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방법 논문

각 막에 대 한 모델로 눈 버와 각 막 상피 마모 상처 치유

21.2K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/58071

⸱

2018년 7월 10일

 ,  , 

이 논문에서

요약

이 프로토콜, 마우스의 눈 표면에 마모를 및 상처 치유 과정 그 후에 따라 메서드를 설명 합니다. 프로토콜은 부분적으로 anaesthetized 쥐에서 눈의 표면 상피를 제거 하는 눈 버 합니다.

초록

Murine 각 막 상처 치유를 공부 하는 우수한 모델을 제공 합니다. 각 막, 눈의 가장 바깥쪽 레이어 이며 따라서 부상으로 첫 번째 방어 이다. 사실, 눈 부상 클리닉에서 발견의 가장 일반적인 유형은 각 막 마포 이다. 여기, 우리는 인 제거는 각 막 상피에 vivo에서 쥐를 마 취에 한 마모를 유발 하는 눈 버를 활용 합니다. 이 메서드는 타겟과 재현 상피 중단, 그대로 다른 지역에 대 한 수 있습니다. 또한, 우리 fluorescein 얼룩과 침식된 상피의 시각화를 설명 하 고 각 막이 침식된을 시각화 하는 방법에 구체적인 조언을 제공. 다음, 우리는 상처는 상처는 다시 epithelialized 때까지 0, 18, 및 72 h 마모, 후 치유의 타임 라인을 따른다. 상해 각 막의 상피 마모 모델 상피 세포 증식, 마이그레이션 및 각 막 층의 재 epithelialization에 대 한 연구에 이상적입니다. 그러나,이 방법은 아니다 상처 치유, 동안 stromal 활성화 연구 최적의 눈 버 stromal 세포 층에 침투 하지 않습니다 때문에. 이 메서드는 또한 임상 응용, 약물 효과의 예, 전 임상 시험에 적합.

서론

수많은 기관의 상피 층 부상에 노출 됩니다. 그러나, 그들은 또한 상처 치유를 통해 조직의 손실을 보상 하는 기능을 포함. 각 막 상처 치유를 공부 하는 우수한 모델을 제공 합니다. 그것은 눈의 외부 표면에 형성 하 고 민감한 눈 기계에 대 한 보호 계층을 제공 합니다. 따라서, 각 막 병원 균과 감수를 물리적 장벽 역할을 합니다. 그것은 3 개의 층;으로 구성 상피, 기질 및 피입니다. 각 막의 상피 각 막의 가장 바깥쪽 레이어 최대 수 있습니다. 상피 세포는 단단한 접속점1,2,3통해 서로 엄격 하 게 준수 하 여 각 막의 장벽 기능을 유지 합니다. acellular 막 지하실 막, 보 먼의 막 내 화 keratocytes를 포함 하는 광범위 한 기질에서 상피를 분리 합니다. 기질에서 내 피 세포 영양분, 물, 그리고 산소는 상위 레이어를 채널.

각 막 찰과상은 병원4에서 아주 일반적 이다. 각 막에 상해 다양 하지만 크게 다른 이물질, 스크래치, 또는 모래, 먼지와 같은 작은 입자에 의해 발생. 프로토콜 설명 여기 임상 관련 유형....

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프로토콜

모든 실험 국가 동물 실험 보드에 의해 승인 됩니다.

1입니다. 준비

  1. 모든 솔루션을 준비 하 고 실내 온도에서 달리 명시 하지 않는 한 계속. Dispose 사용 재료 및 솔루션 폐기물 처리 규정을 따릅니다.
  2. 사용 NMRI와 ICR outbred 주식, 4-12 주 세 중 성별 사이의. C57BL/6 긴장을 사용 하 여 단계 1.3.2에서에서 케 타 민-medetomidine 준비 방법을 따르십시오. 다른 단계에 대 한 1.3.3.-1.3.5에 설명 된 지침을 따릅니다.
  3. 신선 하 고 작업을 시작 하기 전에 시간에 수의학을 준비 합니다. Carprofen 나중에 사용 될 것입니다, 그리고 따라서 그것은 시점에서 그것을 준비 하는 데 필요한.
    1. 혼합 0.375 mL 마 취에 대 한 마 취 제-medetomidine의 솔루션을 준비, (재고 농도 50 mg/mL) 0.25 mL와 케 타 민 (Ketaminol 수 의사)의 (농도 재고 1 mg/mL) medetomidine (Cepetor 수 의사)의 살 균 0.9%의 1.25 mL을 추가 하 고 NaCl. 0.15 mL/20 g 마우스 무게 (7.5 mg/kg, 케 타 민 1 mg/kg, medetomidine)의 관리.
    2. ....

