여기에서, 우리는 신경병의 발달을 표시하기 위하여 중추 신경계 감염의 면역적격 ICR (암 연구 연구소) 뮤린 모형을 만들기위한 프로토콜을 제시합니다. 동일한 질병 점수에 의한 급성 바이러스 성 뇌질환 모니터링은 생체 내에서 뎅기열 바이러스 유발 신경병증을 나타내는 데 수행될 수 있었다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
뎅기열 바이러스 (DENV), 모기에 의해 전달 되는 절지 동물 매개 바이러스, 뎅기열 출혈열로 알려진 심각한 질병을 일으킬 수 있습니다., 플라즈마 누출으로 인해 치명적인 합병증을 특징으로 하는, 복수, 흉막 삼출액, 호흡 곤란, 심한 출혈, 장기 장애. DENV 감염의 몇 가지 경우는 신경 학적 증상을 제시; 그러나, 연구는 DENV 유도된 신경 병증을 더 탐구하지 않았습니다. 본 연구에서, 우리는 DENV를 가진 중추 신경계 (CNS) 감염의 유도를 조사하기 위한 면역 적격 outbred ICR (암 연구 연구소) 마우스를 사용하는 프로토콜을 제시하고, 급성 바이러스성 뇌염의 진행에 선행됩니다 질병.
서론
FLAviviridae 가족의 절지 동물 매개 바이러스 인 DENV는 3 개의 바이러스 구조 단백질 (캡시드, 전막 및 봉투)과 7 개의 바이러스 성 비 구조적 단백질 (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B)을 암호화하는 양성 감각 RNA 게놈을 포함합니다. 및 NS5)를 참조하십시오. 매년 약 3억 9천만 명을 감염시키는 DENV(DENV1-4)의 4가지 혈청형은 정부가 모기 벡터 및질병 대조군 1을 향한 상당한 노력을 기울였음에도 불구하고 전 세계적인 부담을 야기한다. 현재, 보호 백신 및 치료 항 바이러스 약물은 개발중이며 추가적인 장기 검증이 필요합니다 2. 임상 사례에서, CNS 감염을 가진 뎅기열 환자는 드물더라도, 뎅기열 질병 발달의 다양성을 이해하기 위하여 더 탐구될 필요가있다3. 추가 조사 및 유효성 검사가 필요합니다. 특히, 세계보건기구(WHO)는 중증 뎅기열 3,4의분류에 인지 장애, 경련, 뇌병증 및 뇌염과 같은 CNS 장애의 참여를 포함하였다. DENV 감염의 동물 모델을 구축하는 것은 DENV 감염의....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
동물 연구의 실험 프로토콜은 대만 과학기술부에 의해 수립 된 지침에 따라 국방 의료 센터의 기관 동물 관리 및 사용자위원회 (IACUC 번호 : 16-261)에 의해 승인되었습니다.
1. 감염 절차
- 적응되지 않은 DENV2 (변형 PL046) 주식9 (원래 대만 질병 통제 센터에서 얻은, 2.5 x 107 에서 1 x 109 PFU / mL).
- 로스웰 파크 메모리얼 인스티튜트(RPMI) 1640 배지를 사용하여 바이러스 스톡을 1 x 106 PFU로 총 부피 40 μL로 희석합니다.
- 희석 된 바이러스의 10 μL (2.5 x 105 PFU)와 30G 바늘이 장착 된 0.3 mL 주사기 하나를 채우고 희석 된 바이러스의 30 μL (7.5 x 105 PFU)로 30G 바늘이 장착 된 다른 0.3 mL 주사기를 채웁니다.
-
7일된 ICR 을 잡고 다음 단계를 수행합니다.
- 내뇌 주사의 경우, 집게 손가락과 엄지 손가락 사이의 주경을 눌러 경향이 있는 위치에 마우스를 잡고, 회골과 람도이드 봉....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
가혹한 뎅기열 관련 신경학상 합병증은 뎅기열 병인을 위한 환자에서 보고되었습니다4. 이러한 경우는 클리닉에서 드물지만 DENV 감염의 면역 적격 뮤린 모델을 만드는 것은 면역 요법 생성을 연구하는 데 뿐만 아니라 CNS 감염, 신경 염증, 신경 독성 및 급성 바이러스를 탐구하는 데에도 사용될 수 있습니다. 뇌염과 같은 질병. 본 연구에서, 우리의 현재모델 9에 따르면,10,11,12,13,14,15,7 일 된 ICR 빨기 마우스를 접종하였다.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
DENV 감염은 중증 뎅기열 환자3,17의CNS에서 검출되었으며, 뎅기열 병인 동안 급성 바이러스 성 뇌염의 발현 가능성을 시사한다. 여기에서, 우리는 가혹한 뎅기열에 있는 CNS 역기능의 관련을 공부를 위한 DENV 감염의 생체 내 murine 모형을 보고합니다, 특히 DENV 유도한 심각한 바이러스성 뇌염 같이 질병에 초점으로. 이전 모델과 비교하여, 특히 단일 경로 감염(정맥 내만, 복강 내만, 또는 내외만),DENV의 매우 높은 역가(1 x 108 PFU)는 면역적격 마우스에서 활용된다. 그러나, 면역손상 마우스에서, DENV의 비교적 낮지만 변이체 역가(1 x 105 1 x 108 PFU)는18,19,2.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 공개 할 것이 없다.
감사의 글
이 연구는 과학기술부(MOST107-2321-B-038-001)의 보조금과 대만 타이베이의 교내 기금 106TMU-CIT-01-2의 보조금으로 지원되었습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Roswell Park Memorial Institute 1640 매체 (RPMI) | Gibco | 11875-085 | 희석 바이러스 |
| 0.3 mL 인슐린 주사기 | BD Ultra-FineII | 328838 | 뇌내 및 복강내 주사 |
| Microbalance | METTLER TOLEDO의 LabX | AL104 | Weight mouse |
| Non-adapted DENV2 (strain PL046) | 대만 질병통제센터 | - | 감염 마우스 |
| ICR(Institute of Cancer Research) 젖먹이 마우스 | BioLASCO Taiwan Co., Ltd | - | 당사의 쥐 모델 |
참고문헌
- Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. Dengue infection. Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055(2016).
- Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities. Lancet Infectious Diseases. 17
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
