Vivo에서 실크/AAV 영화를 사용 하 여 Optogenetic 단백질의 표적으로 표현

요약

여기, 우리는 바이러스 성 식 벡터 실크 fibroin 영화를 사용 하 여 뇌에 전달 하는 방법을 제시. 이 메서드는 식 벡터 실크/AAV 코팅된 광섬유, 광섬유 테이퍼 및 두개골 창 사용의 대상된 배달 수 있습니다.

초록

드라이브 동작 출력 하기 위해서는 프로세스 정보를 크게 조작 하 고 신경 비보의 활동을 모니터링에 대 한 최근 개발 된 광학 방법으로 지원 되었습니다 어떻게 신경 회로 이해 하는 탐구. 두 가지 주요 구성 요소에 의존 하는 이러한 유형의 실험: 두뇌에 광 액세스를 제공 하는 1) 이식 장치 및 신경 흥분을 변경 또는 신경 활동의 판독을 제공 하는 2) 빛에 민감한 단백질. 빛에 민감한 단백질을 표현 하는 방법의 수 있지만 바이러스 성 벡터의 stereotaxic 주입은 현재 가장 유연한 접근 식 유전, 해부학, 그리고 시간적 정밀도로 제어할 수 있기 때문에. 바이러스 성 벡터의 위대한 유틸리티에 불구 하 고 제공 하는 바이러스 광학 임 플 란 트 포즈의 사이트에 수많은 도전을. Stereotaxic 바이러스 주사는 수술 수술 시간을 증가, 연구, 비용 증가 및 동물의 건강에 위험이 포즈를 요구 하 고 있다. 주입 주사기와 높은 titer 바이러스의 bolus의 갑작스러운 납품으로 인 한 면역성 염증 주변 조직은 물리적으로 손상 될 수 있습니다. 작은 영역을 대상으로 주사 광학 임 플 란 트를 정렬 하는 것은 특히 어려운 뇌에 깊은. 이러한 과제를 극복 하기 위해 여러 유형의 영화 실크 fibroin 및 Adeno 관련 바이러스 (AAV) 벡터의 구성된으로 광학 임 플 란 트를 코팅 하는 방법을 설명 합니다. Fibroin, 누에나방, 누에고치에서 파생 된 폴리머 캡슐화 할 수 있습니다 및 생체를 보호 하 고 수용 성 필름에서 도자기까지 양식에 처리할 수 있습니다. 뇌에 이식, 실크/AAV 코팅 식이 필요한 곳에 정확 하 게 운전 하는 광학 요소와 주변 뇌 사이의 인터페이스에서 바이러스를 해제 합니다. 이 메서드는 쉽게 구현 되며 크게 신경 회로 기능 vivo에서 연구를 촉진 하는 약속.

서론

지난 10 년간 모니터링 및 신경 활동¹조작에 대 한 설계 빛에 민감한 단백질의 폭발을 생산 하고있다. 바이러스는 뇌에서 이러한 optogenetic 도구를 표현 하기 위한 탁월한 유연성을 제공 합니다. 유전자 변형 동물에 비해, 바이러스까지 쉽게 생산, 수송, 저장, 최신 optogenetic 도구 빠른 구현을 허용 하는. 식 유전자 뚜렷한 신경 인구를 대상 수 있습니다 그리고 역행 수송을 위해 고안 된 바이러스도 대상으로 신경 연결²를 기반으로 식에 사용할 수 있습니다.

