급성 척수 조각 Substantia Gelatinosa 신경에 있는 전체 셀 패치 클램프 기록에 대 한 준비

Substantia gelatinosa (SG, lamina 척추 등 경적의 II) 전송 하 고 규제 하는 감각 정보에 대 한 논의 여지가 없 중요 한 릴레이 센터 이다. 그것은 기본 구심 섬유, 지역 수 및 생 내림차순 억제 시스템¹에서 입력을 받아 흥분 성의 억제 수 구성 됩니다. 최근 수십 년간, 급성 척수 조각 준비의 개발 및 전체 셀 패치 클램프 기록의 출현 설정한 SG 뉴런^2, 의 본질적인 electrophysiological 및 형태학 속성에 대 한 다양 한 연구 ^{3 , 4} 뿐만 아니라 SG^5,6에 로컬 회로의 연구. 또한, 생체 외에서 척수 조각 준비를 사용 하 여 연구원 신경 excitabilities^7,8에 변화를 해석할 수 있는, 이온의 기능^9,10, 채널 및 시 냅 스 활동^11,12 다양 한 병 적인 조건 하에서. 이러한 연구 개발에 재생 SG 신경 역할에 대 한 우리의 이해 및 만성 통증과 neuropathic 가려움증의 유지 보수 깊 어 있다.

기본적으로, 이상적인 전체 셀 패치 급성 척수 조각을 사용 하 여 신경 소마의 명확한 시각화를 달성 하기 위해 핵심 필수 건강 하 고 패치되지 뉴런 얻어질 수 있다 조각의 우수한 품질을 보장 하기 위해입니다. 그러나, 척수 조각 준비 복 부 laminectomy 수행 하 고 건강 한 조각을 얻기에 장애물이 될 수 피아-거미 집 모양의 막 제거 등의 여러 단계가 포함 됩니다. 그것은 척수 조각 준비 하기 쉬운, 척수 조각에 녹음에서 시험관에서 수행는 여러 가지 장점이 있습니다. 셀 문화 준비에 비해, 척수 조각 순수 관련 조건에는 고유한 시 냅 스 연결을 부분적으로 보존할 수 있습니다. 또한, 전체 셀 패치 클램프 척수 조각을 사용 하 여 녹음 더블 패치 클램프^13,14, 형태학 연구^15,16 단일 셀 RT-PCR 등의 다른 방법을 결합 될 수 있는 ¹⁷. 따라서,이 특정 지역 내에서 해 부와 유전 다양성을 특성화에 더 많은 정보를 제공 합니다 기술과 지역 회로의 구성의 조사에 대 한 수 있습니다.

여기, 우리는 급성 척수 조각을 준비 하 고 전체 셀 패치 클램프 기록 SG 뉴런에서 인수에 대 한 우리의 방법의 기본과 상세한 설명을 제공 합니다.

모든 실험 프로토콜 설명 동물 윤리 위원회의 남 창 대학 (난창, 홍보 중국, 윤리적인 No.2017-010)에 의해 승인 되었다. 모든 노력이 스트레스와 실험 동물의 고통을 최소화 하기 위해 만들어졌다. 여기 수행 electrophysiological 녹음 실 온 (RT, 22-25 ° C)에서 실행 되었다.

1입니다. 동물

1. 어느 섹스의 Sprague-Dawley 쥐 (3-5 주 이전)을 사용 합니다. 12 h 빛 어두운 주기에서 동물을 집 고 그들에 게 충분 한 음식 및 물 광고 libitum 액세스.

