방법 논문

쥐에서 혈액 샘플 컬렉션의 대체 방법으로 빵 꾸 하 정 맥

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DOI:

10.3791/58499

⸱

2018년 11월 18일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology, The Second Xiangya Hospital, Central South University, 2Department of General Surgery, The Second Xiangya Hospital, Central South University

이 논문에서

요약

여기, 선물이 쥐 하 정 맥에서 혈액 샘플을 수집 하는 프로토콜.

초록

충분 한 혈액 량과 혈 동물 실험에 필수적 이다. 쥐의 꼬리 정 맥에서 혈액 컬렉션은 인기와 보다 적게 스트레스가 많은 복고풍 궤도 총 샘플 컬렉션 같은 다른 공격적인 방법에 비해. 그러나,이 혈액 수집 방법 때로는 불만족 성공률 제한 됩니다. 여기, 우리 하 정 맥 빵 꾸를 통해 혈액 수집 하는 방법을 소개합니다. 하 정 맥은 쇄 골 바로 아래 있으며이 정 맥은 혈액 컬렉션의 볼륨 요구 사항을 충족 하기에 충분 합니다. 우리의 결과이 방법은 안전 하 고 적용 가능한 필요한 혈액 량과 혈액 컬렉션 샘플링에 대 한 보여 줍니다. 하 정 맥 빵 꾸를 통해 혈 쥐에서 실패 한 꼬리 정 맥 혈액 샘플링의 경우 대체 혈액 수집 방법 될 수 있습니다.

서론

혈액 컬렉션은 동물 연구에 필수적입니다. 혈액 컬렉션에 대 한 대상 혈관 등 복고풍 궤도 총, 경 정 맥, saphenous 정 맥, 꼬리 혈관, 경 동맥1,2,,34. 가끔은, 혈액에서 복 부 대동맥, 베 나 정 맥 또는 심지어 심장5,,67얻을 수 수 있습니다. 같은 경우에는 동물 희생 해야 하 고 이후의 관찰; 사용할 수 없습니다. 이러한 메서드는 사용 하는 따라서, 매일 실험적인 작품에는 더 적은. 쥐의 꼬리 정 맥에서 혈액 컬렉션은 대중적이 고 덜 스트레스에 비해 위에 언급 한 방법8.

그러나, 꼬리 정 맥에서 혈액 컬렉션 때로는 불만족 성공률 제한 됩니다. 때때로, 그것은 또한이 방법으로 충분 한 혈액 량을 얻기 어렵다입니다. 하 정 맥은 충분히 큰 쇄 골 뼈 바로 아래 위치 하 고, 빵 꾸 하 정 맥 혈액 샘플링 일상적인 혈액 수집 방법 성공 하지 않는 경우 다른 방법을 할 수 있다. 여기, 우리가 쥐 빵 꾸 하 정 맥을 통해 혈액 수집 방법 소개.

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프로토콜

이 연구는 두 번째 Xiangya 병원 (창사, 중국)에서 동물 연구에 대 한 중앙 남쪽 대학 윤리 위원회에 의해 승인 되었다. 원고는 도착에 따르면 준비 했다 (동물 연구: 보고의 Vivo 실험) 지침9.

1. 재료 및 동물 준비

  1. 필요한 재료 준비: 접착 테이프, 제 모 제, 75% 에탄올, 혈액 컬렉션 튜브, 2.5 mL 주사기와 바늘 (24 G, 0.6 m m x 25 m m), 헤어 면도기, 전자 규모, 게이지 ( 재료의 표참조) 연결.
  2. 20 Sprague-Dawley (SD) 쥐, 세 8-10 주 및 무게 153-200 g ( 재료의 표참조)를 사용 합니다. 유지 관리 및 실험 동물 사용10에 대 한 가이드에 따라 쥐.
  3. 식품 및 식 수와 표준 조건 하에서 집 쥐 나무-면도 침구 (2 쥐 감 금 소 당) 530 cm2 장에 그들을 유지. 약 25 ° c.에 온도 제어 실내 온도에 동물 유지
  4. 전신 마 취를 유도 (sodium pentobarbital 40 mg/kg) 하 정 맥 펑크 전에 복 주사를 통해 모든 동물에.
  5. 부정사 위치에 쥐를 놓습니다. 편안한 자세로 뒷 다리 사지를 해결 하 고 상 지 트렁크 옆에 그냥 몸 축에 평행한 수정.
    참고:이 절차 (그림 1)에 대 한 아무 기계 환기 필요 합니다.
  6. 모피를 제거 하려면 infraclavicular 공간의 양쪽 청소 (머리 면도기와 제 모 에이전트 참조 테이블의 재료) 및 어떤 눈에 보이는 먼지. 목 및 75% 에탄올과 흉부 피부를 닦아냅니다. 깨끗 하 고 마른 거 즈로 펑크에 대 한 영역을 유지.

2. 혈액 수집 절차

참고: 하 정 맥의 양쪽 모두는 펑크, 적합 그리고 여기 우리는 펑크에 대 한 오른쪽 선택. 오른쪽 쇄 골의 방향과 위치 연산자의 왼쪽된 엄지손가락 (그림 2)에 의해 식별 됩니다. Suprasternal fossae는 suprasternal fossae (그림 2) 바늘의 방향에서으로 검지 손가락으로 부드럽게 감동 됩니다.

