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방법 논문

리니지 Reprogramming 성인 마우스 구와 Erythroid 창시자에의 직접

6.1K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/58464

⸱

2018년 12월 14일

 ,  ,  ,  , 
1Department of Molecular Medicine and Gene Therapy, Lund University

이 논문에서

요약

생산 유발에 대 한 우리의 프로토콜 여기 제시 erythroid 창시자 (Iep) 성인 섬유 아 세포 전사 인자 제어를 사용 하 여 마우스에서에서 직접 혈통 프로그래밍 (DLR).

초록

Erythroid 셀 헌신 및 분화 세포 운명 결정 및 성숙 요인의 그룹에 의해 조율 된 혈통 제한 transcriptional 네트워크의 활성화를 통해 진행 됩니다. 우리는 직접 혈통 유도 erythroid 창시자/선구자 (Iep)으로 섬유 아 세포의 프로그래밍을 사용 하 여 적혈구 개발 지시에 필요한 요인의 최소 집합을 정의 하려면 이전 밖으로 설정. 우리 보여 그 overexpression Gata1의 Tal1, Lmo2및 c-Myc (GTLM) 수 변환 murine와 인간의 섬유 아 세포 직접 Iep 유사한 형태학, 측면에서 보 나 fide erythroid 셀을 빠르게 표현 형, 그리고 유전자 발현입니다. 우리는 Iep 적혈구와 세포 운명 조절 연구에 귀중 한 도구를 제공할 것입니다 것입니다. 여기는 Iep 통해 전사 요소 기반 직접 혈통 (DLR) 프로그래밍 murine 꼬리 팁 fibroblasts 변환의 단계적 과정에 설명 합니다. 이 예제에서 erythroid 셀의 시각화 수 있도록 리스로 수용 체 유전자 (EpoR) 발기인의 통제 노란 형광 성 단백질 (YFP)을 나타내는 erythroid 계보 추적 마우스에서 fibroblasts에 프로그래밍 수행 프로그래밍에 따라 운명 감 응 작용입니다. 이 프로토콜에 따라 5 ~ 8 일 이내 fibroblasts Iep에 재설정 수 있습니다.

개선 과정에 아직도 할 수 있다, 우리 표시 프로그래밍 GTLM 중재 하는 것이 신속 하 고 직접적인 프로세스는 저조한 진실 fide 의 속성을 가진 셀 erythroid 조상 및 선구자 세포.

서론

적혈구 (Rbc)는 모든 척추 동물에 필수적인 고 인체1의 모든 셀의 84%. 성인 생활에 배아에서 우리의 건강 높은 RBC 항상성의 정확한 규칙에 따라 달라 집니다. 성인으로 개발에 걸쳐 성숙한 RBCs의 지속적인 생산 적혈구로 알려져 있다. 적혈구 연구의 주요 과제 RBC 개발 및 원시적이 고 확실 한 적혈구 사이 스위치 조정 마스터 레 귤 레이 터를 정의 하는 것입니다. 직접 혈통 erythroid 창시자의 프로그래밍 erythroid 개발 비보를 더욱 이해 하는 기회를 선물 한다.

직접 혈통 프로그래밍 (DLR), transdifferentiation, 일컬어 프로그래밍 한 셀 형식을 직접으로, 만능 multipotent 조상 단계를 우회 하는 프로세스입니다. DLR은 지금까지 신경2조 혈3,,45, 간장6 , 신7, 조상 세포를 포함 하 여 수많은 셀 유형을 일으킬 사용 되었습니다. 발달 생물학에 대 한 DLR 혈통 헌신과 터미널 차별화 프로세스8,9의 질의 측면에 대 한 중요 한 도구가 되고있다. DLR 보완 하 고 vivo에서 연구 개발 하는 동안 요소를 결정 하는 세포 운명의 이해 메커니즘에 대 한 부분적으로 대체할 수 있습니다. 이 문서에서 설명 하는 erythroid 창시자에 프로그래밍에 대 한 DLR 프로토콜 필드에 게 적혈구의 개발 연구에 대 한 무료 방법의 제공 한다.