2입니다. 솔루션 및 자료 준비

1. 솔루션
   1. 준비 하는 인공 뇌 척추 액체 (실제) (mM): 117 NaCl, 3.6 KCl, 1.2 NaH₂포₄·2H₂O, 2.5 CaCl₂·2H₂O, 1.2 MgCl₂·6H₂O, 25 NaHCO₃, 11 D-포도 당, 0.4 ascorbic 산 및 2 나트륨 pyruvate입니다. 표 1을 참조 하십시오.
   2. 자당-실제 (mM)에서 준비: 240 자당, 2.5 KCl, 1.25 NaH₂포₄·2H₂O, 0.5 CaCl₂·2H₂O, 3.5 MgCl₂·6H₂O, 25 NaHCO₃, 0.4 Ascorbic 산 그리고 2 나트륨 pyruvate. 표 2를 참조 하십시오.
   3. K⁺준비-기반 (mM)에 세포내 솔루션: 130 K-구 루 콘, 5 KCl, 10 나₂-phosphocreatine, 0.5 EGTA, 10 HEPES, 4 Mg-ATP, 그리고 0.3 Li-GTP. 표 3을 참조 하십시오.
   4. Cs⁺준비-기반 (mM)에 세포내 솔루션: 92 CsMeSO₄, 43 CsCl, 10 나₂-phosphocreatine, 5 tetraethylammonium (차)-Cl, 0.5 EGTA, 10 HEPES, 4 Mg-ATP, 그리고 0.3 Li-GTP. 표 4를 참조 하십시오.
      참고: 모든 솔루션이 준비 되어야 한다 증류수를 사용 하 여. 실제 및 자당 실제 약 7.4의 최적의 pH를 유지 하기 위해 사용 하기 전에 carbogenated (95% O₂ , 5% CO₂ 혼합물) 이어야 하며이 두 솔루션의 osmolality 300-310 mOsm을 조정 한다. 아 스 코르 빈 산 칼슘 채널에 영향을 미칠 수, 때문에이 에이전트 하나 칼슘 전류를 기록 하려는 경우 생략 해야 합니다. Osmolality 및 세포내 솔루션의 pH 측정와 각각 290-300 mOsm을 7.2-7.3 조정 있어야 합니다. 세포내 솔루션 0.2 µ m 필터 필터링-20 ° c.에 1 mL aliquots로 솔루션을 저장 하는 것이 좋습니다. Cs⁺ 및 차 Cs⁺에 적용 됩니다-기반 블록 칼륨 채널 사용 하 여 앰프는 막 잠재력에 도움이 되는 세포내 솔루션 0에서 꾸준한 mV 금지 postsynaptic 전류 (Ipsc)를 기록할 때.
   5. 0.05% neurobiotin 488 솔루션을 준비 합니다. K⁺의 neurobiotin 488에서 4 mL의 2 밀리 그램을 분해-세포내 솔루션을 기반으로 하 고 필요한 경우 증류수 또는 자당을 사용 하 여 290-300 mOsm osmolality 조정.
      참고: 자당의 1 m m 1 mOsm osmolarity를 증가합니다.
   6. 척수에 대 한 블록으로 3 %agar 준비 합니다. 순화 된 물 유리 비 커에서 250 mL에 한 천의 7.5 g을 녹이 고 하 고 끓는 때까지 열 전자 레인지를 사용 하 여. 솔루션의 소용돌이는 17.5 c m x 10.5 c m x 1.8 cm 플라스틱 상자 응고 후에 혼합물을 부 어. 4 ° C에서는 한 계속 사용 하기 전에.
   7. Immunohistochemical 처리에 대 한 4 %paraformaldehyde (PFA)를 준비 합니다. ~ 800 ml의 PFA 가루 믹스 40 g (약 60 ° C)가 열 PBS 솔루션 (130 m m NaCl, 7 m m 나₂HPO₄, 3mm NaH₂포₄) x 1. 천천히 PFA 분말 완전히 해산 될 때까지 1 N NaOH 방울을 추가 하 여 pH를 조정 합니다. 솔루션 취소 되고있다, 일단 1 x PBS 가진 1 l 총 볼륨을 조정 합니다. PH 7.2-7.4 1 N HCl 필요할 때, 그리고 4 %PFA 솔루션 필터링 사용까지-20 ° C에서 그것을 저장을 사용 하 여를 재조정합니다
      참고: PFA 이므로 독성, 마스크, 장갑 뿐만 아니라 안전 안경을 착용 하는 데 필요한. 4%를 준비 하는 과정을 수행 PFA 통풍된 후드 내부. PFA 분말 약 9-10의 pH에 완전히 해산 될 수 있다.
2. 악기
   1. 전형적인 electrophysiological 시스템 사용 적외선 차동 간섭 콘트라스트 (IR-DIC)와 고해상도 물 침수 목표, CCD/CMOS 카메라, 패치 클램프 증폭기, micropipette 홀더 장착 된 수직 현미경 및 micromanipulator 피펫은 위치의 미세 조정 허용입니다. XY 스테이지 또한 현미경을 이동 하려면 필요 합니다.
   2. 패러데이 케이지로 둘러싸인 진동 절연 테이블에 모든 장비를 탑재 합니다. 신경 세포를 관찰 하 고 시각화는 micropipettes를 비디오 카메라에 비디오 모니터를 연결 합니다.
3. Micropipettes
   1. 기록 전극 micropipette 끌어당기는 사람을 사용 하 여 붕 규 산 유리 모 세관에서 확인 합니다. 3-6 m ω 세포내 솔루션으로 채워질 때 전형적인 피 펫 저항 범위.
4. 한 블록
   1. 1.2 cm x 1.5 cm x 2.0 c m 한 블록을 준비 합니다. 필요에 따라 그림 1 에 표시 된 모양으로 블록을 잘라.

