방법 논문

글로벌 세포 매트릭스 Metalloproteinase 및 3D Hydrogels 신진 대사 활동 측정

7K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/59123

⸱

2019년 1월 22일

 , 
1Department of Biomedical Engineering, The Ohio State University, 2The Ohio State University Comprehensive Cancer Center, Arthur G. James Cancer Hospital and Richard J. Solove Research Institute, 3Biomedical Technology Department, King Saud University

이 논문에서

요약

여기, 프로토콜 캡슐화 및 poly(ethylene glycol) (PEG) hydrogels fluorogenic 매트릭스 metalloproteinase (MMP)와 기능성된에 세포 배양에 대 한 제시는-분해 펩 티 드. 세포질 MMP와 대사 활동 표준 microplate 리더를 사용 하 여 하이드로 겔 문화에서 직접 측정 됩니다.

초록

3 차원 (3D) 세포 배양 시스템 종종 더 자세히 정리 vivo에서 세포 반응과 기능 전통적인 2 차원 (2D) 문화 시스템 보다. 그러나, 세포 기능 3D 문화에서의 측정은 종종 더 많은 도전. 많은 생물학 분석 실험 3D 문화에 어려울 수 있는 셀룰러 자료의 검색을 해야 합니다. 이 문제를 해결 하기 위해 한 가지 방법은 셀 함수는 재료 내에서 측정을 가능 하 게 새로운 자료를 개발 하는 것입니다. 여기, 96 잘 형태로 3D hydrogels에서 셀룰러 매트릭스 metalloproteinase (MMP) 활동의 측정에 대 한 메서드가 제공 됩니다. 이 시스템에서는, poly(ethylene glycol) (PEG) 하이드로 겔은 기능성 fluorogenic MMP 쪼갤 센서. 세포질 MMP 활동 형광 강도에 비례 하 고 표준 microplate 리더와 측정 될 수 있다. 소형화 96 잘 형식이 분석 결과의 분석 결과의 이전 24 잘 버전에 비해 조건 당 80 %50 %와 시 약 사용에 의해 실험 설정에 필요한 시간을 감소. 이 분석 결과 또한 세포질 기능의 다른 측정에 호환 됩니다. 예를 들어 대사 활동 분석 결과 시연입니다 여기, MMP 활동 측정 같은 히드로 내 동시에 실시 될 수 있습니다. 분석 결과 시드 밀도 분석 결과의 작업 범위에 대 한 적절 한 캡슐화 밀도 결정 하는 셀의 범위에 걸쳐 캡슐화 인간 흑색 종 세포와 함께 설명 했다. 셀 캡슐화의 24 h 후 MMP와 대사 활동 표시기 셀 시드 밀도에 비례 했다. 분석 결과 한 fluorogenic 분해성 기판으로 여기 설명 된다, 하는 동안 분석 결과 및 방법론 수 있습니다 다양 한 하이드로 겔 시스템 및 다른 형광 센서에 대 한 적응. 이러한 분석 결과 다양 한 응용 프로그램에 대 한 실용적인, 효율적이 고 쉽게 접근할 수 있는 3D 자란 플랫폼을 제공.

서론

3 차원 (3D) 문화 시스템 종종 더 밀접 하 게 전통적인 2 차원 (2D) 문화 시스템 보다 vivo에서 세포 응답을 정리, 여러 우수한 간행물1,2,3 참조 . 그러나, 세포 기능을 측정 하기 위해 3D 문화 시스템을 활용 하 여 셀룰러 검색의 어려움 때문에 도전 되 고 추가 처리. 이 어려움 3 차원 배양 시스템에서 많은 세포 기능 측정을 제한합니다. 이 어려움을 극복 하기 위해 새로운 기술을 쉽게 측정 3D 환경에서 셀 함수를 사용할 수 있는 필요. 이 필요 해결 하기 위해 한 가지 방법은 세포 기능을 측정 하는 센서 뿐 아니라 3D 세포 배양을 지원 뿐만 아니라 재료의 개발 이다. 예를 들어 여러 하이드로 겔 시스템 fluorogenic 효소 쪼갤 moieties 3D 환경4,5,,67프로 테아 제 활동의 시각화 수 있도록 통합 했습니다. 이러한 시스템은 원래 현미경 이미징에 대 한 활용 하 고, 하는 동안 이러한 시스템도 3D에 셀 함수의 손쉬운 측정을 사용 하면 표준 플레이트 리더를 사용 하 여 글로벌 매트릭스 metalloproteinase (MMP) 활동 분석에 사용 하기 위해 적용할 수 있습니다. 환경8.

