ref. #: 31807
Equipment
Robotic Arrayer sciFLEXARRAYER S5	Scienion AG, Berlin, Germany	http://www.scienion.com/products/sciflexarrayer/
Stain Tray (slide incubation chamber)	Simport, Beloeil, QC, Canada	Ref. #: M920-2
Centrifuge	Eppendorf, Hamburg, Germany	참조 #: 5810 R
Pipettes	Gilson, Middleton, WI, USA	http://www.gilson.com/en/Pipette/
슬라이드 스캐너	PerkinElmer, 미국 매사추세츠주 월섬	ScanArray GX Plus
쉐이킹 인큐베이터	Cole-Parmer, Staffordshire, UK	Ref. #: SI50
Biological samples
BALB/c mice sera	This paper	N/ A
Complex Immunoglobulin Preparation (CIP)	Immuno-Gem, Moscow, Russia	http://www.biomedservice.ru/price/goods/1/17531
<강>화학물질, 시약 및 글리칸
Glycan library	Institute of Bioorganic Chemistry (IBCh), Moscow, Russia	N/ A
소 혈청 알부민 (BSA)	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO,	Ref. #: A9418
에탄올아민	시그마-알드리치	Ref. #: 411000
Tween-20	Merck Chemicals & Life Science S.A., 마드리드, 스페인	Ref. #: 655204
Phospahte buffered Saline (PBS)	VWR International Eurolab S.L, Barcelona, Spain	Ref. #: E404
Sodium azide	Sigma-Aldrich	Ref. #: S2002
Streptavidin Alexa Fluor 555 conjugate	Thermo Fisher Scientific	Ref. #: S21381
Streptavidin Cy5 conjugate	GE Healthcare, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK	Ref. #: PA45001
Materials
N-hydroxysuccinimide-derivatized glass slides H	Schott-Nexterion, 예나, 독일	Ref. #: 1070936
Whatman 여과지	Sigma-Aldrich	Ref. #: WHA10347509
1.5 mL 튜브	Eppendorf	Ref. #: 0030120086
Software and algorithms
ScanArray Express 마이크로어레이 분석 시스템	PerkinElmer	http://www.per kinelmer.com/microarray
Hierarchical Clustering Explorer application	of Maryland, MD, USA	http://www.cs.umd.edu/hcil/hce/

University