방법 논문

림프 내 피 세포의 흐름 Cytometric 분석 Murine 간 소화

DOI:

10.3791/58621

⸱

2019년 1월 7일

 ,  , 
1Division of Gastroenterology and Hepatology, Department of Medicine, University of Colorado Anschutz Medical Campus, School of Medicine, 2Department of Immunology and Microbiology, University of Colorado Anschutz Medical Campus

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 프로토콜의 목표 설명된 마커를 사용 하 여 간 내 림프 내 피 세포 인구를 식별 하는 것입니다. 우리는 콜라 IV 및 DNase 및 조직, 림프 내 피 세포의 명료한 인구를 식별 하기 위해 cytometry와 결합의 부드러운 닦지를 이용 한다.

초록

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

간, 내 림프 혈관 포털 깡패 내에서 발견 되 고 그들의 설명한 기능 세포 파편과 항을 조사 수 있는 림프절을 간에서 틈새 액체를 제거 하는. 우리는 림프 맥 관 구조 염증 및 간 내에서 면역 세포 기능에 관여 하는 수도 있습니다 어떻게 이해에 매우 관심이 다입니다. 그러나, 아주 작은 게시 된 간 또는 간 평가 하는 데 사용할 수 있는 특정 마커 (LECs)의 림프 내 피 세포의 고립에 대 한 소화 프로토콜 설정 LECs 당 셀 기준. 따라서, 우리는 소화와 간에서 LEC 인구를 평가 하기 위해 간 얼룩에 대 한 방법을 최적화 합니다. 우리는 여기에 설명 된 방법을 식별 및 간에서 LECs의 격리에 대 한 도움이 될 것입니다 LECs 간 microenvironment에 대응 하는 방법에 대 한 우리의 이해를 강화할 것 이다 확신.

서론

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

간에서 림프 혈관 및 LECs의 역할은 잘 이해 되지. 림프 혈관 간1 의 포털 3 인조 내의 질병2중 확장 하는 동안 아주 작은 기능 및 간 내 LECs의 표현 형에 관한 이해 된다. LECs3에 주로 발견 되는 마커의 발견과 항상성 및 질병에 다른 조직 틈새 내의 이러한 셀의 중요성 우리의 이해에 중요 한 격차를 채울 것입니다. LECs는 T 세포4,,56,7,8, 와 직접 상호 작용 하 여 림프 노드 및 전이성 종양 주변 공차를 유지 하는 주요 역할 9 , 10 , 11 , 12 , 13. 림프 노드에서 LECs 철새 수지상 세포14,,1516와 그들의 상호 작용을 통해 보호 면역을 홍보할 수 있습니다. 따라서, 특정 조직에 있는 그들은 존재 하는 상호 작용 수 있는 LECs에 대 한 여러 역할이 있습니다. 그러나, 아주 작은 LECs 조직에서 면역 세포 상호 작용 하는 방법 또는 다른 기관 체계; LECs 작동 하는 방법에 대 한 이해는 따라서, 간 또는 다른 장기에서 세포 당 기준 LECs 평가 어떻게 LECs 조직 특정 면역 프로그램에서 발생할 수 있습니다. 문학에 초점을 맞춘 LECs 간에서 많이 LECs 하나 또는 두 개의 마커 및 형태학17를 사용 하 여 시각화를 현미경을 사용 하 여, 하는 동안 아주 작은 일 하고있다 특히 cytometry, 비록 한 연구를 사용 하 여 셀에 의해 셀 별로 LECs를 평가 하 한 간 사인 내 피 세포 (LSECs), LECs18간의 차이 평가. Cytometry 여 간에서 LEC 인구를 분석할 수 있는 정상적인 항상성 또는 질병 동안 LEC 표현 형의 심도 있는 연구에 대 한 수 있습니다.