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결과

이 프로토콜 마우스 각 막에 마포 상해를 입힐 수 있는 모델을 설명 하 고 따라 하 고 마모 후 치유 과정을 시각화 방법을 제시. 최근에, 우리는 상처 치유6동안 각 막 상피 조상 세포의 역할을 연구 하기 위해이 메서드를 고용. 설정된 도구를 사용 하 여 성공적인 마모 실험에 열쇠 이다. 우리는, 그리고 다른 찰과상6,,724수행 하 Algerbrush II 눈 버 (그림 1)을 사용 했습니다. 이 도구는 보다 훈련 또는 각 막 상피가 떨어져 브러쉬 크기에 0.5 m m의 무디게 버 팁이 있다. 따라서,이 도구는 각 막에 마포 상해에 대 한 권장된 선택 이다.

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토론

부상 메서드는 각 막 항상성 및 병 리의 다양 한 측면을 공부 인기 있는 도구입니다. 마모 모델 안과에 관련 문제를 해결 하기 위해 잘 제어 방법을 제공 합니다. 그러나, 특정 중요 한 포인트는 프로토콜에서 강조 가치가 있다. 특히, 수의학, 상처 치유 타임 라인, 그리고 결과 관한 설명 내용을 outbred NMRI와 ICR 주식와 함께 사용 하기 위해 최적화 된 하지만 쥐26의 변종 마다 다를 수 있습니다. 이 프로토콜, 실험 동물 약 20 분 동안 마 취 유지 됩니다. 이 마모를 수행 하는 시간이 짧지만 충분 한 창을 제공 합니다. 그러나 때 눈 버를 사용 하 여 작업은 매우 빠르게 마모 자체를 만드는 고이 시간 프레임에 수행 가능 해야 한다.

간단 하 고 접근 가능한 시각화 마모 모델의 주요 장점 중 하나입니다. 분자 생물학 방법을 결합 하 여,이 훌륭한 세부 사항에서 상피 세포를 연구 하는 가능성을 엽니다. 침식된 각 조직학 또.......

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

우리는 Kaisa Ikkala 나중에 우리의 중앙 연구 질문에 구현 하는 동안 뿐만 아니라 그녀의 귀중 한 기술 지원 및 통찰력이 도움이 때이 방법을 현실화에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리 또한 실험실 동물 센터와 안 나 Meller 수의학 작업의 지침을 계획 그녀의 도움에 감사 하 고 싶습니다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
NMRI 마우스Envigo275
0.9% NaCl사용 멸균
MedetomidineVetmedicVnr087896시장명: Cepetor Vet
KetamineIntervetVnr511485시장명: Ketaminol Vet
BuprenorfinInvidior3015248시장명: Temgesic
AtipamezolOrion PharmaVnr471953시장 이름 : Antisedan Vet
CarprofenNorbrookVnr027579시장 명 : Norocarp Vet
1 % fucidin acid eye ointmentDechraVnr080899시장 명 : Isathal
Fluorescein saltSigma-AldrichF6377
인산염 완충 식염수PBS
Algerbrush ii 안구 버 ( 0.5mm 팁)Algerbrush6.39768E + 11
코발트 블루 펜 라이트SP 서비스DE / 003
핫 플레이트Kunz Instruments2007-0217
디지털 SLR 카메라NikonD80
조정 가능한 카메라 암 및 클램프Neewer10086132높이 28cm
유연한 암과 클램프가있는 테이블 램프Prisma
소프트 와이프KimtechScience7552
CO2 챔버
해부 도구 세트Fine Science Tools
주사기Beckton Dickinson303172
26G 바늘Beckton Dickinson303800
2 mL Eppendorf tubeSarstedt689
티슈 케이스Sakura Finetech4118F
티슈 가공기 ASP200SLeica
XyleneVWRUN1307
파라핀 왁스MilliporeK95523361
티슈 임베딩 몰드 32 x 25 x 6 mmSakura Finetech4123
MicrotomeMicromHM355
Orthex60591절
수조LeicaHI1210
마이크로톰 블레이드FeatherS35
유리 슬라이드Th.Geyer GmbH & Co.7,695,019
초순수MilliporeMPGP04001MilliQ
파라포름알데히드시그마-알드리치158127PFA
편용

참고문헌

  1. Yi, X., Wang, Y., Yu, F. S. Corneal epithelial tight junctions and their response to lipopolysaccharide challenge. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (13), 4093-4100 (2000).
  2. Wang, Y., Chen, M., Wolosin, J. M.

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