바이러스는 일반적으로 시간이 많이 걸리는 및 어려운 수 stereotaxic 주사와 함께 도입 됩니다. 정확 하 게 작은 영역을 대상으로 어려울 수 있습니다, 하지만 종종 넓은 지역에 식 운전 많은 주사. 또한, 광학 장치 이후에 빛 vivo에서제공 하는 두뇌에 심은 경우는 임 플 란 트 정렬 되어야 합니다 제대로 바이러스 주입으로. 여기, 이식된 장치 실크 fibroin 영화³를 사용 하 여 주위 조직에 바이러스 성 벡터를 제공 하기 위한 쉽게 구현 하는 방법을 설명 합니다. 실크 fibroin 상용, 신경 조직에 의해 잘 용납 이며 다양 한 특성을 가진 재료를 생산 하는데 사용 될 수 있습니다. 실크 영화 microinjection 펫 같은 일반적인 실험실 장비를 사용 하 여 임 플 란 트에 적용할 수 또는 펫 손. 실크/AAV 영화 두 수술 절차에 대 한 요구를 제거 하 고 바이러스 중재 식 광학 임 플 란 트에 제대로 정렬입니다. 결과 식이 섬유, 그리고 stereotaxic 주사 보다 섬유 트랙을 따라 덜 원치 않는 식에는 결과의 끝에 제한 됩니다.

대상된 표현의 끝에 작은 섬유 생산, 뿐만 아니라 실크/AAV 영화를 광범위 하 게 사용할 수 있습니다 (> 3 m m 직경) 두개골 창 아래 피 질 식. 형광 활동 센서의 2 광자 영상 vivo에서 감각 및 인지 처리 운전에 신경 활동의 역할을 평가 하기 위한 필수적인 도구 되고있다. 그러나, 동일한 드라이브에 광범위 한 대뇌 피 질의 영역, 자주 경험 식 여러 주사를 수행 합니다. 이러한 주사 매우 시간이 오래 걸릴 수 있으며 보기의 필드에 걸쳐 일치 하지 않는 식으로 이어질 수 있습니다. 반면, 실크/AAV 코팅 두개골 윈도우는 매우 쉽게 제조, 크게 수술에 필요한 시간을 줄일 수 및 가장 눈에 띄게 표현 수백 미크론 대뇌 피 질의 표면 아래 드라이브.

프로토콜

동물을 포함 하는 모든 실험 동물 관리 미국 NIH 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드에 설명 된 다음 지침에 하버드 상임 위원회에 의해 승인 하는 프로토콜에 따라 수행 했다. 성인 C57BL/6 마우스 중 섹스 (나이의 6-15 주)의 모든 실험을 위해 사용 되었다.

1. 수성 실크 Fibroin을 구하십시오

1. 준비 하거나 수성 실크 fibroin (5-7.5 %w / v)을 구입 합니다.

2. AAV 식 벡터와 수성 실크 믹스

1. AAV 식 벡터 optogenetic 단백질 또는 선택의 형광 표시기를 선택 합니다.
   참고: 여전히 강력한 식 운전 하면서 임 플 란 트를 적용 해야 하는 실크/AAV의 볼륨을 최소화 하기 위해 주식 titer AAV (재고는 10 ~¹³ gc/mL 주위에 일반적으로 벡터 코어에서 얻은 titers) 것이 좋습니다.
2. 코팅 임 플 란 트, 직전 AAV의 약 수를 해 동 하 고 5-7.5% 수성 실크 fibroin (이 혼합물 것 이다 라고도 실크/AAV) 결합. 200 µ L PCR 튜브에 믹스 수성 fibroin AAV (두개골 windows 사용 1:4)에 대 한 1:1 비율로 응용 프로그램 직전. 부드럽게 플라스틱 솔루션 여러 번 밖으로 철저히 fibroin AAV를 믹스 하.
3. 얼음에 실크/AAV 혼합물 계속 사용 하기 전에.

