만성 스트레스 쥐에 Xiaoyaosan의 항 우울증 효과 평가

요약

여기, 선물이 마우스 우울한 모델 설정, 만성 예측할 수 없는 가벼운 스트레스 (CUMS)와 관련 된 행동 변화를 관찰 하 고 Xiaoyaosan의 항 우울증 효과 평가 하는 프로토콜.

초록

항우울제 약물과 심리 치료의 표준화 된 사용 이외에 전통 중국의 술의 사용 주요 우울한 무질서 (MDD) 환자의 전반적인 향상을 리드가 하고있다. 따라서,이 연구의 목적은 마우스 우울한 모델을 설정, 만성 예측할 수 없는 가벼운 스트레스 (CUMS)와 관련 된 행동 변화를 관찰 하 고 다음 Xiaoyaosan의 항 우울증 효과 평가 했다. 마우스는 4 개 그룹으로 무작위로 분할 되었다: 컨트롤 그룹, 모델 그룹, Xiaoyaosan, 그룹 치료 그리고 fluoxetine 치료 그룹. 모든 쥐 감 금 소에 개별적으로 보관 했다 그리고 우울증 유도 되었다 쥐에 21 일 동안 CUMS의 몇 가지 설계 조작에 그들을 노출 함으로써 프로토콜에 설명 된 대로. 제어 그룹 및 모델 그룹에서 마우스 받은 0.5 mL 증류수, 쥐 치료 그룹에서 받은 어느 Xiaoyaosan 동안 (0.25 g/k g/일) 또는 부정맥 (2.6 m g/k g/일). 연구에 사용 하는 약물은 전체 3 주 동안 매일 intragastrically 부여 했다. 우울증 같은 행동을 예측 하는 일련의 코트 상태, 몸 무게를 포함 하 여 매개 변수 필드 테스트 점수, 열고 자당 기본 설정 테스트 점수를 기록 했다. 데이터 분석 쥐 크게 변경 된 모델의 동작 제어 그룹에서 Xiaoyaosan 및 부정맥의 치료에 의해 개량 되었다 쥐의 행동에 비해 보여주었다. 현재 결과 CUMS 유도 된 쥐의 행동에 Xiaoyaosan의 항 우울증 효과 시연 및 Xiaoyaosan 처방에서 화합물에 그들의 유익한 효과 고려 하 고 우울증, 치료에 대 한 가치가 있을 수 있습니다 밝혀 우울증 같은 행동.

서론

MDD는 만성, 재발 성 높은 정신 질환 선물 영구 낮은 기분, 우울증, 낮은 자기 존중 감, 정신 지체, 관심의 상실과 수 면 장애, 심히 비관적 또는 자살 성향; 그것은 인간의 건강과 사회 안정화¹에 큰 해가 발생 했습니다. 그것은 세계의 장애의 주요 원인 중 하나 되 고 세계 보건 기구^2,32030 질병 부담의 주요 주요 원인 중 하나일 수 있습니다. 현재, 항우울제 약물과 심리 치료는 MDD를 치료에 첫 번째 선택이 될 수 간주 됩니다. 그럼에도 불구 하 고, MDD 진단 환자의 거 대 한 수 치료, 또는 지속적인 약물에 응답 하지 않는 하 고 그들은 우울증 치료 저항⁴를 가진 것으로 나열 됩니다.

Xiaoyaosan는 고전적인 중국 복합⁵ 중국⁶송나라 이후는 년의 수천에 대 한 심리적 질병 치료에 널리 사용 된 이다. 그것은 8 중국 약초의 구성 된다: 기 수 Bupleuri, 기 수 Paeoniae 알바, 기 수 Angelicae Sinensis, Poria, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, 기 수 Glycyrrhizae, Rhizoma Zingiberis Recens , 그리고 Herba Menthae. Xiaoyaosan 여러 지역구를 포함, 여러 대상을 있으며 여러 경로⁷을 활용 하 여. Xiaoyaosan는 일반적으로 표시 되었습니다 다양 한 질병와 관련 된 정신 장애, 치료를 위한 안전 하 고 효과적인 수식 및 현대 연구 또한이 화합물^{8,9, 안티 우울증 메커니즘에 초점을 맞춘 10}. MDD의 pathogenesis 아직 확실치있지 않습니다, 비록 monoamine 가설, 신경 전달 물질 수용 체 가설, 신경 내 분 비 기능 변화 가설, 면역 체계 이상이 가설을 포함 하 여 여러 가지 가설 등. 여러 연구 Xiaoyaosan의 항우울제 효과 우울증 같은 개선으로는 위의 가설^11,12, 및 그것의 치료 행위 매니페스트 소재 기지와 연결 행위¹³.