우리는 이전 4-팩터 칵테일의 overexpression, GATA1, TAL1, LMO2, 및 c-MYC (GTLM), erythroid 유도 창시자에 직접 murine와 인간의 섬유 아 세포를 재 설 정할 충분 한지 증명 하고있다 (Iep) 10. erythroid는 GTLM 재설정 셀 크게 닮은 형태, 표현 형, 그리고 유전자 식10면에서 보 나 타고 난 기본 erythroid 창시자. 따라서 Iep 확산 수 용량을 제한 하 고 뚜렷이 확실 한 적혈구의 발병 하기 전에 초기 배아에서 생산 된 것과 유사한 nucleated 적혈구 성숙. 재활 조건 (예를 들어, 요소 또는 다른 요소의 추가 프로그래밍에서 점 돌연변이)에서 변경 하 여, 하나는이 erythroid 개발 및 차별화에 변화를 리드 하는 방법을 이해할 수 있다. 우리는 예를 표시 GTLM 칵테일에 Klf1 또는 Myb 의 추가 주로 배아 (기본)에서 globin 식 패턴 변경 주로 성인 (최종). 이 이는 적혈구에 발달 요소를 정의 하기 위한 도구로 DLR을 사용 하 여 유효성을 뒷받침.

여기, 우리 iEPs를 마우스 꼬리 팁 섬유 아 세포 (TTF)에서 생성 하는 과정을 설명 합니다. 우리의 대표 결과에 우리 erythroid 리니지 추적 마우스에서 fibroblasts에 프로그래밍을 수행 (Epor-Cre R26-eYFP) 세포는 모든 Rosa26 소재 시에서 노란 형광 성 단백질 (eYFP)를 표현 erythroid 계보에 헌신의 쉽게 시각화 수 있도록 리스로 수용 체를 표현 했다. 이 메서드를 사용 하 여 셀 (EpoR +) YFP 긍정적인 존재 하는 변환 후 5 일입니다. 이 프로토콜을 따라서, erythroid 창시자에서 생체 외에서의 세대에 대 한 신속 하 고 강력한 기술을 제공합니다.

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프로토콜

1. 설립 및 기본 마우스 꼬리의 유지 보수 팁 섬유 문화

  1. 0.1% 젤라틴으로 표면을 커버 하 고 37 ° c.에서 약 20 분 동안 요리를 배양 하 여 젤라틴 코팅 요리 (한 꼬리 10 cm 접시 추천)를 준비 접시에서 젤라틴 솔루션을 발음 하 고 적어도 2 시간 동안 건조 하 있습니다.
  2. 자 궁 경부 전위에 의해 쥐를 안락사. 꼬리의 기지에서 절단가 위 꼬리를 제거 합니다. 사용할 준비가 될 때까지 2% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 Dulbecco의 인산 염 버퍼 식 염 수 (DPBS)에서 꼬리를 넣어.
    참고: 최상의 결과 얻으려면 꼬리 취해야 한다 쥐에서 나이의 약 6 ~ 8 주. 그러나 꼬리는 쥐 쥐 나이는 섬유 아 세포의 확산 능력과 감소11프로그래밍의 효율성으로 나이,,의 8 주 이상에서 가져올 수 있습니다.
  3. 무 균 조건 하에서 조직 문화 후드에이 프로토콜의 모든 이후 단계를 수행 합니다. 0.02 %DPBS 트립 신-EDTA의 희석된 trypsin 솔루션을 준비 하 고 코팅된 10 cm 접시에 5 mL을 추가.
  4. 70% 에탄올, 다음 DPBS 먼저 꼬리를 씻어. 한 접시에는 꼬리를 평면 놓고 집게를 사용 하 여 제자리에. 끝에 기지에서 세로 축 따라 꼬리에 절 개를 확인 합니다.
  5. 한 쌍의 집게와 꼬리를 잡고를 수직으로 잡고. 집게의 두 번째 쌍을 사용 하 여, 꼬리의 기지에 절 개 옆에 피부를 다시 껍질. 이렇게 절 개의 양쪽에는 꼬리의 끝을 향해 아래쪽으로 당겨 피부를 벗 수 때까지.
  6. 벗 겨 꼬리 집게와 트립 신 솔루션이 포함 된 요리 위에 고 약 1 cm 긴 조각으로 꼬리를 잘라. 트립 신 솔루션에서 꼬리 조각으로 더 작은 조각으로 조각 조각에 위를 사용 합니다. 10 분 동안 37 ° C에서 trypsin 용액에 꼬리 조각 품 어.
    참고: 작은 조각 각 볼륨 비율 높은 표면적을 제공 하기 위해 선호 됩니다.
  7. 구와 확장 (FEX) 매체의 2 개를 사용 하 여 트립 신을 끄다 (높은 포도 당 Dulbecco 수정이 글 중간 (DMEM) 15 %FBS, 2 mM L-글루타민, 비 필수 아미노산 (NEAA) 및 100 U/mL 페니실린/스).
  8. 50 mL 튜브와 4 ° c.에서 5 분 동안 350 × g 에서 원심 분리기로 접시의 전체 내용을 수집합니다 상쾌한 발음 하 고 신선한 FEX 매체의 10 mL에 꼬리 조각 resuspend.
  9. 젤라틴 코팅 접시 중간에 꼬리 조각 전송 및 5% CO2 와 4% O2를 2 일 마다 신선한 FEX 매체 추가에서 37 ° C에서 품 어.
    참고: 5 ~ 7 일 후, 꼬리 조각 연결 된 접시의 바닥에 그리고 그들을 멀어 섬유 아 세포를 볼 수 있습니다.
  10. 섬유 아 세포의 송이 발견, 일단 부드럽게 꼬리 조각 꺼내와 발음 매체와 접시에 부착 된 섬유 아 세포를 떠나는 모든 뼈 조각이 접시를 흔들. 새로운 FEX 매체를 추가 하 고 합칠 때까지 섬유 아 세포 문화.
  11. 을 보장 하기 위해 조 혈 창시자에 의해 섬유 아 세포의 오염 없이 5 분에 대 한 1 x 트립 신-EDTA를 사용 하 여 접시에서 세포를 분리 하 고 세포를 수집 합니다. 조 혈 마커를 표현 하는 셀에 대 한 고갈 (CD117, CD5, CD45R (B220), CD11b, 안티-Gr-1 (Ly-6 G/C), 7-4, 그리고 Ter-119) 자기 분리 시스템10를 사용 하 여.