MMPs, 아연 프로 테아 제, superfamily 정상 조직의 항상성 그리고 많은 질병에 중요 한 역할을 재생합니다. MMPs 저하와 세포 외 기질 (ECM) 개장, 세포 표면 수용 체, cytokines를 쪼개 고 다른 MMPs9,10활성화. MMPs 상처 치유 등 생리 적 과정에 고 등 관절염, 동맥 경화, Alzheimer, 암 ( 9,,1011리뷰 참조) 질병에 중요 한 역할을 재생 합니다. 암, MMP 식 상부는 암 전이 및 빈약한 예 지12와 강하게 상관 된다. 또한, MMPs 암 세포 내 습 및 마이그레이션, 본질적으로 3D 현상13,14는 세포질 과정을 홍보 하 여 종양 진행에 기여 한다. 따라서, 근본적인 생물학 연구 및 약물 분석 검사를 포함 하 여 많은 문맥에서 3 차원 문화에 MMP 활동을 측정 하는 능력에 많은 관심이 있다.

그들의 높은 함량으로 인해 3D 세포 배양, 단백질 흡착, 및 가변 자연 저항을 못 hydrogels 널리 사용 됩니다. 못 hydrogels 있다 되어 기능성 moieties 직접 세포 기능에의 번호와 같이 RGD, 같은 RLD, IKVAV 세포 접착을 촉진 또는 변형 성장 인자-β (TGF-β) 등 성장 요인의 tethering 직접 ECM 모방 펩 티 드와 15,16. 더 최근에, 말뚝 hydrogels 있다 되어 기능성 잘5,8로 세포 기능 측정을 사용할 수 있는 센서 펩 티 드와 함께. 특히, PEG 하이드로 겔 시스템의 사용 fluorogenic 표준 플레이트 리더와 3D 문화에서 셀룰러 MMP 활동의 MMP 분해 펩 티 드 활성화 측정으로 기능성 고 아니 추가 처리 하는 데 필요한. 이러한 시스템은 또한 신진 대사 활동을 포함 하 여 세포질 기능의 다른 측정에 호환 됩니다. 여기, 프로토콜은 3D 못 하이드로 겔 fluorogenic MMP 분해 펩타이드와 기능성된 및이의 사용에 필요한 초기 최적화 실험을 보여주는 제시 결과에서 경작 하는 세포의 MMP 활동의 측정에 대 한 설명 분석 결과입니다. 인간 흑색 종 세포 (A375) 시드 범위 내에 있는 작업 분석 결과의 적절 한 시드 밀도 결정 하는 밀도의 범위 fluorogenic hydrogels에 캡슐화 되었습니다. 캡슐화의 24 h 후 MMP와 대사 활동 측정 했다 표준 microplate 리더를 활용 하 여. 다음, MMP 활동 분석 결과의 선형 범위 내에서 시드 밀도 결정 하는 신진 대사 활동을 정상화 했다. 마지막으로, 내부 플레이트 계수의 편차 백분율 (%CV) 얻은 결과의 재현성을 반영 하기 위해 triplicates 사이 계산 했다. 이 메서드는 간단 하 고 빠른 3D 세포 배양, 그리고 최소한의 샘플 처리와 프로 테아 제 활동의 쉽게 측정을 수 있습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