3. 급성 척수 슬라이스 준비

참고: 가로 또는 parasagittal 척수 조각 준비 이전 설명된^18,,1920.

1. Transcardial 관류 및 척수 추출, 이전 ~ 500 mL 자당-실제 equilibrated 95% O₂ , 5% CO₂ 를 준비 하 고 얼음을 솔루션을 냉각 (0 ~ 4 ° C).
2. 모든 해 부 도구 (예를 들어, 가 위, 아이리스가 위, 이빨된 집게, 집게를 잘, 곡선된 겸 자 해 부) 얼음에 식혀. 급성 척수 조각 준비의 다이어그램은 그림 1에 표시 됩니다.
3. Transcardial 관류
   1. 우 레 탄 (1.5 g/kg)의 단일 주사 (복, i.p.), 후 2-3 분을 기다려야 하 고 발가락이 나 꼬리 핀치 응답을 테스트 하 여 쥐의 마 취 깊이 평가. 일단 마 취의 수술 평면 유지 부정사 위치에 얼음에 쥐를 놓습니다.
      주: thoracotomy 동안 깊은 마 취 통증의 지 각에 대 한 충분 한 생산, 현지 IACUC 지침을 따릅니다.
   2. 쇄 골, 칼 과정에서 피부를 통해 (3-4 cm) 절 개를 확인 하 고 칼 절차의 수준 아래 가로 절 개를 하 게.
   3. 파악 하 고 횡 경 막 완전히 노출 곡선된 집게의 쌍 칼 프로세스를 인상. 통해 횡 경 막, 횡 절 개를 만들고 가슴뼈와 갈비뼈 양측 흉 여 사이 흉 곽을 극복. 굽은 집게를 사용 하 여 흉 곽을 고정 하 고 심장 충분히 노출 칼 프로세스를 파악.
   4. 부드럽게, 다른 곡선된 겸 자 마음 잡고 하 고 좌 심 실 대동맥 아치의 자료를 통해 22 G 바늘을 삽입 합니다.
   5. 즉시, 오른쪽 아 트리 움 잘가 위로 잘라 고 얼음 처럼 차가운, 산소 자당-실제 중력 시스템을 통해 관류를 시작 합니다.
      참고: 차가운 자당-실제와 신속 하 고 충분 한 transcardial 관류 낮은 나트륨 및 칼슘 농도 흥분 성의 독성을 완화 하 고 신경 기능을 보호 하기 위해 도움이 될 수 있지만, 척수의 급속 한 냉각 촉진 수 있습니다. 또한, 붉은 혈액 세포를 지우기 형태학 연구를 수행할 때 biocytin의 배경 얼룩을 줄이기 위한 도움이 될 것 이다. 관류 액체 종료 오른쪽 아 트리 움은 분명 하 고 쥐의 간, 발 색은 창백 충분 하 고 만족을 간주 됩니다. 22 G 바늘의 끝 무딘 심장 및 대동맥 아치 파열 방지 해야 합니다.
4. 척수의 해 부 및 슬라이스
   1. 뒤에서 피부 꼬리 rostral, 관류의 상태에서 어느 한쪽에 척추와 갈비뼈 사이 흉 곽을 통해 다음 컷에 세로 절 개 (5 cm)를 확인 합니다.
   2. 척추의 꼬리 끝에 컷을 확인 하 고가 위를 사용 하 여 주변 조직, 버려야 빠르게 lumbosacral 세그먼트는 척추의 분리.
   3. 얼음 처럼 차가운 자당 기반 실제를 포함 하는 유리 접시에 lumbosacral 세그먼트를 전송 합니다. 위쪽 복 부 쪽으로 좋은 위를 사용 하 여 양측 척추 작은 꽃 자루를 극복 하 고 척수를 신중 하 게 노출. 2 cm 긴 척추 코드 lumbosacral 확대 (L1-S3)를 분리 하 고 다른 유리 접시 가득 찬 자당-실제 척추 섹션을 전송.
   4. Meninges과 해 현미경 피아-거미 집 모양의 막 제거 합니다. 최대한 빨리 멀리 모든 복 부와 지 뿌리를 잘라.
   5. 이전 트림된 한 블록에 척수를 놓습니다. 가로 분할 영역을 준비 하는 agar를 척수의 복 부 측을 첨부 하 고 잎으로 등 쪽을 보자. 그림 1에서 보듯이 parasagittal 슬라이스를 준비 하려면 수직 방향으로 한 천 하 superglue와 복 부 측을 연결 합니다. 그런 다음 superglue와 vibratome의 플랫폼으로 한 블록을 탑재 합니다. 가로 300-500 µ m 또는 0.025 m m/s와 80 Hz의 진동 주파수의 사전 속도와 parasagittal 슬라이스를 준비 합니다.
   6. 플라스틱 트림 피 펫을 사용 하 여 지속적으로 산소 실제 녹음 전에 적어도 30 분 동안 32 ° C에를 포함 하는 저장 챔버에 나일론 메쉬에 슬라이스를 전송.
      참고: meninges 척추 뿌리를 제거 하는 때 척수, 특히 등 쪽 뿔에 부상을 피하기 위해 주의. 척수 등 ventrally 슬라이스 한다. 최상의 결과 얻으려면 빠르게 (15-20 분) 내에서 슬라이스를 준비 한다. 척추 슬라이스의 두께 셀 가시성을 충족 하기 위해 더 이상 600 µ m 이어야 한다. 또한, 위에서 설명한 기술은 수평 척수 조각 얻을 사용 될 수 있습니다.