LECs cytometry로를 평가 하려면 여러 표면 마커 필요 합니다. 일반적으로, LECs 지주 님 관련 homeobox 1의 표현 (Prox-1), 림프 혈관 내 피 hyaluronan 수용 체 1 (LYVE1) 또는 혈관 내 피 성장 인자 수용 체 3 (VEGFR3) 현미경을 사용 하 여 시각화 됩니다. 그러나,이 간,이 마커의 식 LECs 제한 되지 않습니다. Prox 1 널리 간 개발, 재생, 및 부상19, hepatocytes에 의해 표현 하 고 LYVE1 및 VEGFR318간 사인 내 피 세포 의해 표현 됩니다. 림프절, LECs cytometry 차별화 (CD)의 클러스터로 사용 하 여 식별 됩니다 CD45-CD31 +, podoplanin + (PDPN)16. 그러나,이 방법은 너무 CD45-CD31 + 세포는 내 피 세포와 간에서 혈관 내 피 세포의 주된 인구는 LSECs 이후 간에서 LECs을 최소 이다. 따라서, 다른 마커는 풍부한 LSEC 인구에서 드문 LEC 인구 구분 필요 합니다. CD16/32 (성숙 LSECs18에 의해 표현)와 CD146 (일반적인 혈관 내 피 세포 마커를 주로 림프 여 식이 없는 거의 간 사인 내 피 세포20 여 간 사인 내 표현 내 피 세포21) 후보 마커를 했다.

따라서, 우리는 분리 하 고 간 cytometry에 대 한 위의 마커, CD45, CD31, CD146, CD16/32, 및 PDPN를 사용 하 여에서 LECs을 시각화 하는 방법을 최적화 합니다. 우리는 콜라 4의 사용, DNase 1, 및 단일 셀 서 스 펜 션에 간 조직 소화에 대 한 기계적 분리 설명합니다. 우리는 또한 세포질 파편을 제거 하 고 비 parenchymal 세포 (NPC)의 분리에 대 한 iodixanol 밀도 그라디언트를 사용 하 여를 설명 합니다. 주된 마커로 PDPN 간에서 LECs을 식별 하는 최적의 흐름 cytometry 제어 전략을 결정 마지막으로, 여러 개의 마커를 사용 하 여, 우리.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

여기에 설명 된 모든 메서드는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 콜로라도 대학 Anschutz 의료 캠퍼스의 승인 되었습니다.

1입니다. 자료의 준비

  1. 5 mg/mL 솔루션 DNase의 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)에 내가.
  2. 클릭의 EHAA 미디어 콜라 IV의 5000 U/mL을 추가 하 여 소화 혼합물 을 확인 합니다.
  3. 사용 하기 30 분 전에 37 ° C에서 소화 혼합 따뜻한.
  4. 4.8% 소 혈 청 알 부 민 (BSA)와 행 크 스를 2 mM ethylenediaminetetraacetic 산 (EDTA) 균형 소금물 (HBSS) 추가 하 여 절연 버퍼 를 확인 합니다.
  5. 염화 암모늄 100 mM, 10 mM KHCO3및 0.1 m m EDTA를 H2o. 소 주를 추가 하 여 적혈구 (RBC) 세포의 용 해 버퍼를 확인

