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방법 논문

Calorespirometry:에 대 한 강력 하 고, 비 침 투 적인 접근 세포 에너지 대사를 조사

7K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/57724

⸱

2018년 5월 31일

 ,  , 
1Department of Biological Sciences, University of Louisville, 2Department of Chemistry, Ball State University

이 논문에서

요약

이 프로토콜 calorespirometry, 방열 및 에너지 대사를 평가 하는 비 침범 성 접근을 제공 하는 호흡의 직접 및 동시 측정에 설명 합니다. 이 기술은 총 세포 에너지 흐름을 모니터링 하 여 호 기성 및 혐 기성 경로 에너지 사용률에의 기여를 평가 하는 데 사용 됩니다.

초록

기본적인 생물 학적 및 생물 의학 연구에 사용 하는 많은 세포 선 둘 다 호 기성 및 혐 기성 호흡의 결합을 통해 에너지 항상성을 유지 합니다. 그러나,는 두 경로 세포 에너지 생산의 풍경에 기여 하는 정도 지속적으로 간과. 변형 된 세포 포도 당 레벨을 자주 포화에 교양 산화 인 산화 기질 수준 인 산화의 증가 의해 보상 된다 ATP 생산에 감소 종속성을 표시 합니다. 대사 균형에 있는이 교대는 미토 콘 드 리아 독 소의 존재에도 불구 하 고 증식 하는 세포 수 있습니다. 변환 된 셀의 변경 된 대사 균형, 무시에 제약 심사 결과 이후는 잘못 해석 될 수 있는 잠재적으로 mitotoxic 효과 수 있습니다 감지 되지 않을 높은 포도 당 존재 교양된 모델 셀 라인을 사용 하 여 농도입니다. 이 프로토콜은 두 개의 강력한 기술, respirometry 및 세포질 ATP 생산을 둘 다 호 기성 및 혐 기성 공헌의 양적 및 비 침 투 적인 평가 대 한 허용 하는 열 량의 페어링 설명 합니다. 호 기성 및 혐 기성 호흡 모니터링 을 통해 주사 될 수 있는 열을 생성 합니다. 한편, 산소 소비 속도 측정 하는 것은 호 기성 호흡의 정도 평가할 수 있습니다. 열 소비, 산소 소비와 동시에 측정은 때 calorespirometric 비율을 확인할 수 있습니다. 실험적으로 얻은 값 상응 이론 oxycaloric에 비해 다음 수 그리고 혐 기성 호흡의 정도 재판 될 수 있다. 따라서, calorespirometry 다양 한 약물 개발, 미생물 성장, 및 normoxic 및 hypoxic 조건 모두에서 기본적인 생체를 포함 하 여 생물학 질문을 분석 하는 독특한 방법을 제공 합니다.

서론

생물 학적 시스템, 물질 대사 도중 열 릴리스 또는 엔 탈피 변화는 일반적으로 중 하나를 직접 모니터링 (통해 직접 열 량) 또는 O2 소비 및 CO2 생산 (respirometry)를 통해 통해 간접적으로. 불행히도,이 기술은 격리에 사용 되는 경우 중요 한 정보 혐 기성 경로 세포질 물질 대사에의 기여 등 손실 됩니다. Calorespirometry 열 분산 및 호흡의 동시 측정에 의존 하는 강력한 기술입니다. 완전히 산소 포유류 세포에 있는 혐 기성 물질 대사를 조사 하 고 호 기성 및 혐 기성 경로 변형된 세포에도 불구 하 고 에너지 항상성의 동시 기여 시연 calorespirometric 작업을 개척 한 완전히 산소 환경1. Calorespirometry 이후 다양 한 생물학 질문에 적용 되었습니다. 몇 가지 예로 동물 너 지론 낮은 산소 수준에서의 연구, bivalves, 지구 생물의 물질 대사 그리고 유기 토양 문제2, 의 미생물 분해의 아가미에 제 초 제와 에스트로겐의 효과 3 , 4 , 5 , 6. 또한, calorespirometry는7세포 동결 전에 계시 어떻게 대사 늘어진 포유류의 cryopreservation 향상. 각 접근, 열 량 및 respirometry는 독립적으로 세포질 organismal 생체의 우리의 지식을 증가. 그러나, calorespirometry를 사용 하 여 응답 될 수 있다 기본적인 생물 학적 질문 상대적으로 미개척 남아 있습니다.