3. 제조 및 실크/AAV 코팅 장치 저장 장비 준비

1. 코팅 광섬유 및 그라데이션 인덱스 (미소) 렌즈 (그림 1, 2)에 대 한 장비를 조달.
   1. 안정적인 아무 홀더를 생성 합니다. 잡고 세라믹 깃 봉, ¼"시트 아크릴 블록에 1.25 m m 구멍을 드릴 합니다. 구멍 세트 나사 장소에 깃 봉 잡아 측면에서 삽입을 누릅니다.
      참고: 어떤 클램프는이 목적을 위해 사용할 수 있습니다.
   2. 서브 밀리미터 정밀도 광학 섬유 (stereotaxic 장치 또는 다른 정밀 micromanipulator)를 이동 하는 조작 위치.
   3. 안정적인 홀더는 microinjector를 조립.
   4. 광학 섬유와 실크 물방울을 시각화 하는 stereoscope를 사용 합니다.
   5. 광학 섬유 조명 광원을 배치 합니다.
2. 두개골 창 (그림 3) 코팅 장비를 준비 합니다.
   1. 어떤 P10 pipettor를 선택 합니다.
   2. 뚜껑이 있는 컨테이너를 가져옵니다.
      참고: 실리콘 바닥 어떤 콘테이너 든 지 제안-부드러운 바닥 용이 두개골 윈도우를 해제.
3. 완성 된 보 형 물 (그림 4)를 저장 하는 장비를 준비 합니다.
   1. 작은 (1-5 L) 진공 챔버를 얻을.
   2. 저장 공간을 4 ℃ 냉장고에 이식 되어 있는지 확인 합니다.

