이 프로토콜, 마우스의 눈 표면에 마모를 및 상처 치유 과정 그 후에 따라 메서드를 설명 합니다. 프로토콜은 부분적으로 anaesthetized 쥐에서 눈의 표면 상피를 제거 하는 눈 버 합니다.
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이 프로토콜, 마우스의 눈 표면에 마모를 및 상처 치유 과정 그 후에 따라 메서드를 설명 합니다. 프로토콜은 부분적으로 anaesthetized 쥐에서 눈의 표면 상피를 제거 하는 눈 버 합니다.
Murine 각 막 상처 치유를 공부 하는 우수한 모델을 제공 합니다. 각 막, 눈의 가장 바깥쪽 레이어 이며 따라서 부상으로 첫 번째 방어 이다. 사실, 눈 부상 클리닉에서 발견의 가장 일반적인 유형은 각 막 마포 이다. 여기, 우리는 인 제거는 각 막 상피에 vivo에서 쥐를 마 취에 한 마모를 유발 하는 눈 버를 활용 합니다. 이 메서드는 타겟과 재현 상피 중단, 그대로 다른 지역에 대 한 수 있습니다. 또한, 우리 fluorescein 얼룩과 침식된 상피의 시각화를 설명 하 고 각 막이 침식된을 시각화 하는 방법에 구체적인 조언을 제공. 다음, 우리는 상처는 상처는 다시 epithelialized 때까지 0, 18, 및 72 h 마모, 후 치유의 타임 라인을 따른다. 상해 각 막의 상피 마모 모델 상피 세포 증식, 마이그레이션 및 각 막 층의 재 epithelialization에 대 한 연구에 이상적입니다. 그러나,이 방법은 아니다 상처 치유, 동안 stromal 활성화 연구 최적의 눈 버 stromal 세포 층에 침투 하지 않습니다 때문에. 이 메서드는 또한 임상 응용, 약물 효과의 예, 전 임상 시험에 적합.
수많은 기관의 상피 층 부상에 노출 됩니다. 그러나, 그들은 또한 상처 치유를 통해 조직의 손실을 보상 하는 기능을 포함. 각 막 상처 치유를 공부 하는 우수한 모델을 제공 합니다. 그것은 눈의 외부 표면에 형성 하 고 민감한 눈 기계에 대 한 보호 계층을 제공 합니다. 따라서, 각 막 병원 균과 감수를 물리적 장벽 역할을 합니다. 그것은 3 개의 층;으로 구성 상피, 기질 및 피입니다. 각 막의 상피 각 막의 가장 바깥쪽 레이어 최대 수 있습니다. 상피 세포는 단단한 접속점1,2,3통해 서로 엄격 하 게 준수 하 여 각 막의 장벽 기능을 유지 합니다. acellular 막 지하실 막, 보 먼의 막 내 화 keratocytes를 포함 하는 광범위 한 기질에서 상피를 분리 합니다. 기질에서 내 피 세포 영양분, 물, 그리고 산소는 상위 레이어를 채널.
각 막 찰과상은 병원4에서 아주 일반적 이다. 각 막에 상해 다양 하지만 크게 다른 이물질, 스크래치, 또는 모래, 먼지와 같은 작은 입자에 의해 발생. 프로토콜 설명 여기 임상 관련 유형....
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1입니다. 준비
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이 프로토콜 마우스 각 막에 마포 상해를 입힐 수 있는 모델을 설명 하 고 따라 하 고 마모 후 치유 과정을 시각화 방법을 제시. 최근에, 우리는 상처 치유6동안 각 막 상피 조상 세포의 역할을 연구 하기 위해이 메서드를 고용. 설정된 도구를 사용 하 여 성공적인 마모 실험에 열쇠 이다. 우리는, 그리고 다른 찰과상6,,724수행 하 Algerbrush II 눈 버 (그림 1)을 사용 했습니다. 이 도구는 보다 훈련 또는 각 막 상피가 떨어져 브러쉬 크기에 0.5 m m의 무디게 버 팁이 있다. 따라서,이 도구는 각 막에 마포 상해에 대 한 권장된 선택 이다.