4. 전체 셀 패치 클램프 기록

1. SG 뉴런에서 전체 셀 패치 클램프 녹화를 수행 하려면 K⁺-Cs⁺를 적용 하는 동안 대부분의 녹음 경우 세포내 솔루션을 기반으로-금지 postsynaptic 현재 녹음에만 솔루션을 기반으로.
2. 부드럽게 척수 조각 녹음 실로 이동한 다음 U 자 모양의 백 금 철사와 함께 나일론 스레드 단단히 최적의 슬라이스 안정성에 대 한 연결을 유지 합니다. 꾸준히 중력 시스템을 통해 실시간에 버블링 된 실제와 슬라이스를 perfuse 하 고 충분 한 산소를 달성 하기 위해 2-4 mL/min에서 관류 속도 설정 합니다.
3. 저해상도 현미경 렌즈를 사용 하 여 SG (반투명 밴드)의 영역을 식별, 건강 한 신경 목표 셀으로 고해상도 목표를 사용 하 여 선택한 비디오 모니터 스크린의 센터에 그것을 조정 합니다.
4. K⁺의 적절 한 볼륨을 채워는 micropipette-기반 또는 Cs⁺-는 micropipette 전극 홀더에 삽입 고 세포내 솔루션 안에 실버 와이어 연락은 필요에 따라 세포내 솔루션을 기반으로 합니다 홀더입니다.
5. 초점으로는 micropipette가지고 micromanipulator를 사용 하 여 실제에 몰입할 고 온화한 긍정적인 압력 (~ 1 psi는 압력 게이지로 측정 하는 때) 적용 모든 먼지와 파편 micropipette 강제로.
6. 타겟된 신경 쪽으로 micropipette 점차적으로 이동 합니다. 피펫으로 신경 및 아주 작은 보조 개 형태는 gigaseal를 형성 하기 위하여 신경 막에 접근 하는 일단 긍정적인 압력을 릴리스 합니다.
7. 지주-70에 잠재적인 변경 mV, 가까이 생리 적인 휴식 막 잠재적인 (RMP) 셀의. 다음, 과도 하 고 부드러운 흡입 막 파열을 만들 좋은 전체 셀 구성 micropipette 적용 됩니다.
   참고: 녹음 실에는 슬라이스를 전송 후 적어도 5 분 조각 표면에 파편을 취소에 대 한 지속적인 관류를 확인 하십시오. 그것은 건강 하 고 건강에 해로운/죽은 신경 세포 사이 구별 하는 능력 좋은 씰링 및 안정적인 기록을 위한 최고 중요성의 지적 가치가 있다. 건강에 해로운/죽은 신경은 보이는 큰 핵 함께 부 또는 긴축 외관, 밝고 부드러운 막으로 3 차원 (3D) 모양 특징 이다 건강 한 신경 및 그것의 핵 표시 되지 않습니다. 전체 셀 구성 달성 하기 위해 필요할 때 단계별 빠르거나 느린 커패시턴스에 대 한 보상을 필수적 이다. RT에 잠재적인 액체 접합은 계산 15.1-15.2 mV 및 k⁺4.3-4.4 mV-기반 및 Cs⁺-각각 세포내 솔루션을 기반으로. 우리의 연구에 기록 된 데이터 하지 액체 접합 잠재력에 대 한 수정 했다.
8. 본질적인 막 속성의 녹음
   1. 수동 내장 막 속성 기록: 기록 RMP을 즉시 (20 내 s)에서 휴식 후. 전류 클램프 모드에서 RMP에 전압에 대 한 응답 depolarizing 현재 (10 pA, 500 밀리초)를 측정 하 여 신경 입력된 저항을 결정 합니다.
   2. 기록 속성을 발사: 1의 시리즈와 전류 클램프에 각 뉴런의 발사 패턴을 테스트 전류 펄스 (25 pA 증가와 25-150 pA) RMP에 depolarizing s. 임계값, 진폭 및 오프 라인으로 단일 활동 전위의 반-폭 측정 합니다.
   3. Subthreshold 전류 기록: 체세포 subthreshold 전류를 평가 하는 막 잠재적인에서 개최-50 mV 전압 클램프 모드에서. 그런 다음 hyperpolarizing-60에서 1 s의 전압 펄스의 시리즈를 적용 mV-120 ~ mV, mV 10 감소.
   4. 흥분 성의 postsynaptic 전류 (EPSCs) 기록: 기록 EPSCs k⁺-기반으로-70의 지주 잠재력에 전압 클램프 모드에서 세포내 솔루션 mV.
   5. 레코드 Ipsc: Cs⁺적용-Ipsc를 기록 하기 위한 세포내 솔루션을 기반으로. 전체 셀 구성 설정 되 면 막 잠재적인에서 개최-70 mV ~ 5 분, 및 다음 변경 0으로 잠재적인 지주에 대 한 mV 점차적으로. 안정화를 위한 몇 분 그리고 IPSC 이벤트 기록 시작 합니다.
      참고:-50 mV 및 표시 오버 슛 보다는 적게는 RMP만 신경 더 학문을 위해 선택 되어야 합니다. 우리의 연구에서 시리즈 저항은 일반적으로 10-30 m ω, 그리고 직렬 저항을 20% 이상 변경 되 면 녹음을 제외 해야 합니다. EPSCs 50 µ M APV의 목욕 응용 프로그램으로 확인 될 수 있는 20 µ m CNQX, Ipsc 10 µ M bicuculline와 1 µ M strychnine 확인 될 수 있는 하는 동안.