2. 마우스 간에서 단일 세포 현 탁 액의 준비

  1. CO2 와 자 궁 경부 전위 마우스 안락사
  2. 그것의 모피를 젖은 70% 에탄올과 마우스 아래로 스프레이. 마우스의 고정 해 부 보드 발.
  3. 해 부가 위를 사용 하 여 피부 피부 (약 1 m m)만 극복 하 게 주의 되 고 항문 위에 약 1cm를 잘라. 이빨된 집게와 몸 떨어져 피부를 당겨 하 고 피부와 복 막 사이 위를 삽입 합니다. 복에서 피부를 분리 하 고, 다음, 목에 절 개에서 피부를 잘라가 위를 엽니다.
  4. 각각의 팔 아래 및 각 다리 위에서 하나의 핀을 사용 하 여 해 부 보드에 피부를 고정 합니다. 복 주머니를 올려 고 목으로 위쪽으로 잘라. 간 엽을 흉 골 바로 아래를 잘라.
    참고: 한다 주의 간의 immunohistochemistry (IHC) 사용 될 것입니다.
  5. 간 주위와 마우스에서 간 제거 잘라내어 클릭의 EHAA 미디어의 4 mL에 배치.
  6. 메스를 사용 하 여 간 ~ 1 m m에서 직경 조각 잘라.
  7. 추가 소화 혼합물의 500 µ L 500 µ L는 DNase의 간 난 (2 mg/mL).
  8. 37 ° c.에 30 분 간 품 어 15 분 후 5 mL 피 펫을 사용 하 여 액체 믹스.
  9. 외피의 30 분 후 50 mL 원뿔 튜브를 100 µ m 스 트레이너를 통해 소화 샘플을 전송.
  10. 부드럽게 필터 1 mL 주사기의 플런저를 통해 남은 조각을 밀어.
  11. 절연 버퍼의 5 mL로 필터를 세척 하 고 1 mL 주사기에서 조직 플런저의 뒷면으로 스 트레이너를 통해 가볍게 눌러. 이 필터는 절연 버퍼의 25 mL로 씻어 때까지 반복 합니다.
  12. 5 분은 신중 하 게는 상쾌한에서 발음에 대 한 400 x g 에서 세포를 원심.
  13. RBC 세포의 용 해 버퍼의 4 mL와 펠 릿 resuspend 5 분 동안 실내 온도에 세포를 품 어.
  14. 절연 버퍼 및 5 분에 대 한 400 x g 에서 원심 분리기의 10 mL로 세포 세척.
  15. 전체 간 수를 확인 하려면 hemocytometer 셀을 계산 합니다.
  16. Resuspend 20 %iodixanol 5 ml에서는 세포 고 1 mL의 PBS로 레이어.
  17. 세포는 브레이크 없이 15 분 300 x g 에서 원심
  18. PBS는 iodixanol 사이 레이어를 제거 하 고 새로운 50 mL 원뿔 튜브로 100 µ m 필터를 통해 그들을 배치.
  19. 절연 버퍼 및 5 분에 대 한 400 x g 에서 원심 분리기의 10 mL로 세포 세척.
  20. 삭제는 상쾌한 고 2% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 PBS의 500 µ L에 셀 resuspend.

3. 간에서 단일 세포의 Cytometric 분석 흐름

  1. Hemocytometer 고 trypan 블루 제외를 사용 하 여 측정 가능한 세포를 현미경을 사용 하 여 셀을 계산 합니다. Trypan 블루의 10 µ L를 셀의 10 µ L을 추가 하 고 즉시는 hemocytometer에 넣어 현미경 (하지 블루) 라이브 셀. 그런 다음, microliter 당 셀의 수를 계산 합니다.
  2. 약 수 약 5 백만 96 잘 접시의 단일 우물으로 남아 있는 nonparenchymal 세포의.
  3. 5 분에 대 한 400 x g 에서 셀 원심
  4. 삭제는 상쾌한 고 2%와 PBS의 90 µ L 셀 resuspend FBS.
  5. 안티-CD45 (1: 200), 안티-CD146 (1: 200), 안티-CD31 (1: 200)을 추가 하 고 PDPN (1: 200) 2.4G2 또는 안티-CD16/32 (1: 200) x 10의 10 µ L에 희석.
    참고: 안티 CD16/32-표시 된 항 체 사용 되었다 때 아니 Fc 블록 (2.4G2) 사용 되었다.
  6. 긍정적이 고 부정적인 게이츠 설정할 위치를 확인 하려면 각 색상 및 항 체 isotype 컨트롤 1 (FMO) 얼룩 빼기 형광을 포함 합니다.
  7. 라이브 대 죽은 세포를 확인 하려면 생존 표시 (예, 귀신 빨간 780)와 함께 얼룩. 30 분 동안 4 ° C에서 세포를 품 어.
  8. 2%와 PBS의 100 µ L로 세포 세척 FBS.
  9. 셀의 작은 약 수를 사용 하 여 교류 cytometer에서 레이저와 보상 설정을 조정할. 각 개별 fluorophore와 어떤 항 체 없이 하나의 항 체와 세포 얼룩.
    참고: 사용 되 고 교류 cytometer 따라 보상 매트릭스 스펙트럼 중복 제거를 설립 되어야 합니다.
  10. Cytometer 프로브에 샘플 튜브를 배치 하 고 수집 하 고 모든 이벤트를 기록.