1. 하이드로 겔 구성 요소 준비

  1. 음성 합성 설명으로 형광 효소 분해 펩 티 드 다른8, 형광 분자 처럼 fluorescein와 dabcyl는 끄는으로 활용. 10 m m의 농도에 DMSO에 펩 티 드와 반복된 freeze-thaw 주기를 피하기 위해 작은 (~ 30 µ L) aliquots에서-80 ° C 냉동 고에서 저장소를 분해.
    참고: 이러한 펩 티이 드가 상업적으로 구입할 수도 있습니다. 이 프로토콜에는 C 터미널 시스테인을 하이드로 겔 폴리머 네트워크에 공유 결합 수 있도록 펩 티 드 순서에 필요 합니다.
  2. 8 팔 40 kDa 폴 리 (에틸렌 글리콜) 아민 (PEG) 준비-norbornene (NB)로17설명. 보다 큰 1H NMR을 사용 하 여 90%의 끝 그룹 기능화를 확인 합니다. 멸 균 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 25 %w / v 및-80 ° C 냉장고 (~ 300 µ L) aliquots에 있는 저장소에에서 말뚝-NB를 분해.
    참고: 못 공업화와 norbornene을 또한 상업적으로 구입할 수 있습니다.
  3. 18설명 되어 있는 대로 사진 초기자 리튬 페 닐 2,4,6 trimethylbenzoylphosphinate (무릎) 음성 합성. 메 마른 물 68 m m의 농도에 무릎을 녹이 고 (~ 300 µ L) aliquots에서-80 ° C 냉동 고에 저장.
    참고: 대 안으로 서, Irgacure (2-Hydroxy-4′-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone)는 사진-개시자로 사용할 수 있습니다. 무릎 및 Irgacure는 상업적으로 구입할 수 있습니다.
  4. MMP 분해 펩 티 드 crosslinker (KCGPQG↓IWGQCK)와 살 균 물 200 m m와 100 m m의 농도에 세포 접착 펩타이드 (CRGDS)를 각각, 해산 하 고 (~ 300 µ L와 ~ 30 µ L)-80 ° C 냉동 고에 저장 aliquots, 각각.

2. 분석 결과 미디어 준비

  1. 열 비활성화 준비, 숯불 박탈 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) MMP 분석 결과 대 한:
    참고: FBS 프로 테아 MMP 분석 결과;와 높은 배경 신호를 생성할 수 있습니다. 따라서, 그것은 열 비활성화 하 고 숯을 권장 분석 결과 미디어 FBS 스트립.
    1. 55 ° c.에 30 분 동안가 열 하 여 100 mL FBS의 비활성화
      참고: FBS의 100 mL aliquoting 및 나중에 사용-20 ° C에서 저장 여기 이용 되었다. 필요에 따라 작은 볼륨을 사용할 수 있습니다.
    2. 활성 탄 및 0.025 %w / v dextran의 0.25 %w / v FBS (약 5 mL)의 작은 금액을 추가 하 고 슬러리를 형성 될 때까지 저 어. 그런 다음는 FBS의 나머지를 추가 하 고 55 ° c.에 30 분 동안 저 어
    3. 4 ° c.에 20 분 동안 1,962 x g 에서 원심 분리기 그런 다음 다른 용기에는 상쾌한 전송.
    4. 2.1.2 단계를 반복 하지만 2.1.3 단계 뒤 37 ° C에. 0.45 μ m 필터 다음 0.2 µ m 필터를 사용 하 여 상쾌한 소독.
  2. 분석 결과 미디어 준비 FBS, 2 mM L-글루타민, 10 U/mL 페니실린, 10 µ g/mL 스 박탈 1% 숯으로 보충 하는 미디어를 사용 하 여.
    참고: 미디어 페 놀 레드 없이 더 적은 형광 방해가지고 있기 때문에 좋습니다. 다른 추가 인슐린, 성장 인자 등의 분석 결과 미디어 등. 만큼 흡수도 추가 될 수 있습니다 및 형광 스펙트럼 봉우리 센서 (494 nm/521 nm)와 중첩 되지 않습니다.
  3. 희석 세균성 콜라 효소 긍정적인 컨트롤로 10과 1000 µ g/mL 분석 결과 미디어에서에서 나를 입력 합니다.