또한, 우울증의 보급, 현대 사회에서 노동력, 조기 은퇴, 및 고가의 치료¹⁴감소 고통이 하고있다. 비싼 치료 의료 비용 증가의 범위와 정확한 바람직하지 않은 결과 부작용¹⁵의 정확한 기대 즉 엄격한 치료가 필요 합니다. 중국 허브 Xiaoyaosan는 액세스할 수 있는 구성 요소, 독특한 효과, 그리고 약간의 부작용 있습니다. 응용 프로그램은 현대 의학 치료의 부담을 줄이는 역할을 재생할 수 있습니다. 따라서, Xiaoyaosan의 응용 프로그램에 대 한 더 많은 이론적 근거를 제공 하는 대체 임상 치료는 증가 매년, 발생률, 우울증의 치료를 위해 제공 되어야 하 고 동시에 인간의 건강을 개선 한다. 이 문서는 마우스의 우울한 모델을 수립 하 여 우울증 같은 행동을 방지 하기 위해 Xiaoyaosan의 사용을 포함 하는 프로토콜을 설명 합니다. 오픈 필드 테스트 및 자당 기본 설정 테스트 Xiaoyaosan의 항우울제 효과 확인 하기 위해 사용 되었다.

프로토콜

이 프로토콜의 중국 의학의 베이징 대학 동물 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 그리고 관리 및 사용의 실험실 동물의 중국에 대 한 모든 지침에 따라 했다. 실험 절차 동안 아무 사고 사 상황 그리고 아무 동물이이 연구에서 안락사 될 하는 데 필요한.

1. 실험에 대 한 약물 준비

참고: 중국 약초 구입 하 고 중국 의학의 베이징 대학 박사 B. Liu를 인증 했다. Xiaoyaosan 포함 6:6:6:6:3:6:2:2의 비율에 다음 8 개의 전통적인 중국 약물: 기 수 Angelicae Sinensis, 기 수 Paeoniae 알바, Poria, 기 수 Bupleuri, 기 수 Glycyrrhizae, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Herba Menthae 및 Rhizoma Zingiberis Recens.

1. 앞에서 설명한¹⁶Xiaoyaosan를 준비 합니다.
   참고: 우리는 중국-일본 우정 병원의 중국 의학 준비 실에서 이러한 화합물을 추출 하 고 추출 수율은 18.8%.
2. 고성능 액체 크로마토그래피-질량 분석 분석 (LC-MS/MS)¹⁷에 의해 Xiaoyaosan의 품질을 확인 합니다.

2. 쥐 실험 절차에 대 한 준비 하 고

참고: 실험 절차에 대 한 12 주 세 건강 한 남성 60 C57BL/6J 마우스 선정 되었다, 18 및 22 g 사이 무게 각 마우스와 함께.

1. 전형적인 특정 병원 체 자유롭게 (SPF) 실험 동물 실에 감 금 소에서 마우스를 개별적으로 유지 (22 ± 1 ° C, 12 h/12 h 다크/라이트 사이클, 상대 습도: 30-40%) CUMS 절차 전에 1 주일에 대 한.
2. 임의로 컨트롤 그룹, 모델 그룹, Xiaoyaosan 치료 그룹, 또는 그들의 몸 무게에 따라 부정맥 치료 그룹으로 모든 쥐를 나눕니다. 각 그룹은 15 쥐.
3. 실험의 개시 전에 마킹 펜을 사용 하 여 그들의 꼬리에 각 그룹에는 마우스를 번호.
4. 5 일 자당 취향 테스트를 사용 하 여 모든 마우스 테스트 (5 단계 참조) 및 오픈 필드 테스트 (6 단계 참조).

3입니다. 마우스에 우울증의 유도

참고: 우울증을 유도, 모델 그룹 및 2 개의 치료 그룹에서 마우스 받았다 CUMS를 21 일¹⁸. 계획은 실제적인 상황에 따라 변경 될 수 있습니다 하지만 같은 스트레스는 지속적으로 사용할 수 없습니다 하는 원칙을 따라야 한다.