4. 데이터 분석

  1. 측면-분산형 지역 대 앞으로 피해 지역에서 찾고, 크기와 단위 생존 마커 염료에 따라 "라이브" 셀 게이트.
  2. 다음, CD45 화려한 바이올렛 510과 CD31 PerCp Cy5.5, CD45-CD31 + 셀을 긍정적이 고 부정적인 인구 isotype 컨트롤 및 FMO를 사용 하 여 게이트를 사용 합니다.
  3. 마지막으로, CD146-PDPN + 또는 CD16/32를 걸릴 CD146 v450 또는 CD16/32 FITC와 PDPN APC를 사용 하 여-PDPN + 셀, 사용 하 여 다시 isotype 컨트롤 및 FMO, 긍정적이 고 부정적인 인구 확인 하. 이 세포는 LECs는.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

간 lymphatics를 분석 하는 연구는 주로 주파수와 간에서 림프 혈관의 직경을 quantitate 하 immunohistochemistry를 사용 됩니다. 그러나,이 메서드는 셀에 의해 셀 기준 LECs의 평가 대 한 또는 여러 마커, cytokines, 발산, 또는 녹음 방송 요인의 표현에 대 한 허용 하지 않습니다. 따라서, 우리는 물었다 간 여부 LECs 간 으로부터 격리 될 수 있고 cytometry 사용 하 여 평가. 림프절 LECs 분리 이전 작업 Liberase DL (콜라 나-II-및-dispase)와 DNase 1 바늘14,16림프절 조직의 기계적 분리와 결합을 사용 하 여 수행 되었다. 따라서, 간 조직에 동일한 소화 프로토콜 사용 되었다 또는 콜라 IV 및 DNase 1 간22 에서 면역 세포 격리에...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

빛25LECs의 전반적인 중요성 면역 항상성 그리고 규칙에 최근에 왔다. 게시 된 림프 문학의 많은 피부와 림프절;에 초점을 맞추고합니다 그러나, lymphatics26 신체 걸쳐 발견 되 고, 따라서, 다른 기관에 그들의 중요성의 우리의 이해는 필요 하다. 여기 우리가 다른 표면 마커, cytokines, 발산, 및 녹음 방송 요인 등 세포내 단백질의 그들의 동시 표현 이해 하기 셀에 의해 셀 기준 LECs에에서 공부 될 수 있다 메서드를 보여줍니다. 이 메서드는 미래 연구 건강 및 질병 표현 형 및 간에서 LECs의 기능 평가를 위해 유용할 것 이다.

