호흡기 관련 및 병원-획득 세균성 폐 렴의 murine Oropharyngeal 포부 모델

요약

감염 성 폐 렴은 인간에서 가장 일반적인 감염 중 하나입니다. 적절 한 생체 내에서 모델은 질병 병 인을 이해 하 고 새로운 치료제의 효능을 테스트 중요 합니다. 이 murine oropharyngeal 포부 폐 염 모델 하나 pathogenesis 및 이러한 치명적인 감염에 대 한 새로운 치료를 확인할 수 있습니다.

초록

Murine 감염 모델이 질병 병 인을 이해 하 고 원인 병원 체에 대처 하기 위해 설계 된 새로운 치료제의 효능을 테스트 합니다. 감염 성 폐 렴 환자가 병원에서 제시한 가장 흔한 감염 중 이며 따라서 적절 한 생체 내에서 모델을 보증. 일반적인 폐 렴 모델 사용 대상에서 합병증과 증상, 축 농 증, 위 염, 장 염, 물리적 외상, 또는 microparticle 모방에 어로 졸 스프레이 등을 일으키는 폐 밖에 과도 한 유기 체를 예금 intranasal 접종 바이러스 성, 결핵, 또는 곰 팡이 폐 렴의 전형적인 확산. 이러한 모델 전형적인 지역 사회 또는 의료 획득 세균성 폐 렴의 병 인을 정확 하 게 반영 하지는 않습니다. 반면, oropharyngeal 포부 폐 염의이 murine 모델 의료 획득 폐 렴의 물방울 경로 모방합니다. 박테리아의 50 µ L를 접종 마 취 쥐의 oropharynx에 정지 하면 재귀 포부를 폐 렴. 이 모델을 사용 하나는 폐 렴을 일으키는 병원 체와이 질병에 대처 하기 위해 새로운 치료법의 병 인을 확인할 수 있습니다.

서론

더 낮은 호흡 감염 세계의 치명적인 전염 성 질병 및 개발 도상국¹죽음의 가장 일반적인 원인입니다. 세계적으로, 이러한 감염 3.2 백만 이상 죽음¹에 대 한 계정. 또한, 병원내 폐 렴 의료 인수 감염의 가장 일반적이 고 치명적인 형태 중 이며 가장 항생제 내성 병원 체^2,3에 의해 발생 합니다. 모두 지역 사회 획득 세균성 폐 렴 및 병원내 폐 렴의 수집의 일반적인 경로 폐 포에 oropharyngeal 내용의 포부입니다. 종종 이러한 질병을 연구 하는 데 사용 하는 murine 모델 사용 intranasal 접종⁴, 입금 대상에서 합병증과 축 농 증 및 물리적 외상, 질병과 일치 되지 않은 같은 증상을 일으키는 폐 밖에 박테리아의 많은 모델은 인간의 진행 에뮬레이션 하도록 설계 되었습니다. 다른 모델은 흡입 챔버 및 micromisting 장치, 더 정확 하 게 바이러스, 결핵, 그리고 곰 팡이 pneumonias 모방 하지만 전형적인 세균성 pneumonias 획득의 정상적인 경로 정확 하 게 정리 하지 않습니다 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 관련 된 모든 절차는 연구원의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인을 받아야 한다.

1입니다. 세균성 Inoculum의 준비

1. 세균성 식민지를 격리 합니다.
   1. 행진 (예를 들어, A. baumannii "HUMC1") 적절 한 살 균 한 천 매체 (예를 들어, Tryptic 간장 agar)에 세균성 긴장 되 주의 고립 된 식민지를 생성 하 고.
   2. 적절 한 조건 (예를 들어, 37 ° C에서 하룻밤)에 품 어.
2. 숙박 문화를 성장.
   1. 대표, 메 마른 inoculating 루프와 한 천 배지에서 고립 된 식민지를 선택 하 고 그것을 사용 하 여 적절 한 살 균 국물 매체 (예를 들어, Tryptic 간장 국물) 10 mL를 접종 하.
   2. 적절 한 조건 (예를 들어, 통풍 모자, 50 mL 원뿔 유리병에 하룻밤 200 rpm에서 떨고 37 ° C)에서 고정 단계에 도달 하는 샘플을 수 있습니다.
3. Subculture 성장.
   1. 피 펫을 사용 하 여 신선한 메 마른 ....

결과

프로토콜을 따르고 신중 하 게, 재현 하 고 안정적인 데이터를 쉽게 얻을 수 있습니다. 그것은 중요 한 하나의 사용자 지정된 inoculum 준비 프로토콜 하나 서로 비교 하는 실험에 대 한 엄격 하 게 준수입니다. 그것은 또한 감염 절차 동안 마우스를 제대로 처리 하는 것이 중요입니다. 없는 isoflurane 마 취 실로 쥐를 배치 해야 합니다. 마우스는 미리 채워졌다 isoflurane 챔버에 배치 됩니다 경우 당황 것입니다 그리고 아마도 실험 결과 손상 시킬 수 있는 과잉 스트레스를 발생할 수 있습니다. 컨테이너 뚜껑을 확보, 후 천천히 점진적으로 0%에서 4% (v/v), 그것의 농도 증가 하 여 isoflurane를 소개 급하게 isoflurane 관리 또한 공포에 마우스를 발생할 수 있습니다. 쥐 되 면 무 의식, 2-3% (v/v) isoflurane 농도 감소 하 고 몇 분 추가 대 한 챔버에 남아 있을 수 있도록. 이 시점에서, 쥐가 될 준비가 감염 (.......