2. 레트로 바이러스 생산

  1. 약 2.5 × 104 셀/cm2 (2.0 × 106 셀 10 cm 요리에 대 한) 10%로 높은 포도 당 DMEM에서 하룻밤 문화와 조직 문화-(에 의해 처리 진공 가스 플라즈마) 접시에 retroviral 포장 셀 씨 FBS, 10mm 나트륨 Pyruvate, 고 37 ° C, 5% CO2100 U/mL 페니실린/스.
  2. 다음 아침에 변경 매체 DMEM 절반 볼륨 하룻밤 배양 하는 데 사용 (5 mL 10 cm 요리에 대 한)를 사용 하 여 아무 첨가물. 오후에 확인 세포는 70-80% 합칠은 transfection를 시작 합니다.
  3. 각 재활 요소 Gata1, Tal1, Lmo2및 c-Myc, 표정 벡터 (pMX) 및 도우미 벡터 (개 그 및 pol 유전자 포함)의 2:1 혼합물 준비. 섬유 아 세포의 10 cm 접시, 표정 벡터의 6 µ g과 DMEM 매체에서 100 µ L의 최종 볼륨에 도우미 벡터의 3 µ g를 사용 하 여.
  4. 각 재활 요소에 대 한 살 균 폴리스 티 렌 튜브에서 실 온 (RT) DMEM의 300 µ L를 준비 하 고 신중 하 게 상업 transfection 시 약의 27 µ L를 추가 합니다.
    참고: transfection 시 약 사용 하기 전에 rt 가져와야 한다 하 고 화합물의 정전기 속성 튜브의 플라스틱 벽에 붙어 그것을 만들 수 있는 매체에 직접 추가 해야 합니다.
  5. Transfection 시 약 포함 된 튜브, 짧게 소용돌이에 플라스 미드 혼합을 추가 하 고 실시간 짧게 소용돌이 혼합물에 15 분 동안 transfection 시 DNA 혼합물을 품 어 dropwise retroviral 포장 셀에 추가 되도록 transfection는 시 약-DNA 혼합 문화에 걸쳐 균등 하 게 되 고 37 ° C에서 밤새 품 어.
  6. transfection, 후 24 h 20 %DMEM 매체 변경 FBS 및 100 U/mL 페니실린/스. transfection, 후 48 h는 상쾌한을 수집 하 고 0.22 μ m 기 공 크기 주사기 필터를 통해 필터링.
    참고: 바이러스 supernatants-80 ° c 냉동 고 변환 신선한 바이러스 상쾌한 사용 하는 경우 더 효율적 이지만, 필요할 때까지 보관 될 수 있습니다.