간에서 LECs의 식별에 대 한 장애물 중 하나는 다른 세포 유형에 비해 상대적으로 낮은 주파수 이다. Hepatocytes 간, 그리고 제거 전에 실행 간 교류 cytometer에 적은 시간을 요구 하 고, 따라서, 더 나은 생존 능력을 제공...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 공개 없다.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자 기 및 간 타고 난 면역 프로그램이이 프로젝트의 통화 지원에 감사 하 고 싶습니다. B.A.J.T.는 또한 R01 AI121209에 의해 자금을.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
클릭 / EHAA 미디어Irvine Scientific9195
Collagenase IVWorthington Biochemical corporationLS004188
DNase IWorthington Biochemical corporationLS002145Deoxyribonuclease 1
OptiPrepSigma AldrichD1556Density Gradient Medium
V450 anti mouse CD146 (clone ME-9F1)BD biosciences562232
FITC 안티 마우스 CD146 (클론 ME-9F1)Biolegend134706Fluorescein isothiocyanate (FITC)
퍼시픽 블루 안티 마우스 CD31 (클론 390)Biolegend102422
PerCp / Cy5.5 안티 마우스 CD31 (클론 390)Biolegend102420페리디닌 - 엽록소 단백질 - 시아닌 5.5 (PerCP-Cy5.5)
APC 안티 마우스 PDPN (클론 8.1.1)Biolegend127410Allophycocyanin (APC), podoplanin (PDPN)
APC / Cy7 안티 마우스 CD45 (클론 30-F11)Biolegend103116
Brilliant Violet 510 안티 마우스 CD45 (클론 30-F11)Biolegend103138
FITC 안티 마우스 CD16 / 32 (클론 93)Biolegend101306Fluorescein isothiocyanate (FITC)
PerCp / Cy5.5 안티 마우스 CD16 / 32 (클론 93)Biolegend101324페리디닌 - 엽록소 단백질 - 시아닌 5.5 (PerCP-Cy5.5)
고스트 레드 780 생존 염료TONBO biosceinces3-0865-T100
APC 시리아 햄스터 IgG (클론 SHG-1)Biolegened402102
PerCp / Cy5.5 쥐 IgG2a (클론 RTK2758)Biolegend400531
FITC 쥐 IgG2 (클론 eBR2a)ebioscience1-4321-80
안티 마우스 LYVE1 (클론 223322)R& D 시스템FAB2125A
안티 마우스 사이토 케라틴 (클론 EPR17078)abcamab181598
안티 마우스 F4 / 80 (클론 Cl : A3-1)Bio-radMCA497
BSA (fraction V)FischerBP1600-100소 혈청 알부민 (BSA)
염소 혈청잭슨 Immunoresearch017-000-121
당나귀 혈청잭슨 Immunoresearch017-000-121
EDTAVWRE177에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA) -RBC 용해 완충액용
염화암모늄피셔A687-500RBC 용해 완충액
중탄산칼피셔P184-500적혈구 용해 완충액
ScalpelFeather2975#21
100 μ m 세포 스트레이너Fischer22363549
2.4G2in house/ATCCATCC HB-197FC 블록으로 Fc 감마 + 세포에 대한 비특이적 결합을 억제 - 하이브리도마로 만든
인산염 완충 식염수(PBS)코닝21-040-CV
행크스 평형 염 용액(HBSS)Gibco14185-052
소 태아 혈청(FBS)애틀랜타 생물학 제제S11550
96 웰 플레이트Corning3788
6 웰 플레이트Corning3506
50 mL 원추형TrulineTR2004
15 mL 원뿔Falcon352196
1 mL 피펫 팁USA scientific1111-2721
200 µ L 피펫 팁미국 과학1110-1700
10 &마이크로; L 피펫 팁USA scientific1111-3700
혈청학 10 mL 피펫그라이너 바이오 원607107
혈청 5 mL 피펫그라이너 바이오 원606107
세포 배양기FischerHeracell 160i
BD FacsCanto II 유세포 분석기BD biosciences
임상 원심 분리기Beckman 쿨터모델 X-14R
륨 형

