식물 감염 테스트: 스프레이 식물 병원 체 Magnaporthe Grisea 와 상처-중재 접종

요약

여기, 우리 식물 병원 체와 식물 독성 테스트 프로토콜을 제시 Magnaporthe grisea. 이 보고서 균 분리의 pathotypes의 대규모 검열을 하 고 분자 번 식 하는 동안 식물의 저항 메커니즘을 이해 하기 위한 훌륭한 시작 지점으로 제공.

초록

식물 병원 성 곰 팡이 의해 잠재적인 위협 으로부터 방어 하는 강력한 시스템을가지고 있습니다. 그러나 농업으로 중요 한 식물에 대 한, 현재 조치 같은 병원 체에 대처 하기 위해 너무 보수적인 증명 그리고, 따라서, 충분 하지 효과적인, 그리고 그들은 수 있습니다 잠재적으로 포즈 환경 위험. 따라서, 그것은 매우 내성 germplasm의 식별, 격리 및 저항 유전자의 특성 및 분자 사육을 통해 자연스럽 게 제어 식물 질병을 호스트 저항 요소를 식별 하는 데 필요한 저항 하는 재배 품 정. 이와 관련, 번 식 하 고 식물 저항 유전자를 개발, 신속, 정확 하 고 대규모 접종 메서드를 설정할 필요가 있다. 쌀 버섯 모양 병원 체 Magnaporthe grisea 원인 심각한 질병 증상을 폭발 하 고 손실을 항복. 최근에, M. grisea 식물 곰 팡이 병원 체 상호 작용의 메커니즘을 공부에 대 한 모델 생물으로 떠오르고 있다. 따라서, 우리 보고 M. grisea위해 특정 식물 독성 시험 방법의 개발. 이 메서드는 conidial 현 탁 액을 분무 접종 및 균 사체 큐브 또는 conidial 서 스 펜 션의 방울 부상 접종에 대 한 제공합니다. 분리 된 쌀 잎 부상 접종 방법의 주요 단계는 호스트 침투 저항으로 인 한 간섭 방지 식물 잎에 상처를 만드는 것입니다. 이 M. grisea 격리의 pathotypes의, 정확, 신속 하 고 대규모 심사에 기여 스프레이/부상 프로토콜. 이 통합 하 고 체계적인 식물 감염 방법 식물 병리학에서 문제의 광범위 한 관점을 확보에 대 한 훌륭한 출발점 될 것입니다.

서론

쌀 폭발, M. grisea를 기인한 쌀 품종 전세계^1,2에 대 한 가장 심각한 질병 중 하나입니다. 프로세스는 M. grisea 감염 호스트 식물 conidia 생산 및 표면 부착, conidia 발 아 및 appressorium 형성, 침투 못 감염 hypha 차별화의 형성을 포함 하 고 질병 확산 ³. 이러한 모든 단계는 많은 다른 식물 병원 성 곰 팡이에서 일반적이 고, 실제로, 모든 단일 단계 봉쇄 호스트 식물의 감염을 방지. 때문에 그것의 경제 중요성 및 유전 추적성, M. grisea 식물 곰 팡이 병원 체 상호 작용^1,4의 메커니즘을 공부에 대 한 모델 생물으로 떠오르고 있다. 따라서, 기본 균 pathogenicity 및 심사 및 디자인 소설 후보 대상 유전자의 식별 분자 메커니즘을 명료 하 도움이 될 것입니다 이러한 발달 단계 M. grisea 에 분자 기초 공부 살 균 제⁵.

프로토콜

1. 스프레이 접종 M. grisea Conidia의 서 스 펜 션

1. M.grisea 에 대 한 곰 팡이 문화
   1. 곰 팡이 긴장에 대 한 오트밀 토마토 agar (OTA) 문화 매체를 준비 합니다.
   2. 오트밀의 30-50 g를 무게, 소 주/이온된 수 (ddH₂O)의 800 mL에 이것을 추가 하 고 전기 냄비에 30 분을 위한 혼합물을 비등.
   3. 거 즈 조각을 통해 비 커에 끓인된 오트밀 주스를 필터링 합니다.
   4. 토마토 주스와 한 천 20g 150 mL 비 커에 여과 액을 더하고 ddH₂O 최대 1000 mL.
2. 실험 자료의 준비
   1. 3 d ddH₂O에서에서 벼 (Oryza sativa) 품종 Lijiangxintuan-heigu (LTH)의 약 50 씨앗을 담가 또는 보 리의 약 50 씨앗을 담가 (Hordeum vulgare 이력서 골든 약속) ddH₂오 약 1 d.
   2. 촉촉한 거 즈에 쌀 이나 보 리의 씨앗을 포장 하 고 직경 10 ....

결과

기술에 대 한 전체 워크플로 그림 1에 표시 됩니다. 14 일 된 취약 밥 묘 종에 식물 감염 분석 수행 (O. sativa 이력서 공동-39) 취약 7-하루-오래 된 보 리 잎 또는 (H. vulgare 이력서 골든 약속)^7,,89. 쌀 잎에 감염에 대 한 테스트, M. grisea 야생-타입 변형과 P131 Com1 삭제 돌연변이 스트레인의 conidial 정지 (⁵ 포자/10ml x 1.0) 준비 되었고 그 후 14 일 된 취약의 잎 칼 집에 살포 다음 5 d¹⁰에 대 한 촉촉한 실에 보관 했다 공동 39 묘 P131 주사 공동-39 잎 .......

토론

식물 질병 저항 유전자 곰 팡이 병원 균^1,12를 포함 하 여, 병원 균에 의해 감염 방지에 필수적인 역할을 재생 합니다. 쌀 폭발 병원 체 인구 구조의 특성을 이해 하 고 식물 저항 유전자⁴를 식별 하는 모델로 사용 되었습니다. 따라서, 그것은 질병 저항 유전자를 지속적으로 재배 될 수 있는 질병 저항 식물을 식별 하는 농업 식물의 주요 품종의 avirulence genotypes을 검사 하는 데 필요한. 또한, 필드 병원 체의 avirulence genotypes의 장점을 호스트 종류^12,13의 다른 저항 genotypes의 합리적인 분배 해야. 그러나, 현재 접종 방법 저항 및 병원 체 식별^14,

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
여과지	GE 헬스케어 브랜드(스웨덴)
50-mL 튜브	CORNING(Amercia)	430290
원심분리기	Eppendorf(Amercia)	5804R
배양 접시	Thermofisher(Amercia)	150326
0.5-5 mL 피펫	Eppendorf
100-1000uL 피펫	Eppendorf	4920000083
진공 펌프	Leybold	D25B
해부 바늘	FST	26000-35
인큐베이터	MEMMERT	PYX313
접종 링	Greiner Bio One	731175

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