여기, 분리와 CD4의 특성에 대 한 프로토콜+ T-세포 인간 주변 혈액에서 하위 집합 설명. CD4 정화+ T-세포 cytometry T follicular 도우미 셀 하위 집합의 비율을 결정 하 여 분석 된다.
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방법 논문
여기, 분리와 CD4의 특성에 대 한 프로토콜+ T-세포 인간 주변 혈액에서 하위 집합 설명. CD4 정화+ T-세포 cytometry T follicular 도우미 셀 하위 집합의 비율을 결정 하 여 분석 된다.
탈 T follicular 도우미 (Tfh) 셀 활동은 자기 면역 조건에서 감지 하 고 B-세포 비-Hodgkin의 림프 종에서 림프 노드 microenvironment 분석은 그들의 존재는 임상 결과와 관련. T follicular 도우미 셀 (cTfh), 혈액에 Tfh 셀의 순환 메모리 구획 순환의 하위 집합 또한 질병에서 불안정 하 고 따라서 잠재적인 새로운 예측 생체를 나타냅니다. 주변 혈액 기반 테스트 상대적으로 비 침략 적 이며 간단한 직렬 모니터링 수 있기 때문에 유리 하다. 이 문서는 CD4 격리 하기 위한 방법을 설명 합니다+ T-세포, 인간의 혈액과 cytometry cTfh 세포와 그들의 다양 한 하위 집합의 비율을 열거 하 여 추가 분석에서 (cTfhPD-1-/ + / 안녕, cTfh1, 2, 17, cTfh1/17). 이러한 하위 수준 다음 림프 종으로 일반 과목과 환자 사이 비교 되었다. 우리는 방법을 정기적으로 수집한 환자 자료에서 신뢰할 수 있는 결과 얻기 위해 충분히 강력한 발견. 기술 분석에 대 한 설명 셀 정렬 및 RT-PCR 같은 다운스트림 응용 프로그램에 쉽게 적응 될 수 있다.
T-follicular 도우미 셀 (Tfh)는는 CD4+ 림프 조직1에서 처음 특징은 T 세포 부분 집합. 이러한 세포 PD-1, CXCR5 표면 수용 체를 표현 하 고 IL-21 및 IL-4 분 비 녹음 방송 요인, BCL-62,3의 핵 식 표시. 그들의 이름에서 알 수 있듯이, 그들은 어린 싹 센터에서 발견 되 고 높은 친 화력 항 체 생산1에 필수적인.
Dysregulated Tfh 응답 질병 병 인, 특히 자가 면역 질환, 그들은 autoreactive B 세포4의 확장을 추진 하는 어디에 연루 되었습니다. 그들은 또한 단단한5,6 의 림프 암7종양 microenvironment에서 역할을 재생할. 반대로, Tfh 필수적인 표면 단백질의 유전자 결함 인간 면역 결핍 증후군8T-셀 costimulat....
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혈액 샘플은 일반 과목 (NS)에서 가져온 (n = 12) 한계 영역 림프 종 (MZL) 환자 뿐만 아니라 (n = 7) B-세포 비-Hodgkin의 림프 종 (BNHL) (6 층 환자, 2 lymphoplasmacytic 림프 종 환자와 1 학년 B-세포의 비-Hodgkin의 림프 종 하지 않으면 지정 환자). 환자는 후 부여 하는 데, 장소에서 모든 연구에 대 한 윤리적인 승인을 서 면된 동의 레스터 로얄 실에서 혈액학 클리닉에서 채용 했다. 레스터, 노스 햄프셔와 러 틀 랜드 연구 윤리 위원회 1, 06/Q2501/122 환자 샘플 및 건강 연구 기관 (HRA) NRES 위원회 동부 미들 랜드 더비에 대 한 참조에 의해 윤리적인 승인을 얻은, 14/EM/1176에 대 한 참조 일반 과목입니다.