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tanaka, M., Iwakiri, Y. Lymphatics in the liver. Current Opinion in Immunology. 53, 137-142 (2018).
  2. Vollmar, B., Wolf, B., Siegmund, S., Katsen, A. D., Menger, M. D. Lymph vessel expansion and function in the development of hepatic fibrosis and cirrhosis. The American Journal of Pathology. 151 (1), 169-175 (1997).
  3. Podgrabinska, S., et al. Molecular characterization of lymphatic endothelial cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (25), 16069-16074 (2002).
  4. Cohen, J. N., et al. Lymph node-resident lymphatic endothelial cells mediate peripheral tolerance via Aire-independent direct antigen presentation. Journal of Experimental Medicine. 207 (4), 681-688 (2010).
  5. Cohen, J. N., et al. Tolerogenic properties of lymphatic endothelial cells are controlled by the lymph node microenvironment. PLoS One. 9 (2), e87740(2014).
  6. Rouhani, S. J., et al. Roles of lymphatic endothelial cells expressing peripheral tissue antigens in CD4 T-cell tolerance induction. Nature Communications. 6, 6771(2015).
  7. Tewalt, E. F., et al. Lymphatic endothelial cells induce tolerance via PD-L1 and lack of costimulation leading to high-level PD-1 expression on CD8 T cells. Blood. 120 (24), 4772-4782 (2012).
  8. Dubrot, J., et al. Lymph node stromal cells acquire peptide-MHCII complexes from dendritic cells and induce antigen-specific CD4(+) T cell tolerance. Journal of Experimental Medicine. 211 (6), 1153-1166 (2014).
  9. Hirosue, S., et al. Steady-state antigen scavenging, cross-presentation, and CD8+ T cell priming: a new role for lymphatic endothelial cells. Journal of Immunology. 192 (11), 5002-5011 (2014).
  10. Lund, A. W., et al. VEGF-C promotes immune tolerance in B16 melanomas and cross-presentation of tumor antigen by lymph node lymphatics. Cell Reports. 1 (3), 191-199 (2012).
  11. Lund, A. W., et al. Lymphatic vessels regulate immune microenvironments in human and murine melanoma. Journal of Clinical Investigation. 126 (9), 3389-3402 (2016).
  12. Swartz, M. A. Immunomodulatory roles of lymphatic vessels in cancer progression. Cancer Immunology Research. 2 (8), 701-707 (2014).
  13. Dietrich, T., et al. Cutting edge: lymphatic vessels, not blood vessels, primarily mediate immune rejections after transplantation. Journal of Immunology. 184 (2), 535-539 (2010).
  14. Kedl, R., et al. Migratory Dendritic Cells acquire archived antigen from Lymphatic Endothelial Cells for antigen presentation during lymph node contraction. Nature Communications. 8, 2034(2017).
  15. Kedl, R. M., Tamburini, B. A. Antigen archiving by lymph node stroma: A novel function for the lymphatic endothelium. European Journal of Immunology. 45 (10), 2721-2729 (2015).
  16. Tamburini, B. A., Burchill, M. A., Kedl, R. M. Antigen capture and archiving by lymphatic endothelial cells following vaccination or viral infection. Nature Communications. 5, 3989(2014).
  17. Yokomori, H., et al. Lymphatic marker podoplanin/D2-40 in human advanced cirrhotic liver--re-evaluations of microlymphatic abnormalities. BMC Gastroenterology. 10, 131(2010).
  18. Nonaka, H., Tanaka, M., Suzuki, K., Miyajima, A. Development of murine hepatic sinusoidal endothelial cells characterized by the expression of hyaluronan receptors. Developmental Dynamics. 236 (8), 2258-2267 (2007).
  19. Dudas, J., et al. Prospero-related homeobox 1 (Prox1) is a stable hepatocyte marker during liver development, injury and regeneration, and is absent from "oval cells". Histochemistry and Cell Biology. 126 (5), 549-562 (2006).
  20. Schrage, A., et al. Murine CD146 is widely expressed on endothelial cells and is recognized by the monoclonal antibody ME-9F1. Histochemistry and Cell Biology. 129 (4), 441-451 (2008).
  21. Amatschek, S., et al. Blood and lymphatic endothelial cell-specific differentiation programs are stringently controlled by the tissue environment. Blood. 109 (11), 4777-4785 (2007).
  22. Huang, L., Soldevila, G., Leeker, M., Flavell, R., Crispe, I. N. The liver eliminates T cells undergoing antigen-triggered apoptosis in vivo. Immunity. 1 (9), 741-749 (1994).
  23. Shay, T., Kang, J. Immunological Genome Project and systems immunology. Trends in Immunology. 34 (12), 602-609 (2013).
  24. Li, B., et al. Adult Mouse Liver Contains Two Distinct Populations of Cholangiocytes. Stem Cell Reports. 9 (2), 478-489 (2017).
  25. Randolph, G. J., Ivanov, S., Zinselmeyer, B. H., Scallan, J. P. The Lymphatic System: Integral Roles in Immunity. Annual Review of Immunology. 35, 31-52 (2016).
  26. Olszewski, W. L. The lymphatic system in body homeostasis: physiological conditions. Lymphatic Research and Biology. 1 (1), discussion 21-14 11-21 (2003).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청

허가 요청

태그

PodoplaninCD45 CD31

관련 논문