3. GTLM 변환 및 iEP 수확

  1. 꼬리 팁 1 × 104 셀/c m2 에서 fibroblasts에 0.1% 젤라틴 미리 코팅 종자 FEX 매체에서 요리를 하 고 24 h에 대 한 37 ° C에서 품 어.
  2. 다음 날는 다음과 같이 변환 혼합물을 준비 하 고.
    1. 6 양의 FEX 매체 (60%)에 각 재활 요소 retroviral 감염 시 약 (40%)의 4 µ g/mL와 보완에 대 한 바이러스 성 상쾌한의 1 볼륨을 추가 합니다.
    2. 섬유 아 세포의 10 cm 요리에 대 한 각 바이러스 상쾌한의 1 mL를 추가 (4 × 바이러스 = 4 mL) 10 mL 변환 혼합물의 총 주는 4 µ g/mL FEX 매체의 6 mL를 retroviral 감염 시 약의 보충.
  3. 구와 문화에서 FEX 매체를 발음 하 고 변환 혼합 합니다. Hypoxic 조건 (5% CO2 와 4% O2)에서 37 ° C에서 4 h에 대 한 변환 품 어.
  4. 변환 혼합물을 발음 하 고 신선한 재활 매체 (혈 청 무료 확장 매체 (SFEM), 100 U/mLPenicillin/스, 100 ng/mL murine 줄기 세포 요소 (mSCF), 10 ng/mL murine 인터 루 킨-3 (IL3), 2 U/mL 인간 재조합 리스로 (hrEPO), 그리고 100 nM Dexamethasone).
  5. 8 daysat hypoxic 조건, 추가 신선한 재활 매체 2 일 마다에서 37 ° C에 품 어. 5 ~ 8 일 후 성공적인 프로그래밍 하는 것은 접시에서 분리 된 셀 클러스터 얻을 것입니다.
  6. 수집 분석에 대 한 재설정된 셀, 부드럽게 플라스틱 아래로 접시에서 직접 그들을 수확. 비교를 위해 untransduced fibroblasts 수확, 1 x 트립 신-EDTA를 사용 하 여 접시에서 세포를 분리 하 고 수집 합니다.

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결과

여기 성인 섬유 아 세포 전사 인자 기반 DLR을 사용 하 여에서 Iep의 생산을 위한 재현 가능한 프로토콜 선물이. 우리 셀 프로그래밍 cytometry, 식민지 형성 분석 실험, 및 유전자를 사용 하 여 평가 식 분석. Erythroid 셀 운명에 변환의 시각화에 지원 하기 위해 우리는 erythroid 리니지 추적 마우스에서 fibroblasts에 프로그래밍 수행 (Epor-Cre R26-eYFP)는 노란 형광 성 단백질 (eYFP) 표현 리스로 수용 체 (Epor, Cre 생 Epor 로커 스의 1 개의 대립 유전자에 기 절)를 표현 하는 모든 셀에 Rosa26 소재 시에서 그들의 개발12,13 ( 의 모든 단계에서 성적 그림 1

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토론

4 단계 칵테일의 overexpression, GATA1, TAL1, LMO2 및 c-MYC (GTLM), Iep10에 직접 murine와 인간의 섬유 아 세포를 재 설 정할 충분 하다. 재설정된 erythroid 세포는 크게 진실 fide erythroid 창시자를 형태, 표현 형, 유전자 발현, 그리고 식민지를 형성 하는 능력을 닮았다. 이 조에 발달 요소를 정의 하기 위한 도구로 서 직접 프로그래밍을 사용 하 여 근거를 뒷받침. 이 방법의 유효성을 지원 하기 위해 Iep 또한 생성할 수 있습니다 마우스 미 발달 섬유 아 세포 및 다른 근원의 및 종10에서 fibroblasts에 대 한 작품을 보여주는 인간 포 피 섬유 아 세포의 GTLM ...