3. 하이드로 겔 준비와 세포 캡슐화

  1. 하이드로 겔 전조 솔루션을 준비 합니다.
    1. 다음 순서로 1.5 mL 튜브, vortexing 각 부품의 추가 후에 시 약을 추가: 20 mM 8 팔 40 kDa 못 NB, 12.75 m m crosslinker MMP 분해 펩 티 드, 17.8 m m NaOH, 1 mM CRGDS, 2 mM 무릎, 및 0.25 m m fluorogenic MMP 분해 펩 티 드.
      주: 표 1 보여줍니다 히드로 전조 솔루션 내용, 재고 농도, 작업 농도, 볼륨 계산 수식 및 필요한 볼륨 히드로 전조 솔루션을 실시 하기에 충분 한 120 µ L를 만드는 데 필요한는 10 hydrogels 실험. Pipetting으로 히드로 솔루션의 손실에 대 한 계정, 총 볼륨 20% 증가. 상업적인 펩 티 드 종종; 산 성 염화 수소 솔루션 제공 따라서, NaOH는 7의 최종 pH를 달성 하기 위해 추가 됩니다. 마지막 해결책의 pH는 사용자에 의해 확인 되어야 한다.
    2. 여러 1.5 mL 튜브에 나눌 히드로 전조 솔루션 테스트 조건 당 1 개의 관.
      참고: 셀의 추가 없이 hydrogels 준비가 여러 제어 조건 건의 된다. 부정적인 제어를 위한 fluorogenic 센서의 일반적인 저하에 대 한 계정에 한 하이드로 겔 상태 수 알을 품 차량 제어 또는 혼자 실험 미디어 처리 조건이 없는 경우. 긍정적인 통제와 실험 사이 교정 hydrogels fluorogenic 센서를 쪼개 다 알려진 효소와 incubated 수 있습니다. 예를 들어 세균 콜라의 2 농도 여기 사용 되었다.
  2. Hydrogels 셀을 캡슐화 합니다.
    1. 사용 중인 셀 형식에 대 한 적절 한 세포 현 탁 액을 준비 합니다. 예를 들어 10 mL의 PBS로 A375 흑색 종 세포의 10 cm 접시 세척. 0.05% 트립 신을 사용 하 여 셀을 trypsinize 하 고 37 ° C, 5% CO2 3 분 수 셀 전체 휴대폰 번호를 확인 하려면 hemocytometer에서 품 어.
    2. 314 x g 3 분에 셀 솔루션 원심, 문화 미디어, 발음 다음 다시 약 3 배 높은 필요한 시드 밀도 실험에 대 한에 PBS에 셀을 일시 중단 합니다. 예를 들어 21 x 106 세포의 밀도와 세포 현 탁 액 여기 7 x 106 셀/mL의 최종 캡슐화 된 밀도 달성 하기 위해 사용 되었다.
    3. 다시는 정확한 셀 농도 되도록 셀을 계산 합니다.
    4. 필요한 시드 밀도 (0.25, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 및 7 x 106 셀/mL이이 예제에서)에 따라 하이드로 겔 전조 솔루션의 각 튜브를 일시 중단 된 세포와 PBS를 추가 합니다. 일시 중단 된 셀 대신 셀 조건에 PBS를 추가 합니다.
      참고: 모든 조건을 히드로 구성 요소 사이의 비율을 보장 하기 위해 동일한 최종 히드로 전조 솔루션 볼륨 있고 PBS는 일정. 그들의 세포, 플라스틱 전조 솔루션을 혼합 하기 위하여 거품을 만들지 않고 적극적으로 아래로 소용돌이 관 하지 마십시오.
    5. 팁은 분배 하는 동안 각 잘 가운데 중심으로 보장 아래 96 잘 접시 라운드 무 균 블랙에 히드로 전조 솔루션의 10 µ L을 분배.
    6. 3 분 4 mW/cm2 울트라 바이올렛 (UV) 빛 접시를 노출 하 여 하이드로 겔 전조 솔루션 유해.
      참고: UV 램프 (UVL 56 휴대용 UV 램프, UVP, 고지대, 캘리포니아) 긴 UV 파장에서 자외선 빛을 생산 (365 nm),이 세포 생존에 영향을 주지 않습니다.
    7. 캡슐화 된 셀 없이 긍정적인 제어 조건 제외한 모든 우물에 분석 결과 미디어의 150 µ L를 추가 합니다. 긍정적인 컨트롤에 콜라 효소 솔루션의 150 µ L를 추가 합니다.
    8. 인큐베이션 기간 동안 증발을 줄이기 위해 플레이트의 외부 우물에 PBS의 150 µ L를 추가 합니다.