1. 절연 CD4의+ 전체 말 초 혈액에서 T-세포
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높은 CD4+ 순도 c d 4를 사용 하 여 달성 되었다+ 회사에 의해 했다 모든 혈액 샘플에서 신뢰할 수 있는 격리 프로토콜 테스트 (의미: 96.6%, SD: 2.38, n = 31) (그림 3).
CTfh의 식별 (CD4+ CXCR5+ 세포) 대표 정상적인 주제에(그림 4)제공 됩니다. CD4 내의 총 cTfh 세포의 비율+ 세포 했다 29.4%의 중앙값 (간 사분 위 수 범위 (IQR) = 10.8) 12 일반 과목에 걸쳐. 간세포 암 종17,
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이 프로토콜 분석 주변 혈액 cTfh 셀, 지금까지 문학에서 확인 된 모든 관련 하위 집합의 검색을 활성화 하 간단 하 고 효율적인 방법을 나타냅니다. 혈액 샘플 얻어질 수 있다 쉽고 효율적으로 표준 외래 환자 진료소와 직렬 샘플의 일부 임상 데이터와 동시에 수집 될 수 있습니다. 차례 차례로, 질병의 진행 이나 치료에 대 한 생체로 cTfh 하위 집합을 평가 하는 예비 연구 수 있습니다. 이러한 연구는 Tfh dysregulation 면역 등 단단하고 이용 암 특정 유형의 병에 연루는 질병에 특히 보증 될 것 이다. 또한, 질병에 cTfh 함수에서 변경 유일한 세포 표면 마커가이 프로토콜에 사용 되 고 cytometry를 사용 하 여 cTfh 셀을 정렬 하 여 조사 될 수 있습니다. MZL 환자에서 cTfh 셀 정렬 식 프로필 정상적인 과목21에 비교 될 때 유전자의 차이 찾을 수 사용할 수 있습니다.
우리는 효율적인 발견 CD4
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저자는 공개 없다.
작업 전송 블록 끝을 MJA 백혈병 영국에서에서 교부 금에 의해 지원 되었다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| RosetteSep Human CD4+ T 세포 농축 칵테일 | STEMCELL TECHNOLOGIES | 15062 | |
| Ficoll-Paque PLUS | GE Healthcare Life Sciences | 17144003 | |
| BUV395 Mouse Anti-Human CD183 클론 1C6/CXCR3 | BD 호라이즌 | 565223 | |
| BV711 마우스 안티 휴먼 CD196 (CCR6) 클론 11A9 | BD 호라이즌 | 563923 | |
| BV421 쥐 안티 휴먼 CXCR5 (CD185) 복제 RF8B2 | BD Horizon | 562747 | |
| BB515 마우스 안티-휴먼 CD4 복제 RPA-T4 | BD 호라이즌 | 564419 | |
| PE 마우스 안티-휴먼 CD279 클론 MIH4 | BD Pharmingen | 557946 | |
| APC-H7 마우스 Anti-Human CD45RA 클론 HI100 | BD Pharmingen | 560674 | |
| LIVE/DEAD 고정 가능한 원적외 데드 셀 염색 키트, 633 또는 635nm 여기용 | ThermoFisher Scientific | L34973 | |
| Brilliant Stain Buffer | BD Horizon | 563794 | |
| Anti-Mouse Ig, κ/Negative Control Compensation Particles Set | BD CompBead | 552843 | |
| FACS Aria II 유세포 분석기 | BD 생명과학 | 644832 | |
| FACSDiva 6.1.3 | BD Biosciences | 643629 | 유세포분석기 수집 소프트웨어 |
| FlowJo 10.2 | Treestar Inc. | 유세포 분석 데이터 분석 소프트웨어 | |
| Anti-CXCR3 항체 | BD Horizon | ||
| Anti-CCR6 항체 | BD Horizon | ||
| Anti-CXCR5 항체 | BD Horizon | ||
| 항-CD4 항체 | BD Horizon | ||
| 항-PD-1 항체 | BD Pharmingen | ||
| Anti-CD45RA 항체 | BD Pharmingen | ||
| 생존 마커 | ThermoFisher Scientific | L34973 |
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