1. 21 일 연속¹⁹에 대 한 다음 7 스트레스의 2 매일 쥐를 노출 합니다. 우리의 모델링 계획은 다음과 같이 설계 되었습니다.
   1. 월요일에, 음식 부족 (빈 24 h, 오전 8 시에서 오전 8시 대 한 각 장의 피드)과 물 부족 (제거 24 h, 오전 8 시에서 오전 8시 대 한 각 장의 마시는 병)에 쥐를 노출 합니다.
   2. 화요일에, 구속 스트레스 (3 h, 오전 8 시에서 오전 11시 대 한 작은 플라스틱 욕조에 억제 해 쥐)와 빈 연습장 (11 h, 8:00 ~ 19: 00에 대 한 각 장에 패딩 제거)에 쥐를 노출 합니다.
   3. 수요일에, 노출 우기와 더러운 감 금 소 (물을 부 어 각 장과 24 h, 오전 8 시에서 오전 8시 대 한 젖은 유지)를 쥐 감 금 소 (24 시간, 오전 8시 오전 8시 대 한 장에 5 쥐를 넣어) 혼잡.
   4. 목요일에, 구속 스트레스와 얼음 수영^20,21 (각 5 분 동안 얼음 물으로 투명 유리 수족관에서 수영 하는 마우스 힘)에 쥐를 노출 합니다.
   5. 금요일에, 쥐 젖 고 더러워진 연습장 및 음식 부족을 노출 합니다.
   6. 토요일에, 구속 스트레스와 붐비는 연습장에 쥐를 노출 합니다.
   7. 일요일에, 빈 장과 얼음 수영에 쥐를 노출 합니다.
2. 모델링 (21 일)의 끝까지 매주 코트 상태와 몸 무게를 기록 합니다. 7 다른 신체 부분에서 점수의 합으로 코트의 총 점수를 계산: 머리, 목, 등 쪽 외 투, 복 부 코트, forepaws, 꼬리, 및 뒷 발. 하나의 점수 깔끔한 코트 나타내고 0의 점수는 빗질 코트²²를 나타냅니다.
3. 5 일 자당 기본 테스트를 수행 (5 단계 참조) 및 오픈 필드 테스트 (6 단계 참조) 실험의 끝에.

4입니다. Xiaoyaosan의 관리

참고: Xiaoyaosan의 복용량 (0.25 g/k g/일) 앞에서 설명한⁹로 만족 스러운 효능에 근거 하 여 선정 되었다.

1. 실험 중 증류수를 사용 하 여 Xiaoyaosan 및 부정맥 정지를 준비 하 여 즉시 사용할 수 있는지 확인.
2. 증류수 0.5 mL을 intragastric 관리 모델링 하기 전에 매일 하 여 제어 그룹에 모델 그룹 쥐에 게. 한편, Xiaoyaosan에 게 (0.25 g/k g/일) 또는 부정맥 (2.6 m g/k g/일) 두 처리 그룹에 있는 마우스.

5. 자당 기본 설정 테스트

참고: 아무 물 이나 음식 박탈 시험 전에 적용 되었다. 프로토콜은 이전에 보고 된²³으로 수행 되었다.

1. 첫번째 2 일에 두 병 수돗물으로 가득 쥐를 개별적으로 집.
2. 앞으로 이틀에 1% 자당 해결책으로 두 병 가득 쥐를 제공 합니다.
3. 마지막 날, 줄 쥐 두 병 24 h, 수돗물 및 1% 자당 해결책에 다른. 음주 행동에 쥐의 측면 특혜를 제거 하려면 후 12 h 두 병의 위치를 전환 합니다.
4. 소비 자당 솔루션 수돗물의 양 (mL)을 기록 합니다. 자당 특혜를 다음과 같이 계산: 자당 기본 설정 (%) = 자당 소비/총 액체 소비 × 100%.

6. 오픈 필드 테스트

1. 4 양면 나무 블랙 무광 상자 어렴풋이 조명 하 고 조용한 방에 오픈 필드 테스트를 수행 합니다. 블루 라인으로는 floor 25 동등 사각형으로 나눕니다.
2. 각 마우스의 액세스 이전 5% 알코올로 오픈 필드 상자를 청소 합니다. 그런 다음, 장소 마우스 오픈 필드의 중앙에 부드럽게.
3. 바로 위에 필드, 높은 정의 디지털 카메라 약 200 cm를 일시 중단 하 고 5 분 동안 각 마우스의 동작을 기록 합니다.
4. 비디오 추적 시스템 소프트웨어에 의해 쥐 행동 비디오를 평가 하 고 거리와 센터 영역에 항목의 수를 실행 하는 총의 데이터를 기록.
5. 통계 소프트웨어에 의해 총 거리 이동 센터 영역에 항목의 수의 데이터를 분석 합니다.

