Method Article

시각화 및 약리 대상의 특성에 대 한 간단 하 고 강력한 방법으로 autoradiography

DOI:

10.3791/58879

⸱

March 12th, 2019

 ,  ,  , 
1Department of Drug Design and Pharmacology, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, 2Neurobiology Research Unit and CIMBI, Copenhagen University Hospital, 3Department of Clinical Physiology, Nuclear Medicine & PET, Copenhagen University Hospital

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autoradiography 하는 방법은 정기적으로 질적 또는 양적 약리학의 결정에 대 한 바인딩을 radioligands 조직 단면도를 공부 하는 데 사용 됩니다.

Abstract

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Autoradiography 생체 외에서 인간 뿐만 아니라 실험 동물에서 조직에 관심사의 단백질의 해부학 적 분포를 시각화 하는 것을 목표로. 메서드를 생물 학적 대상 radioligand의 특정 바인딩을 기반으로 합니다. 따라서, 언된 조직 단면도 radioligand 솔루션, 알을 품는 그리고 대상 바인딩 이후 지역화 방사성 붕괴의 탐지에 의해 예를 들어 감광 필름 또는 인광 체 격판덮개를 이미징 사용 하 여. 결과 디지털 autoradiograms 정량화 및 지역화 radioligand 바인딩 다른 해 부 구조에서의 놀라운 공간 해상도 표시 합니다. 또한, 정량화 바인딩 사이트 (B최대) 선택 된 조직에서의 밀도 뿐만 아니라 분리 상수 (Kd), (K나) 저해 상수에 의하여 ligand 선호도 약리 특성에 대 한 수 있습니다. 따라서, 메서드는 대상 지역화 및 리간드 선택에 대 한 정보를 제공합니다. 여기, 기술은 높은 선호도 γ-hydroxybutyric 산 (GHB) 바인딩 바인딩 분석 결과 관한 방법론 고려 사항에 특별 한 강조와 포유류 뇌 조직에서 사이트의 autoradiographic 묘사와 궁 행 매개 변수는 radioligand 및 검출 방법의 선택.

Introduction

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Autoradiography는 방사성 붕괴의 이미지를 제공 하는 방법입니다. 기술은은 정기적으로 관심 생체 외에서 기반 radiolabelled 화합물과 그 대상 간의 특정 약물 상호 작용에의 한 단백질의 조직 분포를 연구 하는 데 사용 됩니다. 이 대상에 대 한는 리간드의 선택도 대 한 직접적인 정보를 제공합니다. 생체 외에서 autoradiography도 사용할 수 있습니다 결정 뿐만 아니라 약리 바인딩 매개 변수 분리 상수 (Kd) 및 (B최대), 바인딩 사이트의 밀도 같은 radioligands의 양적 결정 경쟁 ligands1,2의 저해 상수 (Ki). 전통적인 homogenate radioligand 바인딩에 비해 autoradiography 공간 해부학을 시각화 수 있는 그리고 지역 식 패턴3의 간결 상세히의 이점이 있다. Autoradiography 방법 따라서 검증 된 항 체의 부재에 (서) 특히 immunocytochemistry에 관련 대안입니다. Autoradiography 쉽게 필요한 약리학 특이성, 톰 cryostat 준비 조직 단....

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Protocol

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모든 동물 처리 덴마크어 동물 실험 검사자에서 지침에 따라 수행 되었다.

참고: 여기에 설명 된 프로토콜 커버 조직 준비 (즉, 마우스 뇌 조직), 생체 외에서 autoradiographic 분석 결과 새로운 실험실에서 메서드, 인광 체 격판덮개를 이미징에 노출 설정에 대 한 충분 한 세부 사항에서 뿐만 아니라 지역화 및 다른 해 부 구조에 radioligand 바인딩 측정의 목적으로 autoradiograms (그림 2)의 후속 densitometric 분석. 비교를 위해 조직학, cresyl 보라색 얼룩이 지는 프로토콜 포함 되어 있습니다. 또한, 일반적인 경쟁 ligand 바인딩 결정 프로토콜 내에서 포함 되어 있습니다. Kd, B최대 또는 K나확인 하는 방법에 대 한 자세한 설명에 대 한 이전 게시4를 참조 하십시오.