4. MMP와 대사 활동 측정

  1. 형광 측정 기준 형광 측정 설정 히드로 합에 균일 하 바로 후 캡슐화. 형광 microplate를 사용 하 여 접시를 읽고 리더 면적 불투명 96 잘 접시 프로토콜을 활용 하 여 스캔 494 nm/521 nm (여기/방출)에. 이 읽기 0 h를 될 것입니다.
  2. 18 h에 대 한 37 ° C, 5% CO2 습도 인큐베이터에 접시를 품 어.
  3. 1:10 (v/v) 각 잘 대사 활동 시 약 (resazurin)를 추가 합니다.
  4. 추가 6 h에 대 한 37 ° C, 5% CO2 습도 인큐베이터에 접시를 품 어.
    참고:이 보육 시간 셀 유형에 따라 달라질 수 있습니다.
  5. 24 시간 후 캡슐화에 형광을 측정 합니다. 형광 microplate를 사용 하 여 접시를 읽고 면적 불투명 96 잘 접시 프로토콜을 활용 하는 리더 MMP 활동 494 nm/521 nm (여기/방출) 및 560 nm/590 nm (여기/방출) 신진 대사 활동에 대 한 설정을 검색 합니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

현재 분석 결과 fluorogenic MMP 쪼갤 센서8공업화 이전 개발 및 특징이 3D 히드로 문화 시스템에서 적응 시켰다. 여기에 사용 되는 fluorogenic MMP 센서 GPLAC (pMeOBzl) ↓WARKDDK (AdOO) C, 펩 티 드 순서의 구성 (↓ 나타냅니다 분열 사이트)는 이전 MMP-14 및 MMP 1119분열에 대 한 최적화 되었습니다. 펩 티 드 (fluorescein) 형광 분자와 분열 사이트 (그림 1)의 양쪽에 끄는 분자 (dabcyl)으로 표시 됩니다. 노출 되 면 fluorogenic 센서의 적절 한 효소에, fluorophore 및 끄는 구분 하 고 형광 증가 한다. 여기, 분석 결과 96 잘 접시 형식으로 캡슐화 프로세스의 여러 단계를 제거 하 고 50% 하 여 실험을 수행 하는 데 필요한 시...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