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공개 사항

저자 보고 관심의 없습니다 충돌 있다.

감사의 글

우리 감사에 블 린 왕와 그레고리 하이드 (화이트 헤드 연구소, 케임브리지, MA) 복제와 하 비 Lodish (화이트 헤드 연구소)에 대 한 많은 retroviral 라이브러리를 생성 하는 데 사용 하는 플라스 미드의 제공. 우리 iEP 생산의 설명에서 그들의 역할에 대 한 더 Siva와 소피 Singbrant (학과 분자 의학 및 유전자 치료, 룬 드 대학), 예란 Karlsson Shamit Soneji (학과 분자 혈액학, 룬 드 대학) 감사합니다. 우리 또한 인정 하 고 율리우스 Pulecio (재생 의학 센터, 바르셀로나 메디컬 리서치 파크), 비 올레 타 레이 온 스 트 라 다 (록펠러 대학교, 뉴욕), 칼 Walkley 감사 하 고 싶습니다 (세인트 빈센트의 연구소의 의학 연구와 학과 의학, 세인트 빈센트 병원, 멜버른 대학), 앙 헬 라 야 (연구 및 첨단된 연구, 바르셀로나에 대 한 카탈로니아어 기관), 그리고 비제이 G. Sankaran (광범위 한 기술 및 하버드, 캠브리지, 매사 추세 츠 연구소의 연구원 )이이 작품에 그들의 이전 기여 금을 위해. 이 작품 (J.F.);에 라 그 나 Söderberg 재단에 의해 지원 되었다 스웨덴 연구 위원회 (J.F.);에 Stiftelsen 올레 Engkvist Byggmästare (J.F.);에 전략적 연구 (J.F.);에 대 한 스웨덴 재단 (J.F.);를 아 Wiberg의 기초 (J.F.)에 마리 퀴리 통합 그랜트.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
피루브산 나트륨이 없는 DMEMGE Life SciencesSH30022.01PhGP 세포를 위한 배양 배지
피루브산 나트륨을 사용한 DMEMGE Life SciencesSH30243.01꼬리 끝 섬유아세포를 위한 배양 배지
StemSpan Serum Free Expansion Media (SFEM)Stem Cell Technologies9650재프로그래밍 배지 
소 태아 혈청 HyCloneGE Life SciencesSH30071.03HI성장 인자
페니실린/스트렙토마이신 HyClone (100x)GE Life SciencesSV30010Antiboiotic
Non-Essential Amino Acids (100x)Thermo Fisher11140050SNL 배지에는 이
Trypsin HyClone (1x)GE Life SciencesSH30042.01Cell dissociation agent
쥐 줄기세포 인자 (mSCF)Peprotech250-03재프로그래밍 매체에 추가
재조합 쥐 Il-3Peprotech213-13재프로그래밍 매체에 추가
인간 재조합 에리트로포이에틴 (hrEPO)Peprotech100-64재프로그래밍 매체에 추가
DexamethasoneSigma50-02-2   재프로그래밍 미디어에 추가됨
돼지 껍질에서 추출한 젤라틴시그마9000-70-8 dH2O에서 dissovled 및 코팅 플레이트에 사용됩니다. 사용하기 전에 멸균 상태를 확인하십시오.
Blasticidin S 염산염시그마3/9/3513선택 항생제. 전핵 세포와 진핵 세포 모두에 영향을 미칩니다
. Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS)Ge Life SciencesSH30850.03세척 단계에 사용됩니다
PolybreneMerckTR-1003-G감염 / 트랜스펙션  시약
FuGENE HD 형질주입 시약PromegaE2311PhGP 세포주용 형질주입 시약
Millex-GP 주사기 필터 장치 0.22 &마이크로; mMerckSLGP033RS바이러스 상등액 필터링에 사용
BD 에메랄드 피하 주사기Becton DickinsonSKU: 307736바이러스 상등액 필터링에 사용
100mm 배양 접시코닝430167세포 배양
6웰 플레이트팔콘10799541세포 배
양 보석상 집게 #5Sklar66-7642사용 대상 작은 꼬리 조각 처리
Sklarlite Iris ScissorsSklar23-1149꼬리를 작은 조각으로 자르는 데 사용
Lineage Cell Depletion Kit, 마우스Miltenyi Biotec130-090-858섬유아세포 배양에서 조혈 세포 고갈용
CD117 MicroBeads, 마우스Miltenyi Biotec130-091-224섬유아세포 배양
에서 조혈 세포 고갈용PheonixGP 세포ATCCCRL-3215레트로바이러스 패키징 세포주
EcoPAC 벡터(pCL-Eco) Novus BiologicalsNBP2-29540레트로바이러스 도우미 벡터는 gag 및 pol 유전자를 포함하고 있습니다.
pMX-Gata1복제된 실험실
pMX-Tal1복제된
복제된 실험실
pMX-cMyc복제된 실험실
CellSens Standard 1.6 소프트웨어 사이토스핀(Cytospin) 분석 소프트웨어
가 공급됩니다.됨 됨 . 내 pMX-Lmo2 내내