4. 장치를 실크/AAV 영화 적용

1. 섬유 끝에 드라이브 초점 식 광학 섬유 코팅
   1. 앞에서 설명한⁴만성 섬유 임 플 란 트를 준비 합니다.
   2. 사용 전에 린스 에탄올, 임 플 란 트 다음 되도록 초순 광학 섬유는 깨끗 합니다.
      참고: 실크 영화 유리 표면을 청소를 더 안정적으로 준수.
   3. 깃 봉 섬유를 장치를 준비 합니다. 전형적인 1.25 m m 직경 깃 봉, 사용 블록 ¼ 인치 명확한 아크릴, ~1.3 mm 구멍 및 구멍 임 플 란 트 (그림 1A) 장소에 단단히에 측면에서 입력 설정된 나사를 도청.
   4. 마운트는 microinjector 장착 stereotaxic 장치 (또는 어떤 조작 솔루션 submillimeter 정밀)으로 아무 홀더. 아무 소유자는 microinjector 위에 놓고 아래에서 실크/AAV 혼합물을 적용 합니다.
      참고: 응용 프로그램에서 대용량의 결과 끝에 제한 되었다 실크/AAV 때문입니다. 그러나, 많은 작은 순차 볼륨에서 위 또는 아래에의 응용 (비록 우리가 아래에서 적용 하는 것을 선호) 끝에 수감 되는 AAV/실크 예금 생성할 수 있습니다.
   5. 붕 규 산 유리에서 표준 intracranial 주입 피펫은 당겨 모 세관.
      1. 쉽게 하려면
      2. 원하는 직경의 깨끗 한 플랫 팁 주입 팁을 생성 하려면 각 손에 한 피 펫을 보유 하 고 한 피 펫에는 테이퍼의 두꺼운 부분을 사용 하 여 원하는 휴식 위치에서 다른 피 펫을 점수.
      3. 부드럽게 문 지 르와 톱 모션 (유리에 유리 채 점 방법).
      4. 피펫으로 득점 후 깨끗 한 휴식을 달성 하기 위해 다른 피 펫의 시체와 함께 득점된 피 펫의 끝에 부드러운 압력을 적용.
   6. 광섬유의 명확한 보기를 주고 stereoscope 위치.
      참고: 배율 광학 섬유의 얼굴 위에 주입 피펫으로 정확 하 게 위치 충분 해야 한다.
   7. 홀더 아래쪽으로 직면 하는 광섬유의 두뇌 측면에 섬유 임 플 란 트를 삽입 합니다.
   8. 모든 표준 intracranial 주입⁵실크/AAV 솔루션 주입 피 펫을 로드 합니다. 임 플 란 트 ~ 30% 손실 펫 막힘 때문에 맞게 추가 플러스 만들어지고 수에 필요한 금액을 로드 합니다. 예를 들어 10 이식 사항이 되 고, 다음 100 nL 예금 로드 하 고 ~1.3 µ L를 철회.
      참고: 실크/AAV 피펫으로 방해할 수 분출 사이 피 펫 끝에 건조 수 있습니다. 큰 직경 펫 (50-100 µ m) 덜 방해할 가능성이 있다. 나 막 신 젖은 종이 지우기 또는 알코올 면봉으로 피 펫의 끝 아래로 부드러운 칫 솔 질에 의해 dislodged 수 있습니다.
   9. 만지거나 거의 광섬유 화면 가운데의 감동까지 주입 피펫으로 기동. 실크/AAV 솔루션의 10-20 nL를 꺼냅니다. 피펫으로 철회.
      참고: 배달 속도가 중요 하지만 일반 요금은 5-20 nL/s.
   10. ~ 1 분 이내 평면 필름 건조 액체 돔으로 표시 되는 평평한 표면에 실크/AAV의 bolus 관찰 (그림 1B).
   11. 반복 단계 4.1.9-4.1.10 때까지 실크/AAV의 원하는 금액 입금 (대부분의 응용 프로그램에 대 한 20-200 nL의 총). 여러 개의 임 플 란 트를 준비할 때 한 임 플 란 트에 실크/AAV를 적용 하 고 반환 하기 전에 다른 임 플 란 트 코트 이동 첫 번째.
   12. 임 플 란 트를 이동 하기 전에 건조를 위한 1 시간을 허용 합니다.
   13. 진공 desiccate 하룻밤에 ~ 125 Torr (-25에. Hg), 4 ° c. 진공 챔버에 전체 아무 홀더를 배치 하 여 이렇게 합니다.
   14. 모양 및 고 전력 현미경 결과 실크 영화의 위치를 평가 합니다. 영화 광 표면 끝에 수감 된다, 상대적으로 얇은 것 (> 100 µ m), 및 대칭 (그림 1C).
       참고: 크거나 비대칭 실크/AAV 영화 수 분리 하십시오 섬유에서 이식 (그림 1D) 동안. 문제의 가장 일반적인 원인은 많은 작은 볼륨의 순차 응용 프로그램 보다는 하나의 큰 볼륨의 응용 프로그램에서 발생합니다.
2. 코팅 섬유 축 드라이브 식 광섬유 테이퍼
   1. 테이퍼 광섬유 임 플 란 트를 구하는 고 테이퍼 섬유는 인젝터 (그림 2A)에 수직이 되도록 옆으로 위치를 제외 하 고 단계 4.1.2-4.1.8를 수행 합니다. 인젝터를 테이퍼 섬유 위에 놓습니다.