5. 형태학 연구

1. 형태학 실험에 대 한 사용 K⁺-0.05% neurobiotin 488을 포함 하는 세포내 솔루션을 기반으로.
2. 안정적인 electrophysiological 적어도 20 분에 대 한 기록 유지 후 천천히 봉인 및 컨테이너 4%로 가득 척수 조각 전송 세포 막 수 있도록 위쪽 방향으로 micropipette를 제거 PFA. 수정 조각 4 %PFA 하룻밤에 4 ° C에서 그리고 1 시간에 대 한 실시간에.
3. PBS에서 슬라이스를 헹 구 고 30 분 50% 에탄올에 그들을 담가. PBS에서 또 다른 3 개의 세척, 후 슬라이드 장착 매체에 그들의 원래 두께에 슬라이스를 탑재.
4. Confocal 현미경을 사용 하 여 ( 재료의 표참조) 이미지 수집 및 신경 3D 재구성. 1.5 µ m의 z-스택 20 X 렌즈를 통해 신경 세포를 검사 합니다.

급성 척수 조각 그림 1에 표시 된 다이어그램에 따라 준비 되었다. 조각화 및 복구, 후 척수 조각 녹음 실로 옮겨 졌다. 건강 한 신경 소마 모양 IR DIC 현미경을 사용 하 여에 따라 확인 되었다. 다음, SG 뉴런의 활동 전위 전류 펄스 (1 s 기간) depolarizing의 시리즈에 의해 elicited 했다 신경 RMP에서 열렸다. 보이는 것 처럼 그림 2설명 되어 있고 이전 연구에 의해 분류 한 SG 신경 포함 토 닉-발사, 지연 발사에서에서 관찰된, 간격-발사, 초기 버스트, phasic 파열, 단일-스파이크와 꺼 려 발사, 발사 패턴.