결과

참고 결과 박사 Xiu 팡 딩, 그 외 여러분 에 의해 이전에 게시 된는 ¹⁸

데이터는 평균 ± 표준 오차 (SEM) 의미의로 표현 되었다. 일방통행 ANOVA 또는 비-파라 메 트릭 테스트 정상 테스트 및 분산의 동질성에 대 한 테스트에 따라 일반 데이터 사용 되었다. LSD 테스트 그룹 간의 비교를 위해 사용 되었다. 또한, 일반 선형 모형 (GLM)의 반복된 측정 과정 반복된 측정된 데이터에 대 한 단방향 ANOVA 분석에 사용 되었다 (점수 코트와 몸 무게), 차이의 다변량 분석 과정 비교를 채택 했다 각 시간에 그룹 사이 (LSD 방법) 포인트.

CUMS 유발 생쥐의 물리적 상태

토론

이 연구에 사용 된 CUMS 모델 우울증²⁴의 스트레스 품질 모델을 설정 하는 일반적인 방법입니다. 대부분 발현 CUMS의 표시이 모델 방법은 강한 예측 타당성²⁵는 항우울제 약물으로 복원할 수 있습니다. 이 방법으로 동물 만성 예측할 수 없는 스트레스가 많은 자극을 받게 하 고 감소 장소 특혜 컨디셔닝, 장애인된 감정 같은 동작²⁶, anhedonia, 등 주요 우울증의 핵심 증상을 개발 합니다. 여기,이 프로토콜에 Xiaoyaosan 또는 부정맥의 지속적인 사용을 향상 시킬 수; 실험에서 얻은 결과 CUMS 유도 모델 쥐의 우울증 같은 행동 Xiaoyaosan의 개입 효과 증명 하기 위해 긍정적인 통제 약물으로는 부정맥이 이다.

코트의 평가 점수, 오픈 필드와 달리 강제 수영 테스트, 테스트, 또는 참신 억제 테스트, 먹이 인 간에 있는 불경기와 연...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Chinese Herbs	Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces Limited	Company-The	약물은 중국-일본 우호 병원의 한약 준비실에서 추출하고 증류수를 사용하여 Xiaoyaosan의 현탁액을 준비했으며 용량은 0.25g / kg / d였습니다.
플루옥세틴	파테온 프랑스	5545A	증류수를 사용하여 플루옥세틴의 현탁액을 제조하고 투여량은 2.6 mg / kg / d를 사용하였다.
C57BL/6j 마우스	Charles River Company의 Beijing Vital River	SCXK 2011-0004	12주 된 60마리의 건강한 수컷 C57BL/6J 마우스를 Charles River Company의 Beijing Vital River에서 구입했습니다.
마우스 케이지	스타일링 생명 공학	34853016	318× 202&타임스; 135mm
증류수	-		물은 실험을 통해 사용되었습니다.
슈크로오스	시그마	-	상기 슈크로스를 1% 슈크로스 용액을 제조하기 위해 슈크로스 선호도 시험에 사용하였다.
ACS-2EAS 전자 저울	베이징 Hengzhongheng 전자 기술 Co., Ltd.	-	여러 단계에서 마우스의 avoirdupois의 무게를 측정하는 데 사용되었습니다.
나무 검은 광택 상자	-		(40cm x 40cm x 15cm), 파란색 선으로 25 개의 동일한 사각형으로 나뉩니다.
WV-CP470 사진기	파나소닉, 개방		분야 시험의 전체적인 과정을 기록하기를 위해 사용된 일본 HD 디지탈 카메라.
Etho Vision 3.0 Software	Noldus, Wageningen, Holland	-	생쥐의 운동 기능과 감성을 평가하는 데 사용된 비디오 추적 시스템.
SPSS Statistics 21.0 소프트웨어			IBM-SPSS 21.0 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, 일반 데이터는 정규성 검정을 기반으로 한 일원 분산 분석 또는 비모수 검정을 사용했으며, 분산에 대한 동질성 검정을 사용했으며, 그룹 간 비교를 위해 LSD 방법을 채택했습니다.
Graphpad Prism 6.0 소프트웨어	Graphpad Software, Inc.USA-Graphpad		Prism 6.0 소프트웨어는 통계 그래프를 그리는 데 사용되었습니다.