정자 세포 막의 평가 대 한 Fluorimetric 기법

Alisa Komsky-Elbaz; Zvi Roth

doi:10.3791/58622

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방법 논문

정자 세포 막의 평가 대 한 Fluorimetric 기법

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DOI:

10.3791/58622

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2018년 11월 28일

Alisa Komsky-Elbaz¹^,² , Zvi Roth¹^,²

¹Animal Sperm Research Center, Department of Animal Sciences, Robert H. Smith Faculty of Agriculture, Food and Environment, Hebrew University of Jerusalem, ²Department of Animal Sciences, Robert H. Smith Faculty of Agriculture, Food and Environment, Hebrew University of Jerusalem

이 논문에서

요약

여기, 우리는 spermatozoan 막 무결성, 정자의 수정 능력와 관련 된 세포 기능을 평가 하는 방법론을 제시. 우리 정자 세포 막의 fluorimetric 평가 대 한 세 가지 기술에 설명: 특정 형광 프로브, 형광 현미경 검사 법, 그리고 고급 정자 전용 cytometry 동시 얼룩. 방법론을 결합의 예제도 제공 됩니다.

초록

정자의 품질을 설명 하는 표준 spermiograms 주로 생리 및 시각적 매개 변수, 사정 및 농도, 운동 성 및 진보적인 운동 성, 정자 형태 및 생존 능력 등 기준으로 합니다. 그러나, 이러한 평가은 충분히 정액 질을 예측 하는 좋은입니다. 그의 정자 생존 및 잠재적인 수정 유지 보수 막 무결성 및 세포내 기능에 따라, 이러한 매개 변수 평가 수 가능 정자의 수정 능력의 더 나은 예측 여기, 형광 현미경 검사 법 또는 흐름 cytometry 분석 결합 된 특정 형광 프로브를 사용 하 여 정자의 품질을 평가 하 세 가지 가능한 방법을 설명 합니다. 분석 평가 플라즈마 멤브레인 무결성 4', 6-diamidino-2-phenylindole를 사용 하 여 (DAPI) 및 propidium 요오드 화물 (PI), acrosomal 막 무결성 fluorescein isothiocyanate 활용을 사용 하 여 Pisum sativum agglutinin (FITC-PSA) 및 미토 콘 드 리아 멤브레인 무결성 사용 하 여 5, 5' 6, 6'-tetra-클로-1, 1', 3, 3'-tetraethylbenzimidazolyl carbocyanine 요오드 화물 (JC-1). 이러한 방법의 조합 또한 제공 됩니다. 예를 들어, annexin V의 사용 apoptosis를 평가 하 고 apoptotic 정자 (apoptotic 인덱스)의 비율을 계산 PI 형광 수와 결합. 우리 정자 막 검사에 근거 하는 이러한 방법론은 정자 품질 평가 대 한 매우 유용 합니다 믿습니다.

서론

정자 세포 막의 기능과 무결성 정자 생존 및 수정 가능성를 나타내는 요인 중 몇 가지 있습니다. 원형질 막 세포 삼 투 평형¹유지 세포내와 세포 외 구획 사이 방 벽 역할을 합니다. 원형질 막 무결성에 손상을 유도 스트레스 항상성 손상, 생존 능력 및 수정 능력을 감소 되 고 증가 세포 죽음. 예를 들어, cryopreservation 온도 변화 및 삼투성 스트레스²결과로 그것의 원형질 막에 손상에 인해 정자 생존 능력을 감소 시킨다. 우리는 이전 그 정자 생존¹^,^{3 감소 불 정자 농약 아트 가진, 그것의 주요 대사 산물 diaminochlorotriazine 등 mycotoxin 아플 라 톡 신 B1, 식중독 오염 물질의 낮은 농도에 노출 보고}. 이 손상 된 원형질 막 세포의 DNA에는 PI와 함께에서 DAPI와 이중 가닥 DNA 라벨 의해 결정 되었다.

Acrosome 반응 (AR) 외부 acrosome 막 및 acrosomal 효소⁴^,⁵의 출시....