이 준비를 구현, 우리 또한 기록 subthreshold 전류 및 자발적으로 나타나는 전류 전압 클램프에. Subthreshold 전류, hyperpolarization-활성화 전류 등의 대표적인 흔적 (내가h), T-타입 칼슘 현재 (IT)와 A 형 칼륨 현재 (IA), 그림 3A에서 제공 됩니다. 이 현재-50에서 셀을 눌러 가져온 mV 및 점차 강화 10 mV 감소에서-60에서-120 mV. 내가h 전압 단계를 hyperpolarizing에 의해 활성화 되었다. 그러나, 나는T 와 나 는 hyperpolarizing prepulses depolarized 전압에 따라 비활성화에서 해제 하 여 활성화 했다. 그림 3B 3 C 대표 자연 EPSCs (sEPSCs) 및 Ipsc (sIPSCs) SG 뉴런에서 각각 기록 표시. 진폭과 주파수의 이러한 시 냅 스 이벤트 미니 분석 소프트웨어를 사용 하 여 오프 라인으로 분석 될 수 있습니다.

신경 형태학 기능 특성, parasagittal 슬라이스 SG 신경의 대부분이 크게 수지상 나무의 rostrocaudal 확산 및 neurobiotin 488 세포내 솔루션에 추가 되었습니다 때문에 적용 되었다. 신경 소마와 넓이의 크기와 그들의 수지상 프로세스의 크기는 confocal 현미경 이미징 후 평가 했다. 이전에 보고 된, SG 뉴런 형태소 구분을 표시 하 고 중앙 셀, 방사형 셀, 수직 셀, 작은 섬 세포 및 분류 되지 않은 세포로 분류 될 수 있습니다. 이러한 셀의 대표 현미경 그림 4에 나와 있습니다.

그림 1: 급성 척수 조각 준비에 대 한 다이어그램. 깊이 urethan (i.p.)와 취 되 고, 후 쥐는 transcardially 얼음 carbogenated 자당-실제와 함께 끼얹는다입니다. 척추는 다음 신속 하 게 해 부, 그리고 복 부 laminectomy 수행 됩니다. Meninges, 피아-거미 집 모양의 막과 연결 된 척추 신경 뿌리는 제거 됩니다. 그런 다음, 척수 견본 agarose 블록에 장착 됩니다. 필요에 따라 가로 또는 parasagittal 슬라이스는 vibratome와 절단 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 2: SG 뉴런의 패턴을 발사. 1의 시리즈를 주입 하 여 발사 패턴 결정 s RMP에 SG 신경에 전류 펄스를 depolarizing. 로 토 닉-발사, 지연 발사, 간격-발사, 초기 버스트, phasic 파열, 단일-스파이크, 및 꺼 려 발사 발사 패턴 분류 될 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 3: SG 뉴런에서 전압 클램프 녹음. (A) 대표 추적 hyperpolarizing로 분류 하는 현재 분사에 대 한 응답을 보여주는h, IA 와 IT. 하단 패널 전압 클램프에 하위 임계값 전류에 대 한 차분한 프로토콜을 보여 줍니다. (B) sEPSCs의 대표적인 흔적-70에서 SG 뉴런에서 기록 부재 및 50 μ M APV의 존재에 mV 및 20 μ M CNQX. 하기 전 (왼쪽) 확장된 시간 척도에 표시 되는 연속 추적 내리고 APV CNQX의 액션 바 차트 기록 아래에 표시 된 기간에 해당 하는 (오른쪽)에서. (C) sIPSCs의 대표적인 흔적 부재 및 10 μ M bicuculline 및 0에서 1 μ M strychnine에 SG 뉴런에서 기록 mV. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 4: 쥐 SG 뉴런의 대표적인 형태. 소마 크기와 모 수석 속성 confocal 현미경 이미지에 표시 된, SG 신경 중앙 셀 (A), 방사형 셀 (B), 수직 셀 (C), 작은 섬 세포 (D) 및 분류 되지 않은 셀 (E 로 분류 될 수 있습니다. ). 된 복 부; D: 등 쪽; R: rostral; C: 꼬리. 눈금 막대 = 50 µ m. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

표 1: 실제에 대 한 제조 법입니다.

표 2: 자당-실제에 대 한 제조 법입니다.

표 3: 길목 K+-세포내 솔루션을 기반으로.

표 4: 길목 Cs+-세포내 솔루션을 기반으로.

저자는 관심 없음 충돌 선언합니다.