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방법 논문

설치류와 인간의 조직에 급성 Ictal 활동의 생성 및 요청 시 개시

8.7K 조회수

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DOI:

10.3791/57952

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2019년 1월 19일

 ,  ,  , 

이 논문에서

요약

급성 발작 모델은 epileptiform 이벤트를 기본 메커니즘을 공부 하 고 중요 합니다. 또한, epileptiform 이벤트에 수요를 생성 하는 기능에는 그들의 개시를 기본 이벤트의 정확한 순서를 공부 하 매우 효율적인 방법을 제공 한다. 여기, 우리가 마우스 및 인간의 조직에 급성 4-aminopyridine 대뇌 피 질의 발작 모델을 설명 합니다.

초록

발작을 제어 의료 사회에 대 한 도전적인 문제에 남아 있다. 진행을 하려면 연구원은 광범위 하 게 발작 역학을 연구 하 고 그것의 근본적인 메커니즘을 조사 하는 방법이 필요 합니다. 급성 발작 모델 편리, electrophysiological 녹음을 수행 하는 기능을 제공 하 고 electrographic 발작 같은 (ictal) 이벤트의 큰 볼륨을 생성할 수 있습니다. 급성 발작 모델에서 유망한 결과 만성 간 질 모델 및 임상 시험을 다음 고급 수 있습니다. 따라서, 급성 모델을 충실 하 게 복제 한 임상의 electrographic 및 동적 서명에서 발작을 공부 하 고 임상 관련 연구 결과 만들기 위한 필수적인 것. 인간 조직에서 준비 하는 급성 발작 모델에서 ictal 이벤트 공부도 임상적으로 관련 된 연구 결과 만들기 위한 중요 하다. 이 문서의 주요 초점이 이다 vivo에서 그리고 생체 외에서 연구 뿐만 아니라 마우스 및 인간의 조직 ictal 이벤트 생성에 그것의 다양성으로 인해 대뇌 피 질 4 AP 모델에. 이 문서에 메서드 또한 0 Mg2 + 모델을 사용 하 여 나포 유도의 다른 방법에 설명 하 고 제공 하는 장점에 대 한 자세한 개요와 다른 생성 된 epileptiform 같은 활동의 한계 급성 발작 모델입니다. 또한, 이용 하 여 상업적으로 이용 가능한 optogenetic의 마우스 긴장, 짧은 (30 ms) 빛 펄스 ictal 이벤트 저절로 발생 동일 하 사용할 수 있습니다. 마찬가지로, 감마 아미노 버터 산 (조미료) 신경 전달 물질의 30-100 ms 퍼프 ictal 이벤트를 동일 저절로 발생 하는 트리거를 인간의 조직에 적용할 수 있습니다. Ictal 이벤트 요청 시 급성 발작 모델에 트리거 수 발작 개시 역학 기초 및 잠재적인 안티 발작 치료를 효율적으로 평가 하는 이벤트의 정확한 순서를 관찰 하는 새로운 기능을 제공 합니다.

서론

급성 발작 모델 성공적으로 electrographic 서명 ictal 이벤트 발작을 경험 하는 개인의 뇌 파 (EEG)에의 연상을 재현할 수 있습니다. 연구원은 대리 모 알선으로 이러한 ictal 같은 이벤트 (여기 'ictal 이벤트' 라고 함)을 사용 하 여 발작 이벤트1. 임상, ictal 이벤트 발작 이벤트에 대 한 신뢰할 수 있는 프록시 이후 발작 신경 장애는 뇌에서 발생 하는 역할. 간 질 모니터링 장치, 신경과 두뇌의 epileptogenic 영역을 확인 하 고 절제2격리 ictal 이벤트 감지 시 의존 합니다. 집중 치료 단위에 의사 ictal 활동 평가 진정 환자3에서 지속 되는 발작 활동을 모니터링 합니다. 간 질 환자의 30%는 사용 가능한 약물4,5, 저항 하는 마약 및 약물 유발 발작을 포함 하는 의학 케이스의 10%는 의료 사회에 대 한 도전적인 문제 될 남아 발작을 제어 3표준 치료 응답 하지 않는. 이 미국 인구의 10%는 prospected 그들의 일생에서 한 발작 이벤트를 경험 하 고 3....

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프로토콜

환자와 관련 된 모든 연구는 헬싱키의 선언에 따라 대학 건강 네트워크 연구 윤리 위원회에 의해 승인 프로토콜에서 수행 되었다. 절차와 관련 된 동물 동물 관리에 캐나다 위원회 지침에 따라 되었고 Krembil 연구 연구소 동물 관리 위원회에 의해 승인.