      참고: 표면 장력 방울 주입 피 펫에 다시 하거나 마이그레이션할 테이퍼 섬유를 일으킬 경향이 있기 때문에 과제를 추가 로드 테이퍼 섬유 포즈에 액체 방울. 작은 사출 펫 (30-50 µ m 직경)이이 문제를 극복 하지만 주입 피펫으로 방해할 것입니다 위험을 증가 시킬 것을 도울. 표면 장력으로 인해 방울 큰 면적의 영역을 준수 하는 경향이, 그래서 최적의 주입 플라스틱 크기 테이퍼 섬유와의 가끔 덩어리에 대 한 허용 오차의 크기에 따라 달라 집니다.
   2. 광섬유의 측에 대하여 실크/AAV 주입 피펫으로 테이퍼의 시작 부분에 배치 합니다. 사출 피펫으로 광섬유를 만지고 있다 다는 것을 확인 하십시오.
   3. 20 꺼내기 코팅 과정을 시작 하려면 실크/AAV의 nL. 드롭릿에 광학 섬유에 고착, 섬유/피 펫의 인터페이스에 남아 확인 하십시오. 실크/AAV 마른로 부드럽게 섬유 끝의 끝으로 물방울을 심지 (~ 45 s). 피 펫 팁 막힘 방지 하려면 건조 작은 물방울 접촉 주입 피 펫을 계속.
      참고: 각 보증금 테이퍼 섬유 (그림 2B)의 약 400 µ m을 코트 한다.
   4. 첫 번째 bolus 거의 완전히 건조 했다, 또 다른 20를 꺼내기 nL 테이퍼 따라 물방울 wicking 계속.
      참고: 액체 실크 것입니다 준수 건조 실크 피펫으로로 작은 물방울의 한쪽 끝을 고정 테이퍼를 따라 이동.
   5. 적은 양의 실크/AAV, 꺼내기 및 점차적으로 테이퍼의 측면을 솔루션 그리기 여 4.2.4 단계를 반복 합니다. 5-6 분출은 2.5 m m 테이퍼의 표면을 통과 하기에 충분.
   6. 더 균일 한 표현의 모든 측면 주위 섬유를, 섬유를 회전 하 고 실크/AAV의 원하는 금액 입금 되었습니다 때까지 4.2.2-4.2.5 단계를 반복 합니다.
   7. 매달려 물가의 경우 건조 실크/AAV 섬유 팁, 신중 하 게가 위, 가닥을 잘라 확장 하거나 방출 피 펫을 사용 하 여 다시 가닥을 구 부 섬유의 테이퍼에 고착을 합니다.
   8. 임 플 란 트를 이동 하기 전에 건조를 위한 1 시간을 허용 합니다.
   9. 4 ° c.에서 진공 desiccate 하룻밤 전체 아무 홀더 진공 챔버에 놓일 수 있다.
   10. 모양 및 고 전력 현미경 결과 실크 영화의 위치를 평가 합니다.
       참고: 영화 완전히 균일 하지 않이 필요 하지만 이식 (그림 3C) 동안 조직 주위에 손상을 최소화 하기 위해 섬유의 표면 넘어 100 µ m를 확장 하는 요동 하지 말았어야. 필름 크기를 최소화 하려면 각 방울 이후의 예금 하기 전에 완전히 건조 하다 중요 하다.
3. 코팅 미소 렌즈 임 플 란 트
   1. 미소 렌즈^6,7 을 얻기 고 4.1.2-4.1.8 단계를 반복 합니다. 인젝터 위에 장착할 수 있습니다.
   2. 단일 방출 (1.0 m m 직경 렌즈에 대 한 1 µ L)에 실크/AAV를 입금.
      참고:이 렌즈의 얼굴에 고착 하 고 균일 한 필름 (100-200 µ m 두께) 생산 건조 액체의 돔을 얻을 것입니다. 그러나, 하나의 큰 방출 균일 하 게 건조 하 고 미소 렌즈의 가장자리 근처 두꺼운 필름을 생산 하 고, 그 시도 여러 작은 물방울 (100-200 nL) 입금 (입금 하기 전에 건조 각 방울 수 있도록 렌즈 표면의 중심에서 다음) 영화 보기의 필드의 중앙에 식 드라이브 것입니다 수 있도록.
   3. 임 플 란 트를 이동 하기 전에 건조를 위한 1 시간을 허용 합니다.
   4. 모양 및 영화는 렌즈의 표면을 커버 수 있도록 고 전력 현미경 결과 실크 영화의 위치를 평가 합니다.
4. 코팅 유리 두개골 창
   1. 준비 유리 접착 2 3 m m 직경에 의해 두개골 창 광학 접착제로 한 5 mm 직경 창 coverslips (제 1 두께) 라운드 (자세한 내용은 Goldey 외. 2014⁸참조).
   2. 실크: 바이러스 영화에서 실크의 총 금액을 줄이기 위해 1: 4의 비율로 섞는다. 과도 한 양의 실크 할 하지 이식 후 두개골 창 아래 분해 됩니다. 적정 실험 비율 및 원하는 식 프로필을 제공 하는 볼륨을 결정 해야 할 수 있습니다.
   3. 손 5 µ L 방울 3mm (뇌 연결) coverslip의 표면에 플라스틱. 드롭릿에 전체 유리 표면 (그림 3)에 밖으로 전파 한다.
   4. 윈도우를 이동 하기 전에 건조 하는 2-3 h를 하실 수 있습니다.