참고문헌

  1. Sender, R., Fuchs, S., Milo, R. Are We Really Vastly Outnumbered? Revisiting the Ratio of Bacterial to Host Cells in Humans. Cell. 164 (3), 337-340 (2016).
  2. Lujan, E., Chanda, S., Ahlenius, H., Sudhof, T. C., Wernig, M. Direct conversion of mouse fibroblasts to self-renewing, tripotent neural precursor cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (7), 2527-2532 (2012).
  3. Szabo, E., et al. Direct conversion of human fibroblasts to multilineage blood progenitors. Nature. 468 (7323), 521-526 (2010).
  4. Pereira, C. F., et al. Induction of a hemogenic program in mouse fibroblasts. Cell Stem Cell. 13 (2), 205-218 (2013).
  5. Batta, K., Florkowska, M., Kouskoff, V., Lacaud, G. Direct reprogramming of murine fibroblasts to hematopoietic progenitor cells. Cell Reports. 9 (5), 1871-1884 (2014).
  6. Yu, B., et al. Reprogramming fibroblasts into bipotential hepatic stem cells by defined factors. Cell Stem Cell. 13 (3), 328-340 (2013).
  7. Hendry, C. E., et al. Direct transcriptional reprogramming of adult cells to embryonic nephron progenitors. Journal of the American Society of Nephrology. 24 (9), 1424-1434 (2013).
  8. Vierbuchen, T., Wernig, M. Direct lineage conversions: unnatural but useful. Nature Biotechnology. 29 (10), 892-907 (2011).
  9. Capellera-Garcia, S., Flygare, J. Direct lineage reprogramming: a useful addition to the blood cell research toolbox. Expert Review of Hematology. 10 (2), 107-109 (2017).
  10. Capellera-Garcia, S., et al. Defining the Minimal Factors Required for Erythropoiesis through Direct Lineage Conversion. Cell Reports. 15 (11), 2550-2562 (2016).
  11. Mahmoudi, S., Brunet, A. Aging and reprogramming: a two-way street. Current Opinions in Cellular Biology. 24 (6), 744-756 (2012).
  12. Singbrant, S., et al. Erythropoietin couples erythropoiesis, B-lymphopoiesis, and bone homeostasis within the bone marrow microenvironment. Blood. 117 (21), 5631-5642 (2011).
  13. Heinrich, A. C., Pelanda, R., Klingmuller, U. A mouse model for visualization and conditional mutations in the erythroid lineage. Blood. 104 (3), 659-666 (2004).
  14. Gautier, E. L., et al. Gene-expression profiles and transcriptional regulatory pathways that underlie the identity and diversity of mouse tissue macrophages. Nature Immunology. 13 (11), 1118-1128 (2012).
  15. Psaila, B., et al. Single-cell profiling of human megakaryocyte-erythroid progenitors identifies distinct megakaryocyte and erythroid differentiation pathways. Genome Biology. 17 (1), 83(2016).
  16. Pulecio, J., et al. Direct Conversion of Fibroblasts to Megakaryocyte Progenitors. Cell Reports. 17 (3), 671-683 (2016).
  17. Kurita, R., et al. Establishment of immortalized human erythroid progenitor cell lines able to produce enucleated red blood cells. PLoS One. 8 (3), 59890(2013).

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