헤스의 법칙 반응의 총 엔 탈피 변화는 초기 및 최종 상태 사이의 통로의 독립을 주장 한다. 예를 들어, 생 화 확 적인 통로 총 엔 탈피 변화 통로 내의 모든 반응의 엔 탈피 변화의 합계입니다. 열 량 둘 다 호 기성 및 혐 기성 경로 감지 하는 무차별 세포 열 생산을 측정 하기 위한 실시간 방식을 제공 합니다. 이것은 에너지가 실험 용액8의 벽을 통해 서를 제외 하 고 시스템에서 교환 되는 재단을 기반으로 합니다. 방열에 변화는 변화는 용액에서 모든 대사 반응에서 발표 하는 엔 탈피와 동일. 따라서, 부정적인 엔 탈피는 시스템에서의 열 손실에 상관 한다. 지난 4 년간 철저 한 연구 놓을 anabolism의 열역학 풍경을 특징 있다. 이것은 꾸준한 상승 검색어 "생물학" 및 "열 량"으로 여는 미국 국립 도서관 의학 (NLM) 건강의 국가 학회 (PubMed)에서 색인 아래 연구 기사에 의해 표시 됩니다. 검색 계시는 1970 년 이전 총 27 간행물 참조 생물학적 주사; 한편, 2016 년 혼자, 546 간행물 기술을 활용.

열 메서드는 열 생산을 결정 하기 위해 설립. 그러나, 더 많은 유연성은 respirometric 값을 확인 하기 위해 부여 됩니다. Respirometric 측정 O2, CO2또는 O2 와 CO2모두 구성할 수 있습니다. 또한, O2 또는 CO2 의 측정 optrodes, 클라크-유형 전극, 가변 다이오드 레이저 흡수 분광학7,,910 등 다양 한 기법에 의해 달성 될 수 있다 11. CO2 생산은 많은 respirometric 연구에 귀중 한 통계, 경작된 한 세포에 대 한 중간 종종 pH 제어12,13bicarbonic 버퍼 시스템을 사용 합니다. 합병증을 피하기 위해 CO2 측정의 중 탄산염 시스템에서 문화에 있는 세포의 calorespirometry에 대 한 다음과 같은 프로토콜 respirometric 매개 변수는 단독으로 O2 를 사용 합니다.

산소 유량을 측정 하 여 동시, 특정 respirometers ( 재료의 표참조)는 미토 콘 드 리아 기능의 상세한 평가 대 한 설계 되었습니다. 기판-uncoupler-억제제-titrations (정장) 프로토콜 잘 설립 하 고 실험 막 잠재적인 또는 반응성 산소 종 (선생님) 형성14를 측정 하도록 설계 되어와 호환 됩니다. 그대로 셀의 calorespirometry에 대 한 제시 프로토콜 카보닐기 시안-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP) 등 F0F1-ATP synthase 억제제 oligomycin 화학 uncouplers의 소개와 호환 됩니다. FCCP의 추가 통해 산소 소비 미토 콘 드 리아 성능15에 잠재적인 치료의 영향을 평가 하기 위해 유용한 ATP 생산에서 결합 수 있습니다. 또한, oligomycin의 추가 누출 호흡의 정도 조명 했다. 따라서, calorespirometry 동안 수행 respirometric 측정 더 미토 콘 드리 아 생리학을 명료 하 게 하도록 설계 된 광범위 한 프로토콜와 호환 됩니다.

방열 및 산소 유량의 동시 측정 calorespirometric (CR) 비율의 계산에 대 한 수 있습니다. 이 비율은 손 튼의 상수 또는 이론적인 oxycaloric,-430-480 kJ mol-1 셀 선 또는 관심의 조직에 따라 하 고 보충된 탄소 기판1, 사이 범위에 비해 다음은 16. 따라서, 더 많은 부정적인 CR 비율 전반적인 신진 대사 활동을 증가 기여 혐 기성 경로에서 보여준다. 예를 들어 작업의 활성 성능 없이 일상적인 근육 조직 호흡에 대 한 CR 비율-468 kJ mol-1 범위 내에 이론적인 oxycaloric 동등한17,18의-448에서 배열 한다. 한편, 높은 포도 당에 있는 매체에서 경작 된 포유류 세포 분해를 수행 하는 향상 된 젖 산 발효를 표시 하 고 상대적으로 낮은 미토 콘 드 리아 참여19. -800 kJ mol-1, 더 많은 부정적인 CR 비율1,7에 의해 표시 된 세포질 물질 대사에 혐 기성 경로의 높게 한 참여를 보여주는에-490의 범위에서 CR 비율에서이 표현 형 결과 16,20.