3 차원 생체 외에서 세포 배양이 vivo에서 환경의 많은 중요 한 측면. 그러나, 3D 문화 또한 사정 세포 기능을 만들고 도전 신호, 많은 생물학 분석 실험 필요 셀룰러 검색 및 셀의 큰 숫자. 따라서, 개발 추가 샘플 없이 세포질 기능의 측정을 가능 하 게 간단한 3D 문화 시스템의 처리 크게 증가 시킬 것입니다 3D 문화 시스템의 유틸리티. 여기서 설명 하는 3D 시스템은 다양 한 다른 응용 프로그램에 대 한 적용할 수 있습니다. 다른 프로 테아 제를 감지 하는 fluorogenic 센서의 순서를 변경할 수 있습니다. 예를 들어, fluorogenic 쪼갤 센서 시퀀스 (GPQG↓IWGQK)는 MMP-1 죽 습 수 있습니다-2,-3,-7,-8, 및 9-, 이전 chemotherapeutics22에 대 한 응답 흑색 MMP 활동을 검출 하기 위하여 이용 되었다. PEG 하이드로 겔 시스템의 사용은 또한 기계적 성질, 분해성, 그리고 매트릭스 접착 moieties는 히드로 내를 포함...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

저자는 오하이오 암 연구 (OCR), 오,이 작품을 자금에 대 한 미국 킹 사우드 대학 (KSU), 리야드, 첫 번째 작가 후원을 위한 KSA 인정 하 고 싶습니다. 매트릭스 지원, 레이저 탈 착 이온화 시간의 비행 (TOF MALDI) 캠퍼스 화학 악기 센터 질량 분석 및 단백질의 도움으로 질량 분석을 사용 하 여 형광 펩 티 드 센서의 분자량 측정 오하이오 주립 대학에서 시설입니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1X 인산염 완충 식염수Fisher Scientific10-010-049
활성탄 Sigma-AldrichC3345
블랙 라운드 바닥 96웰 플레이트Brand-Tech89093-600
세포 접착 펩타이드(CRGDS)GenScript USA Inc.
콜라겐 분해 효소 유형 I Life Technologies17100-017
DextranSigma-AldrichD4876
DMEM 고포도당 미디어Invitrogen11965118
태아 소 혈청 (FBS) Seradigm1500-500
형광 마이크로플레이트 리더 BioTekCytation 3
혈구계Hausser Scientific Co.3200
L-글루타민Life Technologies25030-081
MMP-분해성 펩타이드 교차결합제(KCGPQG↓ IWGQCK)GenScript USA Inc.맞춤 제작
NaOHFisher ScientificS318500
페니실린 /스트렙토마이신Life Technologies15140-122
Resazurin (Alamar Blue)Life TechnologiesDAL1100
UV light 재질 보기 UVP95-0006-02
맞춤형 (영문)

