전체 신장 네 프 론의 추정치는 네 프 론의 수와 신장 및 심혈 관 질환의 향상 된 위험 사이에 역 연관이 있기 때문에 임상적으로 그리고 실험적으로 중요 합니다. 본 원에서, 전체 신장의 네 프 론의 신속 하 고 신뢰할 수 있는 추정치를 제공 하는 산 성 침 용 방법을 사용 하는 것이 입증 된다.
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전체 신장 네 프 론의 추정치는 네 프 론의 수와 신장 및 심혈 관 질환의 향상 된 위험 사이에 역 연관이 있기 때문에 임상적으로 그리고 실험적으로 중요 합니다. 본 원에서, 전체 신장의 네 프 론의 신속 하 고 신뢰할 수 있는 추정치를 제공 하는 산 성 침 용 방법을 사용 하는 것이 입증 된다.
네 프 론 엔 다 우먼 트는 개인이 태어난 네 프 론의 총 수를 말하며, 인간에서의 신장은 임신 36 주에 완료 되 고 출산 후에는 새로운 네 프 톤이 형성 되지 않습니다. 네 프 론 번호는 출생 후 시점에서 측정 된 네 프 론의 총 수를 지칭 한다. 유전과 환경적 요인 모두 네 프 론의 엔 다 우먼 트와 수에 영향을 미친다. 특정 유전자 또는 요인이 신 기원과 네 프 론의 손실이 나 종말의 과정에 영향을 미치는 방법을 이해 하는 것은 더 낮은 네 프 인 엔 다 우먼 트 또는 수를 가진 개인은 신장 또는 심혈 관 질환을 개발의 높은 위험에 있을 것으로 생각 됩니다. 사람의 일생 동안 환경 노출이 어떻게 네 프 론의 숫자에 영향을 미치는지 이해 하는 것은 미래의 질병 위험을 결정 하는 데에도 중요 합니다. 따라서, 전체 신장 네 프 론의 수를 신속 하 고 안정적으로 평가 하는 능력은 신 기원 또는 네 프 랭 손실을 촉진 시키거나 증진 시키는 기전을 더 잘 이해 하기 위한 기본적인 실험적 요구 사항 이다. 여기서, 우리는 Damadian, 샤이 리 및 Bricker에 의해 설명 된 절차에 기초 하 여 전체 신장의 네 프 론의 추정을 위한 산 침 용 법을 약간의 수정과 함께 설명 한다. 산 성 연 화 방법은 네 프 론의 빠르고 신뢰할 수 있는 추정치를 제공 합니다 (사 구체를 계산 하 여 평가 됨) 그 중 5% 내에서 더 고급을 사용 하 여 결정, 이기는 하지만 비싼, 자기 공명 영상과 같은 방법. 더욱이, 상기 산 침 용 법은 많은 수의 샘플 또는 실험 조건에서 네 프 론의 개수를 평가 하는 우수한 고 처리량 방법 이다.
네 프 론의 기본 구조와 신장1의 기능 단위입니다. 구조적으로, 네 프 론의 사 구체 (모세 혈관과 세포)는 보 먼의 캡슐 내에 위치 하 고 신장 세관, 근 위 세관, Henle의 루프 및 수집 덕트로 종결 되는 말단 세관으로 구성 됩니다. 기능적으로, 네 프 론의 역할은 물과 전해질의 여과 및 재흡수와 폐기물의 분 비입니다. 일반적으로, 신장은 마우스와 쥐2와 같은 여러 종에서 출생 직후 인 간에 서 임신 36 주에 완료 됩니다. 네 프 론 엔 다 우먼 트는 개인이 태어난 네 프 론의 총 수를 말하며, 반면 네 프 론 수는 출생 후3년에 언제 든 지 측정 된 네 프 론의 총 개수입니다. 용어 네 프 론의 숫자와 사 구체 숫자는 종종 같은 의미로 사용 됩니다. 네 프 론의 사 구체 1 개만 있기 때문에, 사 구체 수의 평가는 네 프 온 수를 추정 하는 중요 한 대리 이다.
네 프 론의 엔 다 우먼 트와 네 프 론의 수치는 네 프 론의 자질과 심혈 관 질환의 발병 률이 증가 하는 네 프 론의 숫자와의 연관성을 입증 한 것으로 임상적 관심을가지고 있다4,
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아래 나열 된 소모품 및 시 약은 한 번의 마우스에서 전체 신장의 네 프 론의 수, 즉 두 개의 신장에 대 한 결정입니다. 쥐에 대 한 산 성 침 용 방법의 사용에 대 한 수정은 별표로 식별 됩니다. 모든 실험 프로토콜은 실험실 동물의 관리 및 사용을 위한 건강 가이드의 국립 연구소를 본, 미시시피 대학 의료 센터에서 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었다.