5. 저장 실크/AAV 코팅 임 플 란 트

1. (그림 4A)를 사용 하 여 전에 냉각된 진공 desiccator (125 ~ 하루, 4 ° C)에 실크/AAV 코팅 광섬유를 저장 합니다.
2. 대형 실크 영화 진공 저장 실패 완전히 이식 후 해산 두개골 창과 아래 진공, 미소 렌즈를 저장 하지 마십시오. 임 플 란 트 두개골 창과 미소 렌즈 즉시 건조 후, 또는 제조 대기압와 4 ° C에 저장 하는 경우의 하루

6. 이온 주입 장치

1. 앞에서 설명한⁴동물 임 플 란 트 수술에 대 한 준비.
   1. 간단히, 케 타 민/xylazine (100/10 mg/kg)의 복 주사와 쥐를 anesthetize 하 고 부드러운 발가락-핀치를 사용 하 여 마 취의 깊이 확인 합니다. 이식의 영역에서 두개골을 면도 하 고 요오드와 알코올 두 피를 청소.
   2. 산 동물 stereotaxic 장치와 산소와 isoflurane (1-2%)의 혼합물을 사용 하 여 보충 마 취에서. 관심의 영역 두 피에 절 개를 확인 하 고 수행 craniotomy 플을 수용할 수 있습니다.
2. 광학 섬유⁹ 와 microendoscope 렌즈¹⁰ 이전 게시 절차에 따라 이식. 핸들 식은 주의 실크/AAV 예금은 불완전 craniotomy, 또는 임 플 란 트 두개골의 가장자리에 의해 떨어져 나 수 있습니다로. 뇌에는 임 플 란 트를 천천히 낮은 (~ 2 m m/분).
3. ⁸이전 설명으로 임 플 란 트 두개골 창. 윈도우의 코팅된 면을 터치 고이 바이러스를 씻어 수 있습니다 gavage, 수행 하는 경우 액체와 창을 rinsing 방지 하지. 최대한 식을 달성 하는 durotomy를 수행 합니다.

7. 식의 계산 및 문제 해결

1. 평가 virally 표현 단백질의 표현, 하 수 ~ 2-3 주 식 드라이브 다음 인산 염에 4 %paraformaldehyde intracardial 관류를 수행 하는 바이러스에 대 한 버퍼링 염¹¹ 및 프로세스 뇌 조직의 형광에 대 한 현미경 검사 법¹².
2. 형광 현미경 fluorophore 태그 optogenetic 단백질의 표정 패턴 이미지를 사용 하 여 식을 평가 합니다.
3. 실크/AAV 코팅의 총 볼륨을 증가 하거나 선호 높은 titer 바이러스를 사용 하 여 식의 수준이 충분 하지 않을 경우 코팅에 바이러스의 양을 증가.

결과

평가 식에서 실크/AAV 영화의 성공, 우리 끼얹는다 동물 이식 후 2-3 주 하 고 관심의 영역에서 두뇌 분할 영역을 준비. Fluorophore 태그 optogenetic 단백질 (YFP ChR2)의 형광 이미지 (그림 1D) 표현의 넓이의 측정을 제공합니다. 일반적인 광학 섬유 (230 µ m 직경) 쉽게 200을 수용할 수 있는 실크/AAV의 nL. 연습, 경험 이식된 섬유 (그림 5)의 신뢰할 수 있는 식 팁 주위를 얻을 수 있습니다.