참고문헌

  1. Baker, B. M., Chen, C. S. Deconstructing the third dimension - how 3D culture microenvironments alter cellular cues. Journal of Cell Science. 125 (13), 3015-3024 (2012).
  2. Duval, K., et al. Modeling Physiological Events in 2D vs. 3D Cell Culture. Physiology. 32 (4), 266-277 (2017).
  3. Hoarau-Véchot, J., Rafii, A., Touboul, C., Pasquier, J. Halfway between 2D and Animal Models: Are 3D Cultures the Ideal Tool to Study Cancer-Microenvironment Interactions. International Journal of Molecular Sciences. 19 (1), (2018).
  4. Lee, S. -H., Miller, J. S., Moon, J. J., West, J. L. Proteolytically Degradable Hydrogels with a Fluorogenic Substrate for Studies of Cellular Proteolytic Activity and Migration. Biotechnology Progress. 21 (6), 1736-1741 (2005).
  5. DeForest, C. A., Polizzotti, B. D., Anseth, K. S. Sequential click reactions for synthesizing and patterning three-dimensional cell microenvironments. Nature Materials. 8 (8), 659-664 (2009).
  6. Chalasani, A., et al. Live-Cell Imaging of Protease Activity: Assays to Screen Therapeutic Approaches. Methods in Molecular Biology. 1574, Clifton, N.J. 215-225 (2017).
  7. Jedeszko, C., Sameni, M., Olive, M., Moin, K., Sloane, B. F. Visualizing Protease Activity in Living Cells: From Two Dimensions to Four Dimensions. Current Protocols in Cell Biology. 04, Unit-4.20 (2008).
  8. Leight, J. L., Alge, D. L., Maier, A. J., Anseth, K. S. Direct measurement of matrix metalloproteinase activity in 3D cellular microenvironments using a fluorogenic peptide substrate. Biomaterials. 34 (30), 7344-7352 (2013).
  9. Nagase, H., Visse, R., Murphy, G. Structure and function of matrix metalloproteinases and TIMPs. Cardiovascular Research. 69 (3), 562-573 (2006).
  10. Tokito, A., Jougasaki, M., Tokito, A., Jougasaki, M. Matrix Metalloproteinases in Non-Neoplastic Disorders. International Journal of Molecular Sciences. 17 (7), 1178(2016).
  11. Visse, R., Nagase, H. Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases: structure, function, and biochemistry. Circulation Research. 92 (8), 827-839 (2003).
  12. Vihinen, P., Kähäri, V. -M. Matrix metalloproteinases in cancer: Prognostic markers and therapeutic targets. International Journal of Cancer. 99 (2), 157-166 (2002).
  13. Yodkeeree, S., Garbisa, S., Limtrakul, P. Tetrahydrocurcumin inhibits HT1080 cell migration and invasion via. downregulation of MMPs and uPA1. APHS Acta Pharmacologica Sinica. 29 (7), 853-860 (2008).
  14. Yodkeeree, S., Chaiwangyen, W., Garbisa, S., Limtrakul, P. Curcumin, demethoxycurcumin and bisdemethoxycurcumin differentially inhibit cancer cell invasion through the down-regulation of MMPs and uPA. The Journal of Nutritional Biochemistry. 20 (2), 87-95 (2009).
  15. Mabry, K. M., Schroeder, M. E., Payne, S. Z., Anseth, K. S. Three-Dimensional High-Throughput Cell Encapsulation Platform to Study Changes in Cell-Matrix Interactions. ACS Applied Materials & Interfaces. 8 (34), 21914-21922 (2016).
  16. Sridhar, B. V., Doyle, N. R., Randolph, M. A., Anseth, K. S. Covalently tethered TGF-β1 with encapsulated chondrocytes in a PEG hydrogel system enhances extracellular matrix production. Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 102 (12), 4464-4472 (2014).
  17. Sridhar, B. V., et al. Development of a cellularly degradable PEG hydrogel to promote articular cartilage extracellular matrix deposition. Advanced Healthcare Materials. 4 (5), 702-713 (2015).
  18. Fairbanks, B. D., Schwartz, M. P., Bowman, C. N., Anseth, K. S. Photoinitiated polymerization of PEG-diacrylate with lithium phenyl-2,4,6-trimethylbenzoylphosphinate: polymerization rate and cytocompatibility. Biomaterials. 30 (35), 6702-6707 (2009).
  19. Mucha, A., et al. Membrane Type-1 Matrix Metalloprotease and Stromelysin-3 Cleave More Efficiently Synthetic Substrates Containing Unusual Amino Acids in Their P1' Positions. Journal of Biological Chemistry. 273 (5), 2763-2768 (1998).
  20. Chai, S. C., Goktug, A. N., Chen, T. Assay Validation in High Throughput Screening - from Concept to Application. Drug Discovery and Development. , (2015).
  21. Iversen, P. W., et al. HTS Assay Validation. Assay Guidance Manual. , http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK83783/ (2004).
  22. Leight, J. L., Tokuda, E. Y., Jones, C. E., Lin, A. J., Anseth, K. S. Multifunctional bioscaffolds for 3D culture of melanoma cells reveal increased MMP activity and migration with BRAF kinase inhibition. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (17), 5366-5371 (2015).
  23. Patterson, J., Hubbell, J. A. Enhanced proteolytic degradation of molecularly engineered PEG hydrogels in response to MMP-1 and MMP-2. Biomaterials. 31 (30), 7836-7845 (2010).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청

허가 요청

태그

3DUVA375

관련 논문