1. 신장 분리 절차
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다음은 고혈압의 확립 된 마우스 모델과 연령과 관련 된 만성 신 장병의 유전 쥐 모델에서 전체 신장 네 프 론의 대표적인 추정치입니다. 사전 또는 사후 arteriolar 또는 관 형 구조물을 부착 하거나 포함 하지 않은 구형 구조와 같은 사 구체를 식별 하는 주요 특성은 산 침 용 법에 새로운 것을 강조 합니다 (그림 1).
제 1 실험 예에 있어서, 총 네 프 론의 숫자는 14 일 동안 비 히 클 (염 분) 또는 안 지 오 텐 신 II를 포함 하는 쥐 (남성 C57BL 6 주)에서 측정 하였다. 차량 주입 마우스에서, 네 프 론 수는 산 성 침 용 법을 이용 하 여 결정 된 대로 신장 당 12411 ± 248 네 프 톤 이었다 (도 2). 이러한 추정값은.......
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좋은 실험 기법으로, 산 침 용 방법은 전체 신장의 네 프 론의 수를 추정 하는 데 이상적입니다. 신장은 산에 용 해 되지만, 사 구체는 크게 그대로 유지 하 고 쉽게 식별, 개별 사 구체 계산 상대적으로 쉽고 간단 하 게. 산 성 침 용 기법은 특히 여러 가지 이유로 유리 하다. 첫째, 산 성 침 용 법은 비용과 물리적 노력의 측면에서 상대적으로 적은을 필요로 하는 신속 하 고 편리한 방법입니다. 산 성 침 용 법을 수행 하는 데 필요한 모든 시 약과 소모품은 대부분의 기본 실험실에서 쉽게 구할 수 있으며, 사 구체 계산을 위한 도립 현미경에 대 한 접근이 유일한 주요 요구 사항입니다. 비용 측면에서, 산 침 화 방법은 동물 당 단지 몇 백 달러 비용을 추정 하 고,이는 자기 공명 영상과 같은 전체 신장 사 구체 카운팅의 다른 방법과 관련 된 비용에 비해 많은 경우, 스캔 시간 및 기술 전문성의 동물 당 수천 달러에 이르기까지 다양 할 수 있습니다.
둘째, 상기 산 침 용 법은.......
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이 사업은 건강의 국가 학회, 국가 심장, 폐 및 혈액 학회에 의해 부분적으로 지원 되었습니다 (R01HL107632).
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
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| Isoflurane 기화기 시스템 및 유량계 | Braintree Scientific | VP I | 의료용 산소 공급 장치 |
| 포함 라이카 도립 현미경 DMIL LED | 라이카 마이크로시스템 | DMIL LED | 모든 제작 적합한 |
| 디지털 수조 | Fisher Scientific | 2239 | 모든 제조사 적합한 |
| ToughCut Fine 수술 용 가위 | Fine Science Tools | 14058-11 | 25mm 절삭 날, 11.5cm 길이; 팁 : 날카롭고 날카롭습니다. 팁 모양: 직선 |
| 마이크로 해부 겸자 4 1/4 in. | Biomed Res Instruments, Inc | 10-1760 | 곡선 팁 |
| 플렉시글라스 보드 5 인치 x 7 인치. | 모든 출처 적합 | n/a | 모든 제작 또한 적합한 |
| 육각형 폴리스티렌 계량 접시 | Fisher Scientific | 02-2002-100 | 모든 제작 또한 적합한 |
| 면도날 | Fisher Scientific | 12-640 | 단일 모서리 탄소강 0.009 |
| 거즈 스폰지 4 x 4 in. 8 플라이 | Fisher Scientific | MSD-1400250 | |
| 10x 농축 인산염 완충 식염수(PBS) | Sigma Aldrich | P5493-4L | 은 1배로 희석합니다. |
| 6 N 하이드로콜린산 용액 | Sigma Aldrich | 3750-32 | |
| 15 mL 원추형 원심분리기 튜브 | Fisher Scientific | 14-959-70C | 모든 제작 |
| 50 mL 원추형 원심분리기 튜브 | Fisher Scientific | 14-959-49A | 모든 제작 또한 적합한 |
| 일회용 5 mL 주사기 | Cole Palmer | EW-07944-06 | 모든 제작 또한 적합한 |
| 18G1.5 일회용 바늘 | Fisher Scientific | 14-826-5D | 모든 제조사 적합 |
| 21G1.5 일회용 바늘 | Fisher Scientific | 14-826-5B | 모든 제조사 |
| 12-웰 다중 웰 세포 배양 플레이트 뚜껑 Cole | Palmer | #FW-01959-06 | 모든 제조사 |
| 적합 폴리프로필렌 모듈식 시험관 랙 | Cole Palmer | #EW-06733-00 | 15 및 50 mL 코니컬 튜브 수용 가능; 모든 것이 또한 적합합니다. |
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