상업 기도 하 고 비영리 세포 및 조직 유통 업체 현재 약 4000 셀 라인 150 종 이상 제공 셀 라인에서에서 파생 된 인간. 불멸 하 게 세포는 신속 하 게 많은 방해할 수 있습니다 직접 또는 간접적으로 미토 콘 드 리아 기능 잠재적인 치료제의 독성을 평가 하기 위한 편리한 도구입니다. 약물 검사 하는 동안 변환 된 셀을 사용 하 여 있을 수 있습니다 제한 된 예측 값의 부분에 바르 부르 크 효과, 많은 암의 특징 때문에. 종종, 암 기질 수준 인 산화에서 ATP를 생성 하 고 완벽 하 게 호 기성 조건19mitochondrion 종사 하지 않고 젖 산의 생산을 통해 산화 환 원 균형을 유지. 제약 개발 악명 비용이 많이 드는 이며 비효율적 시장 승인21달성에 실패 하는 인간 임상 시험에서 테스트 9 화합물에서 약 8. 잠재적인 치료제는 셀 라인에서 낮은 세포 독성으로 인해 초기 심사를 통과할 수 있습니다, 하는 동안 이러한 화합물 중 일부 mitotoxic는 가능 하다. 어떻게 이러한 독 소는 바르 부르 크 효과 표시 하지 않는 1 차 셀의 에너지 균형을 손상 할 수 있다을 감지 하는 적합 한 메서드, 없이 중요 한 정보는 종종 bottlenecking 초기 단계에 치료 개발-보였다.

Calorespirometry 생물 학적 샘플, 세포와 조직 등의 다양 한 신진 대사 활동을 분석 하는 실용적, 비 침 투 적인 접근 이다. 제시 프로토콜의 핵심 응용 프로그램의 범위와 호환 됩니다. 그러나 한 합병증,, 발견 되었습니다. 불멸 하 게 세포 보충 잠재적인 mitotoxins22, 세포를 민감하게 하기 위하여 에너지 생산을 위한 산화 인 산화 (OXPHOS)의 기여를 증가 시키는 갈 락 토스와 포도 당 자유로운 매체에 자주 교양 23. 이 대사 프로그래밍 샘플15열 량 계 사용 하는 스테인리스 ampules에 놓으면 분석을 보이지 않게 하기 위해 나타납니다. 세포 포도 당 매체에 경작 몇 시간 동안 높은 신진 대사 활동에 종사 계속 합니다. 한편, 갈 락 토스 매체에 경작 된 세포 용액, 초기 실험 시간 포인트를 제한 하는 측정에 그들의 배치의 30 분 이내 열 생산 감소. 이 문제는 불행 하 게도, 그들의 세포질 확산을 평가 하기 위해 기회를 방해. 이 특정 제한에도 불구 하 고 대부분 응용 프로그램은 호환 calorespirometric 분석 하 고이 접근을 통해 상세한 변화 정보를 얻을 수 있습니다.

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프로토콜

1. 세포 배양

  1. 인간의 간세포 암 (HepG2) 셀 셀 문화 인큐베이터에서 37 ° C에서 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 추가 기판 (10 mM 포도 당, 2 mM 글루타민 그리고 1 mM pyruvate)를 포함 하는 Dulbecco의 수정이 글의 중간 (DMEM) 유지 (5% CO 2 , 95% 공기, 습도 100%).
    주: DMEM respirometry와 열 량에 대 한 이후 단계에서 참조 되는 경우 위의 DMEM 배합을 사용 합니다.
  2. 1 x 106 세포 격판덮개 세포 100 m m 문화 접시와 subculture 그들 모든 7 일 또는 90 %confluency 도달 하기 전에 고 매체 마다 3-4 일 갱신.
  3. 세포는 60-80% 합칠 때 실험을 수행 합니다.