토론

확실히, 마우스 미니어처 인간 되지 않습니다. 마우스 모델에서 얻은 결과 맥락에서 고려 하 고 이후 차이⁶두 종 사이의 유사성에 따라 인 간에 게 적용에 대 한 해석 해야 합니다. 그것은 또한 선택으로 적절 한 마우스 긴장 하는 것이 중요 특정 있다; 다른 사람 보다 일부 감염에 더 취약 선택¹⁶의 병원 체 변형 마찬가지 다.

엄격한 고 매우 재현 방법으로 감염을 수행 하기 위해 필수적 이다. Inocula는 하나의 값에 아직 그 값의 90%도 무해 한 쥐에 치명적 될 수 있습니다. 따라서, 그것은 절대적는 inoculum을 준비할 때에 특히 그리고 감염 하는 경우이 프로토콜에 나열 된 모든 조건 정확히 같은 방식으로 재생 된다. 또한, 각 병원 체 질병에 독특한 inoculum 일으킬 것입니다. 따라서, 그것은 각 스트레인의 병원 체와 마우스의 각 변형에 대 한 적절 한 inoculum을 결정.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Agar	BD	214530	TSB와 결합하여 TSA
비즈, 보로실리케이트 유리	Kimble	135003	매번 사용 전에 베이킹 또는 자동클레이빙으로 살균
비커, 250 mL	Pyrex	1003	집중 세균 접종의 정확한 분취 시 사용
원심분리기	Sorvall	ST 40R 4,000	회 가능; 4°에 g;
C Chamber for Anesthesia	Kent Scientific Corporation	VetFlo-0720	최대 5 마리의 쥐
수용 Cryomold, 중간 크기	Sakura Tissue-Tek	4566	일회용 비닐 표본 금형, 15× 15&회; 5mm
치실	Oral-B	37000469537	안정적인 포스트에 묶습니다. 약 6" 테이블 높이
위의 펜치 VWR		82027-440	마우스의 입에서 혀를 부드럽게 빼내는 데 사용됩니다
Omni International	TM125-115	용 Homogenizer	처음 사용하기 전에 고압클레이브를 사용합니다. 샘플 사이를 헹굽니다
마취를 위한 Isoflurane,	Abbott	10015516	대체 약물을 사용할 수 있습니다. 그에 따라 절차를 수정하십시오
iSTAT 카트리지	Abbott	03P79-25	귀하의 필요에 맞게 다양한 카트리지를 사용할 수 있습니다
. 케타민, 100 mg/mL	Western Medical Supply	4165	PBS에서 1:10을 1 mg/mL로 희석하고 1 mg/mL에서 Xylazine과 결합
눈을 위한 연고	Akorn	Tears Renewed	디스펜서 끝으로 눈을 만지지 마십시오
최적의 절단 온도 (O.C.T.)	Compound Fisher Scientific	23-730-571	-80 °에서 폐 샘플을 동결하는 데 사용됩니다. C 병리학 절편 준비
페트리 접시	VWR	25384-302	폴리스티렌, 일회용, 멸균, 100회; 15mm
인산염 완충 식염수(PBS)	Corning	21-031-CM	칼슘 및 마그네슘이 없는 Dulbecco의 PBS
피펫 팁, 200-μ L	VWR	10017-044	사용 전 오토클레이브
Pipetter, 200-μ L	Gilson	Pipetman P200	사용 전 자동 클레이브 및 보정
스프레더, 세균 세포	Bel-Art	F377360006	매번 사용 전에 베이킹 또는 자동클레이빙으로 살균
Stir Bar, 자석, 7.9 mm 직경 × 38.1 mm 길이	VWR	58948-150	분할 중에 집중된 세균 접종을 젓는 데 사용됩니다
Stir Plate, Magnetic	Corning	PC-620D	분취 중 농축된 세균 접종물을 교반하는 데 사용
TSB(Tryptic Soy Broth)	BD	211822	한천과 결합하여 TSA
바이알, 원추형, 멸균, 50mL	Corning	431720	세균성 접종물 준비에 사용
바이알, 원추형, 멸균, 500mL	Corning	431123	냉동 접종물 제조를 위한 접종물을 농축하는 데 사용됨
바이알, 극저온, 2.0mL	코닝	430659	농축 세균 접종 자일라진의 극저온 저장에 사용되며
, 20 mg/mL	Akorn	AnaSed 주입은	PBS에서 1:20을 1 mg/mL로 희석하고 1 mg/mL에서 케타민과 결합합니다

. Lung Tissue 는 .. 하십시오. . .