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방법 논문

산 성 침 용 법을 사용 하 여 전체 신장의 네 프 론의 수 추정

10K 조회수

DOI:

10.3791/58599

2019년 5월 22일

이 논문에서

요약

전체 신장 네 프 론의 추정치는 네 프 론의 수와 신장 및 심혈 관 질환의 향상 된 위험 사이에 역 연관이 있기 때문에 임상적으로 그리고 실험적으로 중요 합니다. 본 원에서, 전체 신장의 네 프 론의 신속 하 고 신뢰할 수 있는 추정치를 제공 하는 산 성 침 용 방법을 사용 하는 것이 입증 된다.

초록

네 프 론 엔 다 우먼 트는 개인이 태어난 네 프 론의 총 수를 말하며, 인간에서의 신장은 임신 36 주에 완료 되 고 출산 후에는 새로운 네 프 톤이 형성 되지 않습니다. 네 프 론 번호는 출생 후 시점에서 측정 된 네 프 론의 총 수를 지칭 한다. 유전과 환경적 요인 모두 네 프 론의 엔 다 우먼 트와 수에 영향을 미친다. 특정 유전자 또는 요인이 신 기원과 네 프 론의 손실이 나 종말의 과정에 영향을 미치는 방법을 이해 하는 것은 더 낮은 네 프 인 엔 다 우먼 트 또는 수를 가진 개인은 신장 또는 심혈 관 질환을 개발의 높은 위험에 있을 것으로 생각 됩니다. 사람의 일생 동안 환경 노출이 어떻게 네 프 론의 숫자에 영향을 미치는지 이해 하는 것은 미래의 질병 위험을 결정 하는 데에도 중요 합니다. 따라서, 전체 신장 네 프 론의 수를 신속 하 고 안정적으로 평가 하는 능력은 신 기원 또는 네 프 랭 손실을 촉진 시키거나 증진 시키는 기전을 더 잘 이해 하기 위한 기본적인 실험적 요구 사항 이다. 여기서, 우리는 Damadian, 샤이 리 및 Bricker에 의해 설명 된 절차에 기초 하 여 전체 신장의 네 프 론의 추정을 위한 산 침 용 법을 약간의 수정과 함께 설명 한다. 산 성 연 화 방법은 네 프 론의 빠르고 신뢰할 수 있는 추정치를 제공 합니다 (사 구체를 계산 하 여 평가 됨) 그 중 5% 내에서 더 고급을 사용 하 여 결정, 이기는 하지만 비싼, 자기 공명 영상과 같은 방법. 더욱이, 상기 산 침 용 법은 많은 수의 샘플 또는 실험 조건에서 네 프 론의 개수를 평가 하는 우수한 고 처리량 방법 이다.

서론

네 프 론의 기본 구조와 신장1의 기능 단위입니다. 구조적으로, 네 프 론의 사 구체 (모세 혈관과 세포)는 보 먼의 캡슐 내에 위치 하 고 신장 세관, 근 위 세관, Henle의 루프 및 수집 덕트로 종결 되는 말단 세관으로 구성 됩니다. 기능적으로, 네 프 론의 역할은 물과 전해질의 여과 및 재흡수와 폐기물의 분 비입니다. 일반적으로, 신장은 마우스와 쥐2와 같은 여러 종에서 출생 직후 인 간에 서 임신 36 주에 완료 됩니다. 네 프 론 엔 다 우먼 트는 개인이 태어난 네 프 론의 총 수를 말하며, 반면 네 프 론 수는 출생 후3년에 언제 든 지 측정 된 네 프 론의 총 개수입니다. 용어 네 프 론의 숫자와 사 구체 숫자는 종종 같은 의미로 사용 됩니다. 네 프 론의 사 구체 1 개만 있기 때문에, 사 구체 수의 평가는 네 프 온 수를 추정 하는 중요 한 대리 이다.

네 프 론의 엔 다 우먼 트와 네 프 론의 수치는 네 프 론의 자질과 심혈 관 질환의 발병 률이 증가 하는 네 프 론의 숫자와의 연관성을 입증 한 것으로 임상적 관심을가지고 있다4,

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프로토콜

아래 나열 된 소모품 및 시 약은 한 번의 마우스에서 전체 신장의 네 프 론의 수, 즉 두 개의 신장에 대 한 결정입니다. 쥐에 대 한 산 성 침 용 방법의 사용에 대 한 수정은 별표로 식별 됩니다. 모든 실험 프로토콜은 실험실 동물의 관리 및 사용을 위한 건강 가이드의 국립 연구소를 본, 미시시피 대학 의료 센터에서 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었다.

1. 신장 분리 절차

  1. 마우스 (또는 다른 종)의 무게를 측정 하 고이 소에 어 루 레인 (5%-8%)으로 안락사 과다 복용 또는 pentobarbital (150 밀리 그램/kg 복 강 내 주사).
  2. 마우스가 안락사 되 면, 중간 선을 따라 미세 수술가 위를 사용 하 여 복 강을 엽 니 다.
  3. 내장을 조심 스럽게 들어 올리고 지방 생식을 복 강의 오른쪽으로 올립니다. 총 해 부에 의해, 왼쪽 신장을 분리. 미세 수술가 위를 사용 하 여 왼쪽 신장 동맥과 정 맥을 자르고 왼쪽 신장을 조심 스럽게 제거 하 고 (마우스 번호/식별자) 형광체 완충 식 염 수를 포함 하는 계량 보트에 신장을 배치 합니다 (PBS).
  4. 오른쪽 신장에 대 한 절차를 반복 합니다.
  5. 각각의 계량 보트에서 각 신장을 제거 하 ....