2입니다. 준비의 Respirometer 및 열 량 계

  1. Respirometer 챔버로 DMEM의 2.2 mL를 피펫으로 완벽 하 게, 마 개를 삽입 하 고 스 토퍼 공백 도구 보통 공기에서 최적의 산소 보급 수 있도록 조정.
  2. 저 어 지속적으로 37 ° C에서 산소 농도 (블루 추적) 및 산소 유량 (빨간 추적) 안정 될 때까지. Respirometer의 소프트웨어 실험에 사용 된 매체의 산소 용 해도 담당 하도록 프로그래밍 되어 있는지 확인 합니다.
    참고: 다른 미디어는 다른 산소 용 해도 계수 (예를 들어, DMEM 0.92 =).
  3. DMEM 챔버 열기와 산소 농도의 안정화, 후 산소 농도 추적의 안정적인 부분을 선택 하 고 100% 공기 포화에 대 한 그것을 교정.
  4. 0% 산소 산소 챔버에 존재 하는 때 산소 농도 추적의 안정적인 부분을 선택에 대 한 보정 수 있습니다. 20 µ L 적정 230 m m 나트륨 dithionite 또는 모든 산소는 실험의 끝에 생물학 견본에서 사용 후 후이 단계를 수행 합니다.
  5. respirometer의 100% 공기 교정 후 마 개를 닫고 챔버에 아무 거품이 있는지 확인.
    참고: 산소 유량에 약간의 증가 감지 됩니다 폐쇄 실에서 polarographic 산소 센서로 (POS)는 산소 부분 압력을 측정 하기 위해 산소를 소비 한다.
  6. 폐쇄 되 고 스 토퍼의 ~ 10 분, 후 안정 산소 유량을 관찰 하 여는 respirometer HepG2 세포에 대 한 준비 되는지 확인 합니다.
    참고: 여기에 사용 된 열 량 계 스테인리스 ampules 활용 하며 한 용액을 참조로 사용할 수 있습니다.
  7. 열 량 계에의 참조 용액에 H2O (dH2O)의 [샘플 (단계 4)와 같은 볼륨] 2.5 mL를 추가 하 고 필요한 경우 펜을 사용 하 여 모자를 조입니다. 공기 흐름이 봉인된 용액을 청소 하 고 천천히 열 량 계에의 참조 채널 1 위치에 용액을 낮은. 생물학 견본 준비 될 때까지 위치 1에 남아 있다.

3. Respirometry와 열 량에 대 한 HepG2 세포의 준비

  1. Respirometer 고 열 량 계 준비 및 보정을 확인 합니다. 따뜻한 DMEM 그리고 물 욕조에 37 ° C에 트립 신.
  2. DMEM CO2 와 온도 대 한 매체의 평형 수 있도록 인큐베이터에서 신선한 100 mm 접시를 추가 합니다.
    참고:이 매체 주사 실험에 대 한 적절 한 볼륨 ampules 사용 될 수에 따라 달라 집니다 그래서 사용 됩니다.
  3. 세포는 60-80% 합칠, 다음 세척 100 mm 접시 2 x 10 mL 실내 온도 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)의 거꾸로 가벼운 현미경으로 확인 합니다.
  4. 셀의 100 mm 접시에는 37 ° C trypsin의 3 mL를 추가 하 고 셀 문화 인큐베이터에서 37 ° C에서 7-10 분 동안 그들을 품 어. 37 ° C DMEM의 3 mL와 트립 신을 무력화 하 고 부드럽게 5 mL를 피펫으로와 ~ 20 번 pipetting으로 일시 중단.
  5. DMEM trypsin resuspended 셀 6 mL 균 15 mL 원뿔 튜브로 전송 하 고 셀 펠 렛을 방해 하지 않고 액체를 제거 하는 175 x g.에서 5 분 동안 원심.
  6. DMEM 피펫으로 철저 하 게 셀 수 있도록 그것은 충분히 다른 해리의 ~ 5 mL에 셀 펠 릿을 resuspend.
  7. 잘 혼합된 샘플의 ~ 100 µ L을 제거 하 고 모든 8 필드 셀의 총 수를 결정 하려면 hemocytometer 이용 하 여 철저 한 세포 수를 수행 합니다. 다음 ~ 50 µ L 당 106 세포 x 2를 생성 하기 위해서는 물의 resuspension의 셀에 대 한 볼륨을 계산 합니다.
    참고: 이렇게 하면 2 x 106 세포 최소한의 중간 변위와 respirometer의 각 챔버에 추가 됩니다.
  8. 원심 175 x g. Resuspend에서 5 분에 대 한 셀에 계산 된 DMEM 단계 3.7에서에서 펠 릿.
  9. 상공 회의소 (이 ~ 50 µ L를 해야) respirometer에서 당 2 × 106 셀을 삽입 하는 데 필요한 볼륨을 결정 하는 세포 수를 수행 합니다. 준비까지 얼음에 respirometric 측정에 대 한 셀을 저장 합니다.
  10. 얼음에 집중된 셀 예제를 실행 하는 동안은 주사에 대 한 1 x 105 셀/mL의 농도 생산 하는 데 필요한 희석을 결정 합니다.
  11. 샘플을 잘 혼합 하 고 각 용액에 대 한 1 x 105 셀/mL DMEM에에서 세포의 3 mL를 준비.
    참고: 샘플 희석 사용 DMEM equilibrated 중간 단계 3.3에서에서 준비 해야 합니다.