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부상 메서드는 각 막 항상성 및 병 리의 다양 한 측면을 공부 인기 있는 도구입니다. 마모 모델 안과에 관련 문제를 해결 하기 위해 잘 제어 방법을 제공 합니다. 그러나, 특정 중요 한 포인트는 프로토콜에서 강조 가치가 있다. 특히, 수의학, 상처 치유 타임 라인, 그리고 결과 관한 설명 내용을 outbred NMRI와 ICR 주식와 함께 사용 하기 위해 최적화 된 하지만 쥐26의 변종 마다 다를 수 있습니다. 이 프로토콜, 실험 동물 약 20 분 동안 마 취 유지 됩니다. 이 마모를 수행 하는 시간이 짧지만 충분 한 창을 제공 합니다. 그러나 때 눈 버를 사용 하 여 작업은 매우 빠르게 마모 자체를 만드는 고이 시간 프레임에 수행 가능 해야 한다.
간단 하 고 접근 가능한 시각화 마모 모델의 주요 장점 중 하나입니다. 분자 생물학 방법을 결합 하 여,이 훌륭한 세부 사항에서 상피 세포를 연구 하는 가능성을 엽니다. 침식된 각 조직학 또.......
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저자는 공개 없다.
우리는 Kaisa Ikkala 나중에 우리의 중앙 연구 질문에 구현 하는 동안 뿐만 아니라 그녀의 귀중 한 기술 지원 및 통찰력이 도움이 때이 방법을 현실화에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리 또한 실험실 동물 센터와 안 나 Meller 수의학 작업의 지침을 계획 그녀의 도움에 감사 하 고 싶습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| NMRI 마우스 | Envigo | 275 | |
| 0.9% NaCl | 사용 멸균 | ||
| Medetomidine | Vetmedic | Vnr087896 | 시장명: Cepetor Vet |
| Ketamine | Intervet | Vnr511485 | 시장명: Ketaminol Vet |
| Buprenorfin | Invidior | 3015248 | 시장명: Temgesic |
| Atipamezol | Orion Pharma | Vnr471953 | 시장 이름 : Antisedan Vet |
| Carprofen | Norbrook | Vnr027579 | 시장 명 : Norocarp Vet |
| 1 % fucidin acid eye ointment | Dechra | Vnr080899 | 시장 명 : Isathal |
| Fluorescein salt | Sigma-Aldrich | F6377 | |
| 인산염 완충 식염수 | PBS | ||
| Algerbrush ii 안구 버 ( 0.5mm 팁) | Algerbrush | 6.39768E + 11 | |
| 코발트 블루 펜 라이트 | SP 서비스 | DE / 003 | |
| 핫 플레이트 | Kunz Instruments | 2007-0217 | |
| 디지털 SLR 카메라 | Nikon | D80 | |
| 조정 가능한 카메라 암 및 클램프 | Neewer | 10086132 | 높이 28cm |
| 유연한 암과 클램프가있는 테이블 램프 | Prisma | ||
| 소프트 와이프 | KimtechScience | 7552 | |
| CO2 챔버 | |||
| 해부 도구 세트 | Fine Science Tools | ||
| 주사기 | Beckton Dickinson | 303172 | |
| 26G 바늘 | Beckton Dickinson | 303800 | |
| 2 mL Eppendorf tube | Sarstedt | 689 | |
| 티슈 케이스 | Sakura Finetech | 4118F | |
| 티슈 가공기 ASP200S | Leica | ||
| Xylene | VWR | UN1307 | |
| 파라핀 왁스 | Millipore | K95523361 | |
| 티슈 임베딩 몰드 32 x 25 x 6 mm | Sakura Finetech | 4123 | |
| Microtome | Microm | HM355 | |
| Orthex | 60591 | 절 | |
| 수조 | Leica | HI1210 | |
| 마이크로톰 블레이드 | Feather | S35 | |
| 유리 슬라이드 | Th.Geyer GmbH & Co. | 7,695,019 | |
| 초순수 | Millipore | MPGP04001 | MilliQ |
| 파라포름알데히드 | 시그마-알드리치 | 158127 | PFA |
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