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결과

다음은 고혈압의 확립 된 마우스 모델과 연령과 관련 된 만성 신 장병의 유전 쥐 모델에서 전체 신장 네 프 론의 대표적인 추정치입니다. 사전 또는 사후 arteriolar 또는 관 형 구조물을 부착 하거나 포함 하지 않은 구형 구조와 같은 사 구체를 식별 하는 주요 특성은 산 침 용 법에 새로운 것을 강조 합니다 (그림 1).

제 1 실험 예에 있어서, 총 네 프 론의 숫자는 14 일 동안 비 히 클 (염 분) 또는 안 지 오 텐 신 II를 포함 하는 쥐 (남성 C57BL 6 주)에서 측정 하였다. 차량 주입 마우스에서, 네 프 론 수는 산 성 침 용 법을 이용 하 여 결정 된 대로 신장 당 12411 ± 248 네 프 톤 이었다 (도 2). 이러한 추정값은.......

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토론

좋은 실험 기법으로, 산 침 용 방법은 전체 신장의 네 프 론의 수를 추정 하는 데 이상적입니다. 신장은 산에 용 해 되지만, 사 구체는 크게 그대로 유지 하 고 쉽게 식별, 개별 사 구체 계산 상대적으로 쉽고 간단 하 게. 산 성 침 용 기법은 특히 여러 가지 이유로 유리 하다. 첫째, 산 성 침 용 법은 비용과 물리적 노력의 측면에서 상대적으로 적은을 필요로 하는 신속 하 고 편리한 방법입니다. 산 성 침 용 법을 수행 하는 데 필요한 모든 시 약과 소모품은 대부분의 기본 실험실에서 쉽게 구할 수 있으며, 사 구체 계산을 위한 도립 현미경에 대 한 접근이 유일한 주요 요구 사항입니다. 비용 측면에서, 산 침 화 방법은 동물 당 단지 몇 백 달러 비용을 추정 하 고,이는 자기 공명 영상과 같은 전체 신장 사 구체 카운팅의 다른 방법과 관련 된 비용에 비해 많은 경우, 스캔 시간 및 기술 전문성의 동물 당 수천 달러에 이르기까지 다양 할 수 있습니다.

둘째, 상기 산 침 용 법은.......

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없습니다.

감사의 글

이 사업은 건강의 국가 학회, 국가 심장, 폐 및 혈액 학회에 의해 부분적으로 지원 되었습니다 (R01HL107632).

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Isoflurane 마취Abbott Laboratories05260-05
Isoflurane 기화기 시스템 및 유량계Braintree ScientificVP I의료용 산소 공급 장치
포함 라이카 도립 현미경 DMIL LED라이카 마이크로시스템DMIL LED모든 제작 적합한
디지털 수조Fisher Scientific2239모든 제조사 적합한
ToughCut Fine 수술 용 가위Fine Science Tools14058-1125mm 절삭 날, 11.5cm 길이; 팁 : 날카롭고 날카롭습니다. 팁 모양: 직선
마이크로 해부 겸자 4 1/4 in.Biomed Res Instruments, Inc10-1760곡선 팁
플렉시글라스 보드 5 인치 x 7 인치.모든 출처 적합n/a모든 제작 또한 적합한
육각형 폴리스티렌 계량 접시Fisher Scientific02-2002-100모든 제작 또한 적합한
면도날Fisher Scientific12-640단일 모서리 탄소강 0.009
거즈 스폰지 4 x 4 in. 8 플라이Fisher ScientificMSD-1400250
10x 농축 인산염 완충 식염수(PBS)Sigma AldrichP5493-4L은 1배로 희석합니다.
6 N 하이드로콜린산 용액Sigma Aldrich3750-32
15 mL 원추형 원심분리기 튜브Fisher Scientific14-959-70C모든 제작
50 mL 원추형 원심분리기 튜브Fisher Scientific14-959-49A모든 제작 또한 적합한
일회용 5 mL 주사기Cole PalmerEW-07944-06모든 제작 또한 적합한
18G1.5 일회용 바늘Fisher Scientific14-826-5D모든 제조사 적합
21G1.5 일회용 바늘Fisher Scientific14-826-5B모든 제조사
12-웰 다중 웰 세포 배양 플레이트 뚜껑 ColePalmer#FW-01959-06모든 제조사
적합 폴리프로필렌 모듈식 시험관 랙Cole Palmer#EW-06733-0015 및 50 mL 코니컬 튜브 수용 가능; 모든 것이 또한 적합합니다.
적합 적합

참고문헌

  1. Hall, J. E., Guyton, A. C. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 13th, Elsevier. Philadelphia, PA. (2016).
  2. Wang, X., Garrett, M. R. Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models. Physiological Genomics.....

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