1. 조직 준비 Cryosectioning

  1. 자 궁 경부 전위에 의해 마우스를 안락사 하 고 즉시가 위와 집게를 사용 하 여 뇌를 해 부. 직접 조직 손상을 방지 하려면 ....

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Results

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설명 된 프로토콜을 사용 하 여, 높은 선호도 GHB 바인딩 사이트의 해부학 적 분포 radiolabelled GHB 아날로그 [3H] 함께 가시화 했다 코로나, 화살 및 수평 섹션 (그림 3으로 잘 렸는 쥐의 뇌에 HOCPCA ). 높은 수준의 바인딩 해 마와 대뇌 피 질에서 관찰 되었다가 낮은 바인딩 및 바인딩 없음 검색 되었습니다, 소 뇌에 해당 하는 높은 선호도 GHB 사이트9,10의 이전 보고 식 패턴 11,12. 다음과 같이, 해 부 구조 수 있습니다 시각 될 다른 단면 평면을 사용 하 고 해 부 무결성 cresyl 보라색 얼룩에 의해 지원 될 수 있습니다. .......

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Discussion

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Autoradiographic 분석 결과의 품질은 가장 자주는 radioligand의 감도 의해 결정 됩니다. 주요 기여 하는 요소는 적절 한 특정 활동 (즉, 방사능의 양을 ligands를 알려진된 ligands의 가용성에 의해 또는 특정 라벨 기술의 타당성에 의해 주어진 선택 된 방사성 동위 원소 단위는 radioligand의 두더지) 당23와 화학 저하의 제한 금액. 알려진된 ligands의 radioligands의 많은 수는 움9,10,,2425,26, 유추 하는 몇 가지 장점이 있는 이라는. 첫째, 트리 티 움 (3H) 개별 일괄 처리의 장기 저장을 추진.......

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Disclosures

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저자는 관심 없음 충돌 선언합니다.

Acknowledgements

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작품은 Lundbeck 재단 (그랜트 R133-A12270), Novo Nordisk 기초 (그랜트 NNF0C0028664)에 의해 지원 되었다. 저자 [3H] radioligand의 공급에 대 한 박사 Aleš 마렉을 감사합니다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
앱솔루트 에탄올Merck Millipore107017
Acetic acidSigma-AldrichA6283
BAS-TR2040 이미징 플레이트GE Healthcare Life Science2895648120x40 cm - 트리튬에 민감함
크레실 바이올렛 아세테이트Sigma-AldrichC5042-10G
DPX (현미경 검사용 비수성 장착 매체)Merck Millipore100579
O.C.T. 컴파운드, 12 x 125 mLSakura4583Tissue-Tek
파라포름알데히드Sigma-Aldrich16005-1KG-R
Superfrost Plus 슬라이드VWR631-9483현미경 슬라이드
Tissue-Tek 수동 슬라이드 염색 세트Sakura Finetek Denmark ApS4451
유리의 삼중수소 표준미국 Radiolabeld Chemicals, Inc.ART 0123
크실렌 대체물시그마-알드리치A5597

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Upham, L. V., Englert, D. F. Handbook of Radioactivity Analysis. , Elsevier Inc. 1063-1127 (2003).
  2. Manuel, I., et al. Neurotransmitter receptor localization: From autoradiography to imaging mass spectrometry. ACS Chemical Neuroscience. 6, 362-373 (2015).
  3. Pavey,....

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AutoradiographyRadioligand BindingTissue SectioningPhosphor ImagingProtein TargetsBrain TissueBinding AssaySignal To NoiseAnatomical DistributionPharmacological Analysis

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