  1. 헤 파 린 솔루션 (10 IU/mL)으로 균 2.5 mL 주사기를 씻어.
  2. 0.5 m m 오른쪽 쇄 골 (그림 3)의 바깥쪽 1/3 지역에 꼬리 펑크 사이트를 찾습니다. 펑크 사이트의 피부에 주사기를 부드럽게 이동 합니다. 일단 바늘 infraclavicular 피부를 입력, 부정적인 압력 연산자의 오른손 (그림 4)와 함께 적용 됩니다.
    참고: 평균 및 최대 혈액 볼륨은 1.0 mL와 1.4 mL, 각각. 바늘의 방향 suprasternal fossae로 배치 하 고 단지 그것에 후부 쇄 골에 거의 평행 해야 합니다. 일반적으로, 하 정 맥이 방향으로 약 2 mm 바늘을 삽입 하 여 도달할 수 있습니다. 일단 바늘 들어가는 정 맥, 혈액 부정적인 압력에서 주사기를 입력 합니다.
    1. 부정적인 압력을 유지 하는 충분 한 양의 혈액을 그릴 때까지 (그림 5).
  3. 하 정 맥 혈 성공 하지 않으면 피하 영역에 바늘을 철회 하 고 흉 골에 약간 내부 바늘의 방향을 조정 합니다.
    1. 세 번 실패 하는 경우 같은 측면에서 하 정 맥을 방지 하 고 혈액 샘플링 contralateral 측을 사용 하 여.
  4. 혈액 수집 후 펑크 바늘을 제거 하 고 출혈을 멈추게 하 1-2 분 동안 펑크 사이트에 압력을 적용 합니다.
    참고: 압력 질 식 방지에 매우 부드러운 되어야 합니다.

3. 혈액 샘플 처리

  1. 응고 제 코팅 진공 튜브 (EDTA)와 플라즈마를 수집 1600 x g에서 10 분 원심 분리기에 혈액 샘플을 전송 합니다.
  2. 깨끗 한 관을-80 ° C (그림 6)에 게 상쾌한 발음

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결과

총 20 SD 쥐 (남성 n = 10, 여성 n = 10) 여기에서 사용 했다. 쥐에서 하 정 맥에서 20 개 이상의 혈액 samplings 수행한, 숙련 된 운영자에 의해 수행 아니 하 정 맥 빵 꾸가 초급 연산자로 혈액 collectionwas 쥐 또는 다른 동물에 있는 경험. 작업을 하기 전에 초보자 숙련 된 연산자에 의해 수행 3 절차를 보았다.

혈액 샘플링 오른쪽 하 정 맥 접근을 통해 17 쥐에 성공 했다. 이 절차 3 쥐 (숙련 된 그룹에서 1)와 초급 그룹에서 2에서에서 실패 하 고 혈액 샘플링이 3 쥐에서 왼쪽된 하 정 맥 접근을 통해 성공 했다. 시간 코스와 혈액 볼륨 각 사례는 표 1에 설명에 대 한 수집. 성공률 초보자 그룹 (80%)와 숙련 된 그룹 사이 유사 했다 (90%, p = 0.531)...

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토론

여기, 우리 하 정 맥에서 혈액 추출에 대 한 다른 방법을 소개 하 고 우리는이 방법은, 안전, 및 적용 가능한 쥐에서 혈액 샘플링에 대 한 표시. 이 메서드는 맥 박 조정기 리드 이식 환자11에서 하 정 맥 펑크에서 파생 됩니다. 하 정 맥은 그냥 후부와 쇄 골에 꼬리 있으며 겨드랑이 정 맥의 연속 이다. 그것은 이전 scalene 근육12의 중간 국경에 첫 번째 갈비뼈의 외부 국경에서 실행 됩니다. 여기에서 그것은 brachiocephalic 정 맥을 형성 하는 내부 경 정 맥으로 조인 하 고 suprasternal fossae (그림 8)의 바로 아래 슈퍼 베 나 정 맥으로 빼낸. 쇄 골은 쉽게 식별 하 고 하 정 맥과 쇄 골 사이 명확한 해부학 관계 있다. 여기, 우리는 동물 실험에이 임상 기술 적용. 인간과 쥐에서 위 사지의 다른 방향으로 상 지 펑크 (

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공개 사항

이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 제 81670269, 제 81500355 No. 81500226에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
쥐Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (중국 후난성 창사) 
stastical softwareSPSS Statistics 17
제모제France Yi Sha Cosmetics Co., Ltd(Guangzhou, Guangdong Province, China)
2.5mL 주사기Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd(Weihai, Shandong Province, China)헤어
면도기Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai, China)
접착 테이프3M Deutschland GmbH (EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)
펜토 바르비탈 나트륨Merck
75 % 에탄올약학과, Central South Univesity
후베이 Jinxing Technology & Development Co., Ltd (우한 후베이 성, 중국) (2ml)
전자 저울Dongguan Shengheng Electronics Co., Ltd (동관, 광동 성, 중국)
마취캔버스 장갑
Nanjing Xinbai Pharmaceutical  Co., Limited (난징, 장쑤성, 중국) (2mL, 12500 IU)
육상 식염수Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang, Hunan Province, China) (100ml)
혈액 채취 튜브의 두 번째 Xiangya 병원용

참고문헌

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  4. Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies. Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).
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  10. National Institute of Health. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th, National Academies Press (US). US (Washington DC). (2011).
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