4입니다. 열 량

  1. µW에서 열 신호는 관찰 가능 하 고 안정적인 열 량 계는 컴퓨터에 연결 되어 확인 하십시오.
  2. 1 x 105 셀/mL (~2.5 x 105 셀)에 각 용액을 추가 하는 셀의 2.5 mL, 충분 한 공기를 보장은 용액의 뚜껑과 가스 보급 수 있도록 매체 사이.
  3. 즉시 뚜껑, 펜을 사용 하 여 필요한 경우 조입니다. 어떤 외부 이물질 제거를 공기를 사용 하 여 봉인된 용액, 깨끗 하 고 천천히 낮은 열 량 계 1를 용액. 용액은 1 위치를 하향 조정 하는 시간을 기록 합니다.
  4. 허용 15 분 동안 1 위치에 앉아 용액.
    참고:이 분 동안 respirometer (5 단계)에 주입 하는 세포입니다. 이렇게 하면 CR 비율을 결정 하는 때 동일한 시간 간격 열 생산 및 산소 소비에 대 한 사용.
  5. 위치 1에서 15 분 후 천천히 2 위치로 참조 및 샘플 ampules 낮은. ampules 인하 했다 시간 그리고 30 분 이상 측정 기록.

5입니다. respirometry

  1. 용액은 열 량 계에서 위치 1에 15 분 간격 동안 respirometric 연구를 시작 합니다.
  2. 철저 하 게 균질 성 해결책을 확인 하 고 주사를 pipetting 셀 샘플 혼합 < 50 µ L ~ 2 x 106 셀/챔버의 최종 농도 대 한 respirometer의 각 챔버에 세포 샘플의. 세포는 respirometer에 주입 하는 시간을 기록 합니다.
  3. 주입 후 HepG2 세포는 지속적으로 내면서 37 ° c. 산소 유량과 산소 농도 있는 꾸준한 감소의 두 안정화를 위해 적어도 20-30 분을 기다립니다.
  4. 화면 오른쪽에 V 당 O2 플럭스 탭을 선택 하 고 산소 유량의 안정적인 부분을 강조. 상표, 다음 통계 및 O2 플럭스 V 당에 대 한 기록 데이터를 선택 합니다. 이 녹음은 CR 비율의 계산에 사용 됩니다.
    참고: 5.5 및 5.6 단계는 선택적 이다. 누출 호흡과 최대한 uncoupled 호흡 oligomycin FCCP의 titrations에 의해 계시 될 것 이다.
  5. 각 챔버에 4 mg/mL oligomycin의 1 µ L를 주사 하 고 허용 ~ 산소 유량 안정화를 위한 10 분. 다음 단계에 의해 기록 안정적인 누설 호흡 률 5.4 oligomycin 추가 후 산소 유량 추적의 안정적인 부분을 강조 표시 하 여 수행.
  6. 2 µ L 주사 0.2 m m FCCP 각 챔버에 각 주입 후 산소 유량 안정화에 대 한 수의 적정 후속 FCCP 적정에 약간의 감소에 의해 표시 된 최대 유량에 도달할 때까지 titrations 계속. 최대 유량 중 안정 된 호흡 속도 기록 합니다.

6입니다. Calorespirometric 비율의 계산

  1. 샘플에서 최종 셀 수 수행 ~ 1 x 105 셀/mL 용액 (2.5 mL)에 추가 하는 셀의 총 수를 결정 하려면 hemocytometer의 모든 8 분야 활용.
  2. 열 량 계 및 respirometer는 안정적인 신호는 동일한 시간에 모두에서 기록 측정 시간을 결정 합니다. 참조에 용액은 위치 2와는 respirometer로 세포의 주사의 시간으로 낮 췄 다 때 기록입니다.
  3. µW/백만 셀으로 표현 단계에서 결정 하는 시간에 존경 받는 용액에 대 한 열 출력을 표시 하는 추적 위에 커서를 배치 하 여 열 생산을 기록 합니다. 산소 소비 데이터를 수집 하 고 그것 pmol O2의 -1 백만 셀 x x로 표시 됩니다 확인 합니다.
  4. CR 비율을 계산 하려면 먼저 kJ/s, µW를 변환 하 고 kJ/mol O2로 CR 비율을 O2/s의 mol에 kJ/s를 나눕니다. 참고: CR 비율 kJ/mol O2에 표시 됩니다.
    ( 보충 파일 1참조)