평가 식 두개골 창 실크/AAV 코팅에 의해 구동, 이미징 이식 후 7-10 일을 시작 합니다. 우리는 시각화에 대 한 2 광자 영상을 사용 하지만 형광 이미징는 CCD와 같은 다른 방법을 사용할 수도. 코팅 두개골 ...

토론

실크/optogentic 단백질의 표현 대상으로 AAV를 사용 하 여 현재 사용 중인 접근법의 한계를 극복 한다. 많은 연구에서는 성공적으로 AAV 주사를 사용 하 여 optogenetic 단백질을 표현 하기 위해, 비록 식 광 섬유의 끝에, 테이퍼 섬유의 길이 주변 지역 그리고 미소 렌즈의 보기 영역에 맞게 도전 이다. 광학 부품 및 optogenetic 식 사이의 부정합, 인해 stereotaxic 주사 신뢰할 수 있는, 수 고 많은 실험 실패. 실크/AAV 방법 우리가 여기 설명 라벨에이 문제를 해결 합니다. 그것은 또한 두 번째 수술 단계를 제거 하 여 및 경우에 따라 두 번째 수술에 대 한 필요성을 제거 절차를 간소화 합니다. 그것은 바이러스 두개골 창 아래 광범위 하 게 식을 사용 하 여 또한 어려울 수 있습니다 그리고 일반적으로 여러 위치에 바이러스를 주입 하 긴 수술을 수행 하는 실험. 실크/AAV와 단순히 코팅 두개골 windows에서 큰 대뇌 피 질의 영역에 광범위 한 식을 얻을 수 많은 침략 주사에 대 한 필...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
수성 실크 피브로인	시그마	5154-20ML	필름 제작용 수성 실크 피브로인(5% w/v)
실크/AAV	드러먼드	3-000-207	나노젝트 III 나노리터 주입기
임플란트를 보관하기 위한 매니퓰레이터	Narashige	MM-33	마이크로 매니퓰레이터
실크 침전물을 시각화하기 위한 입체 렌즈	AmScope	SM-6TX-FRL	3.5X-45X 링 라이트가 있는 삼안 관절 줌 현미경
임플란트를 보관하기 위한 진공 챔버	Ablaze	N/A	3.5쿼트 진공 진공 Vac 탈기 챔버
옵션, 보관용 임플란트 홀더	N/A	/A	미리 만들어진 광섬유를 보관하려면 페룰 직경보다 약간 큰 직경의 ~4mm 깊이의 구멍 그리드를 플라스틱 블록에 뚫습니다.
광섬유	Thorlabs	FT200EMT	Ø 200 &마이크로; m 섬유 임플란트용 코어 다중 모드 광섬유
페룰	Kientec	FZI-LC-230	LC 섬유 임플란트용 지르코니아 페룰
만성 섬유 임플란트 제조를 위한 다양한 재료	다양한	N/A	자세한 절차는 Ung K, Arenkiel BR. 뇌 조직의 만성 광유전학 자극을 위한 광섬유 이식을 참조하십시오. 시각화 된 실험 저널 : JoVE. 2012년(68).
테이퍼 섬유 임플란트	Optogenix	Lambda-B	테이퍼 섬유 임플란트
GRIN 렌즈	GoFoton	CLH-100-WD002-002-SSI-GF3	GRIN 렌즈
소형 유리 두개골 창	Warner	64-0726 (CS-3R-0)	소형 원형 커버 유리, # 0 두께
대형 유리 두개골 창	Warner	64-0731 (CS-5R-0)	소형 원형 커버 유리, # 0 두께
두개골 창 제조를 위한 다양한 재료	다양한	N/A	자세한 절차는 Goldey GJ et al. 깨어 있는 마우스의 장기 이미징을 위한 이동식 두개골 창을 참조하십시오. 자연 프로토콜. 2014 년 11 월; 9(11):2515.