본 품은 동물 연구를 위한 구슈강 과립 및 시험관 내 실험을 위한 혈청을 함유하는 GSK 과립의 작동 용액을 준비하기 위한 상세한 프로토콜을 제공한다. 이 프로토콜은 한방 의약품의 약리학적 조사뿐만 아니라 생체 내 및 시험관 내 실험 모두에 대한 처방에 적용 할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
중국 전통 한방 의학은 폐경 후 골다공증 (POP)과 같은 많은 질병을 치료하는 대체 방법으로 역할을합니다. Gushukang (GSK) 과립, 중국에서 판매 처방, POP 치료에 뼈 보호 효과. 신체에 투여하기 전에, 하나의 표준 준비 절차가 일반적으로 필요합니다, 이는 원시 허브에서 활성 성분의 방출을 촉진하고 약리효과뿐만 아니라 치료 결과를 향상시키는 것을 목표로. 본 연구는 생체 내 및 시험관내 실험 분석에서 GSK 과립을 사용하기 위한 상세한 프로토콜을 제안한다. 저자는 먼저 생체 내 조사를 위한 과립의 동물적 적당한 복용량을 계산하기 위하여 상세한 프로토콜을 제공합니다: 계량, 용해, 저장 및 관리. 둘째, 이 문서에서는 마이크로 CT 스캐닝프로토콜과 골격 파라미터 측정에 대해 설명합니다. 샘플 전처리, 마이크로 CT 기계를 실행하기 위한 프로토콜 및 뼈 파라미터의 정량화를 평가하였다. 셋째, 혈청 함유 GSK 과립이 제조되고, 약물 함유 혈청은 시험관내 골다강 형성 및 골아세포 발생을 위해 추출된다. GSK 과립은 3일 연속적으로 쥐에게 하루에 두 번 위내 투여하였다. 혈액을 수집, 원심 분리, 비활성화, 필터링. 마지막으로, 혈청을 희석시키고 골성형술 및 골아합형성을 수행하기 위해 사용되었다. 여기에 기술된 프로토콜은 과립과 같은 한방 처방 의약품의 약리학적 조사를 위한 참고자료로 간주될 수 있다.
서론
중국 전통 의학 (한의학)은 골다공증을 치료하는 중요한 보완및 대체접근법 중 하나입니다 1,2. 물 달인은 공식 3의 기본 및가장 일반적으로 사용되는 형태입니다. 그러나 단점도 존재: 나쁜 맛, 운송에 대 한 불편, 짧은 수명 및 일관성 없는 프로토콜, 사용 뿐만 아니라 치료 효과 제한. 위의 단점을 방지하고 더 나은 효과를 추구하기 위해 과립이 개발되었으며 널리 사용되어 왔습니다4. 많은 연구가과립5,6,7에서하나 이상의 효과적인 성분의 약리학적 메커니즘을 탐구했지만, 정확한 메커니즘과 기본 약리학적 과정은 여전히 식별하기 가 어렵습니다. 이것은 하나의 과립에서 너무 많은 효과적인 성분이 동시에 유사하거나 반대 효과를 발휘 할 수 있기 때문이다4. 따라서, 체내에 전달하기 전에 과립을 준비하는 하나의 표준 프로토콜의 개발은 치료 결과에 큰 영향을 미칠 뿐만 아니라 생체 내 및 시험관내 분석법 모....
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프로토콜
모든 실험 절차는 TCM의 상하이 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인으로 수행되었다 (SZY201604005).
1. GSK 작업 솔루션의 준비 및 관리
- 마우스에 대한 GSK 과립의 동등한 복용량을 계산합니다.
- Meeh-Rubner 방정식15를기준으로 바디 표면 계산 : 바디 표면 = K x (체중 2/3)/1000, 여기서 K 값은 인간의 경우 10.6, 마우스의 경우 9.1입니다. 인체 의 체중이 70kg이라고 가정하면 인체표면 (m2) = 10.6 x (70 2/3)/1000 = 1.8m2. 마우스 본체 중량이 20 g(0.02 kg, 예를 들어, 1개월 된, 암컷, C57/BL6)을 가정한 다음 마우스 본체 표면(m2) = 9.1 x (0.022/3)/1000= 0.0067m2.
- 계산된 바디 표면을 기반으로 인간및 마우스의 바디 변환 비율을 계산합니다. 인간: 70 kg/1.8m2 = 39. 마우스: 0.02 kg/0.0067m2 = 3. GSK 과립 = 20 g/70 kg x 39....