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결과

Calorespirometric 측정의 재현성은 적절 하 고 일관 된 샘플 준비에 따라 달라 집니다. 샘플에서 세포 배양 준비 해야 사용할 수 없습니다 경우 접시는 자란 셀 카운트 응집으로 인해 정확 하지 않은 될 수 있습니다. 또한, 감소 된 열 흐름 이멀전의 셀에 제한 된 기판 확산으로 인해 발생할 수 있습니다. 따라서, 부착 셀을 사용 하 여, 60-80% 사이 confluency와 접시를 선택 하 고 매체 실험 전에 24 h 변경 긴요 하다.

적절 한 기 악 교정 및 유지 보수 또한 유익 하 고 재현 calorespirometric 측정을 위해 중요 하다. 에 따라 제조 업체의 설립은 respirometer에 대 한 청소 프로토콜, 에탄올과 광범위 한 세척 잔류 소수 uncouplers와 억제제 제거 되 고에 의해 측정을 부분적으로 타협 하지 않는 수 있도록 구현 억제 또는 연결을 푸는 미토 콘 드리 아. Respirometer 챔버 샘플 측정 전에 작동 하는지, 산소 농...

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토론

Calorespirometry의 목적은 양적 호 기성 및 혐 기성 경로 신진 대사 활동에의 기여를 평가 하 고 세포 에너지 플럭스의 복합 보기를 얻을 것입니다. 이것은 방열 및 산소 유량 상응 이론 oxycaloric와 계산 된 CR 비율의 비교에서 뒤의 동시 측정에 의해 수행 됩니다. 재현 가능 하 고 신뢰할 수 있는 데이터에 대 한 몇 가지 중요 한 단계를 고려해 야 합니다. 살 균, 건강 한 세포 배양의 정비는 중요 한 이다. 세균 이나 곰 팡이 의해 오염 남용된 열 생산 또는 산소 소비, CR 비율 의미가 렌더링 될 수 있습니다. 더, 부적 절 한 셀 카운트, 혼합, 불 쌍 한 샘플 또는 이멀전의 세포는 부정확 한 CR 비율 또한 발생할 수 있습니다. respirometer에 관한 중요 한 단계는 주입 볼륨에서 50 µ L 아래 적절 한 샘플 준비 이다. 이 볼륨 최소한 매체의 상공에서 전치과 산소 소비는 제대로 2 x 106 셀을 보장 합니다. 일상적인 호흡 관찰 되 면 제안 된 프로토콜 두 추가 t...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 작품은 메리 E. Konkle와 마이클 A. Menze 국립 과학 재단 교부 금 체-160944에 의해 부분적으로 투자 되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
HepG2 세포미국식 배양 컬렉션HB-8065열량
O2K-호흡계Oroboros Instruments10022-02호흡계
LKB 2277 열 활성 모니터(TAM)온도 측정 AB온도 측정은 TA Instruments에서 구입했습니다
루브산 나트륨(100mM)Thermofisher Scientific11360070DMEM 배지
Fetal Bovine Serum - Premiuim SelectAtlanta BiologicalsS11550에 10% 첨가 DMEM 배지
Trypsn-EDTA (0.25%)Thermofisher Scientific25200072해리 시약
Oligomycin from Streptomyces diastatochromogenesSigma Aldrich O4876미토콘드리아 억제제
카르보닐 시안화물 4-(트리플루오로메톡시)페닐히드라존시그마 알드리치C2920미토콘드리아 언커플러
코닝 100mm TC 처리 배양 접시Corning Corporation430167조직 배양 접시
포도당, 분말Thermofisher Scientific15023021DMEM 매체
갈락토오스Fischer ScientificBP656500용 갈락토스
Thermofisher Scientific25030081 DMEM 매체
DMEM, 포도당 없음Thermofisher Scientific11966025배양 배지
계 . 피세포 용 포도당, 분말 DMEM 매체 L-글루타민 (200 mM) 글루타민 세포

참고문헌

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