1. 프로토콜 i: 급성 발작 모델 체 외에

  1. 해 부 솔루션 및 인공 중추의 준비
    1. Carbogenate 초순 (이 물 18.2 ㏁의 저항으로 필터링) carbogen (95% O2/5% CO2) 5 분을 돌 거품 디퓨저 (수족관 통풍 장치) 공기를 사용 하 여.
      참고: 공기 돌 carbogen 탱크의 레 귤 레이 터를 통해 표준 실리콘 튜브에 연결 수 있습니다. 공기 돌, 사용할 수 없는 경우 인감 실리콘 튜브의 끝을 종료 하 고 밖으로 거품 carbogen 가스 carbogenate 솔루션을 허용 하도록 물개에 있는 작은 구멍을 찌 르 지.
    2. 초순의 표 1 용액을 용 해 하 여 절 개 솔루션을 준비 합니다. CaCl2 그것을 분해 수 있도록 적어도 5 분 carbogenated 되어 솔....

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결과

100 µ M 4-AP의 좋은-품질 (손상된) 450 µ m 크기의 대뇌 피 질의 뇌 조각 하는 청소년 VGAT ChR2 안정적으로 유도 된 마우스 재발 ictal 이벤트에서 (> 5 s) 15 분 (1Ai 그림) 내에서 응용 프로그램. 100 µ M 4-AP의 가난한 품질의 조각에 응용 프로그램 이벤트를 파열 또는 활동 (그림 1Aii) 급상승 귀착되는. 평균, 각 해 부 쥐의 뇌에서 조각의 40%는 성공적으로 ictal 이벤트 생성. 또한, 해 부 쥐의 83% (25/30) ictal 이벤트를 성공적으로 생성 된 하나 이상의 뇌 조각 귀착되는. 자연 발생으로 뇌 조각 ictal 이벤트 안정적으로 형태 (그림 1Aiii 및 1Aiv)에 동일 ictal 이벤트 트리거 뇌 조각에.......

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토론

뇌 조각 proconvulsant 약물 또는 신경 네트워크의 흥분 성 증가 ictal 이벤트 (electrographic 발작 같은 이벤트)의 강 수를 홍보 하는 변경 된 실제 perfusate와 함께 처리 됩니다. 마우스 모터 somatosensory 영역의 기본 코로나 조각 있어야 대상 피 질, 지역 2 (CG), 그러나 retrosplenial 지역 (RS); 하지 이 해 부 마커 ictal 이벤트 유도 적합은 코로나 조각의 범위를 식별할. 두 개의 반구는 거의 동일 (비슷한 실험 단위)로 마우스 조직에 대 한 선택적 수정 뇌 조각의 두 반구 일치 쌍 실험 디자인, 반으로 잘라입니다. Ictal 이벤트는 신경 네트워크 현상 때문에 준비할 때 ictal 이벤트를 생성 하는 뇌 조각, 그것 신경 네트워크 및 그것의 시 냅 스 연결의 무결성을 유지 하는 것이 필수적입니다. 조각 품질에 대 한 중요 한 프로토콜의 1 단계에서 3 포인트는 1) 조각화 절차, 2) 외피, 및 3) 산소. 첫째, 조각화 절차는 속도 기술 사이의 균형을.......

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 작품은 캐나다 연구소의 건강 연구 (피터 L. Carlen을 하도록 A. Valiante 119603 청소), 온타리오 뇌 연구소 (하 하도록 A. Valiante), 및 Mightex 학생 연구 그랜트 (마이클 장)에 의해 지원 되었다. 우리는 리암 긴 비디오 원고 촬영에 그의 원조에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는 컴파일 수치와 테이블이이 원고에 있는 그들의 원조에 대 한 파리 Baharikhoob, Abeeshan Selvabaskaran, 및 Shadini Dematagoda를 인정 하 고 싶습니다. 그림 1A, 3A, 4A, 6A 는 장 외 에서 출판 된 데이터에서 만든 모든 원래의 수치 16.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
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없음 해당 해당 해당 온도계를 통해 구매 N/A 해당 없음  중 염화 해당 인

참고문헌

  1. Jefferys, J. G. R. Advances in understanding basic mechanisms of epilepsy and seizures. Seizure. 19 (10), 638-646 (2010).
  2. Fujiwara, H., et al. Resection of ictal high-frequency oscillations leads to favorable surgical outcome in pediatric epilep....

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