CD4의 격리+ T-세포 및 분석의 순환 T-follicular 도우미 (cTfh) 6 컬러 Flow Cytometry 주변 혈액을 사용 하 여에서 셀 하위 집합

Elliot Byford; Matthew Carr; Lucia Piñon; Matthew J. Ahearne; Simon D. Wagner

doi:10.3791/58431

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방법 논문

CD4의 격리⁺ T-세포 및 분석의 순환 T-follicular 도우미 (cTfh) 6 컬러 Flow Cytometry 주변 혈액을 사용 하 여에서 셀 하위 집합

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DOI:

10.3791/58431

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2019년 1월 7일

Elliot Byford¹ , Matthew Carr¹ , Lucia Piñon² , Matthew J. Ahearne¹ , Simon D. Wagner¹

¹Leicester Cancer Research Centre and Ernest and Helen Scott Haematology Research Institute, University of Leicester, ²MRC Toxicology Unit, University of Leicester

이 논문에서

요약

여기, 분리와 CD4의 특성에 대 한 프로토콜⁺ T-세포 인간 주변 혈액에서 하위 집합 설명. CD4 정화⁺ T-세포 cytometry T follicular 도우미 셀 하위 집합의 비율을 결정 하 여 분석 된다.

초록

탈 T follicular 도우미 (Tfh) 셀 활동은 자기 면역 조건에서 감지 하 고 B-세포 비-Hodgkin의 림프 종에서 림프 노드 microenvironment 분석은 그들의 존재는 임상 결과와 관련. T follicular 도우미 셀 (cTfh), 혈액에 Tfh 셀의 순환 메모리 구획 순환의 하위 집합 또한 질병에서 불안정 하 고 따라서 잠재적인 새로운 예측 생체를 나타냅니다. 주변 혈액 기반 테스트 상대적으로 비 침략 적 이며 간단한 직렬 모니터링 수 있기 때문에 유리 하다. 이 문서는 CD4 격리 하기 위한 방법을 설명 합니다⁺ T-세포, 인간의 혈액과 cytometry cTfh 세포와 그들의 다양 한 하위 집합의 비율을 열거 하 여 추가 분석에서 (cTfhPD-1^{-/ + / 안녕}, cTfh1, 2, 17, cTfh1/17). 이러한 하위 수준 다음 림프 종으로 일반 과목과 환자 사이 비교 되었다. 우리는 방법을 정기적으로 수집한 환자 자료에서 신뢰할 수 있는 결과 얻기 위해 충분히 강력한 발견. 기술 분석에 대 한 설명 셀 정렬 및 RT-PCR 같은 다운스트림 응용 프로그램에 쉽게 적응 될 수 있다.

서론

T-follicular 도우미 셀 (Tfh)는는 CD4⁺ 림프 조직¹에서 처음 특징은 T 세포 부분 집합. 이러한 세포 PD-1, CXCR5 표면 수용 체를 표현 하 고 IL-21 및 IL-4 분 비 녹음 방송 요인, BCL-6²^,³의 핵 식 표시. 그들의 이름에서 알 수 있듯이, 그들은 어린 싹 센터에서 발견 되 고 높은 친 화력 항 체 생산¹에 필수적인.

Dysregulated Tfh 응답 질병 병 인, 특히 자가 면역 질환, 그들은 autoreactive B 세포⁴의 확장을 추진 하는 어디에 연루 되었습니다. 그들은 또한 단단한⁵^,⁶ 의 림프 암⁷종양 microenvironment에서 역할을 재생할. 반대로, Tfh 필수적인 표면 단백질의 유전자 결함 인간 면역 결핍 증후군⁸T-셀 costimulat....