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결과
마이크로 CT 스캐닝 결과는 OVX 마우스가 식염수 대조군마우스에 비해 상당한 뼈 손실을 보였다는 것을 나타냈다(도 1A). GSK 과립의 개입(90일)은 특히 GSKM 군에서 BMD를크게 증가시켰습니다(도 1B). BMD, BV/TV, Tb.N 및 Tb.Th 같은 뼈 구조 파라미터를 정량화했습니다. GSK 과립 치료는 증가 BMD를 주도, BV / TV, Tb.N과 Tb.Th 하지만 감소 Tb.Sp (그림 1C).
타타르산 내성 인산인산(TRAP) 염색은 대조군 마우스에 비해 OVX 마우스에서 파골세포의 수가증가하는 것을 보였다(도 2A). GSK 과.......
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토론
한 의학 제제의 과립 제형 또는 처방에 대 한 일반적인 선택 중 하나가 되고있다. GSK 과립은 임상 경험 또는 한의학 이론에 근거한 몇몇 한방 약으로 구성되고,적은 부작용으로 더 나은 치료 효력을 발휘합니다 4. 물 달인에 비해, 과립은 다음과 같은 장점이 있습니다 : 좋은 맛, 배달의 편리성, 장기 저장, 표준 프로토콜 및 일관된 치료 효과뿐만 아니라 높은 생산성. 현재, 과립은 한의학에서 가장 일반적으로 사용되는 약국 형성 중 하나입니다. 그러나, 약리 효과의 기본 메커니즘은 여전히 거의 공부. 근본적인 약리학적 인 메커니즘을 조사하기 위해 과립 준비의 중요한 단계를 결정할 필요가 있습니다.
지난 수십 년 동안, 한방 의학에서 하나 이상의 대표적인 효과적인 구성 요소는 일반적으로 그들의 구조적 선명도 로 인해 분자 분석 및 약리학 결과를 수행하는 데 사용되었습니다. 많은 조사는 한 약초에서 효과적인 구성 요소와 치료
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없다.
감사의 글
이 연구는 중국 국립 자연과학 재단(81804116, 81673991, 81770107, 81603643, 81330085), 혁신팀, 중국 과학기술부(2015RA4002 ~ WYJ)의 보조금으로 지원되었다. 혁신팀, 중국교육부(IRT1270 to WYJ), 상하이 TCM 만성질환 의료센터(2017ZZ01010 ~ WYJ), 중국 전통 의학 계획 개발을 가속화하기 위한 3년간의 조치(ZY(2018-2020-WYJ) -CCCX-3003 국가 핵심 연구 개발 프로젝트 (2018YFC1704302).
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| &알파;-MEM | Hyclone laboratories | SH30265.018 | For cell culture |
| β-Glycerophosphate | Sigma | G5422 | Osteoblastogenesis |
| Caltrate (CAL) | Wyeth | L96625 | Animal interventation |
| C57BL/6 mice | SLAC Laboratory Animal Co. Ltd. | 무작위 | Ainimal 제제 |
| Dexamethsome | Sigma | D4902 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2438 | Cell frozen |
| Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA) | Sangon Biotech | 60-00-4 | Samples treatmnet |
| Fetal bovine serum | Gibco | FL-24562 | 세포 배양 |
| Gushukang 과립 | kangcheng companyin 중국 | Z20003255 | 초본 처방전 |
| 광학 현미경 | 올림푸스 BX50 | 올림푸스 BX50 | 골판 형성을위한 이미지 |
| L-아스코르브 산 2- 인산 세퀴나그늄 판금 hyclrate | 시그마 | A8960-5G | 골 세포 형성 |
| 현미경 | 라이카 | DMI300B | 골 캐스트 및 골 세포 상상 |
| M-CSF | Peprotech | AF-300-25-10 | 골세포형성 |
| Μ icro-CT | Scanco 의학 AG& | mu; CT80 방사선 사진 현미경 촬영 | 뼈 구조적 항문 시스 |
| RANKL | Peprotech | 11682-HNCHF | 골 세포 형성 |
| Sprague Dawley | SLAC Laboratory Animal Co., Ltd. | 무작위 | 혈청 수집 |
| TRAP(Tartrate-Resistant Acid Phosphate) 키트 | Sigma-Aldrich | 387A-1KT | TRAP 염색 |
참고문헌
- Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome. Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).
- Zhao, D., et al.
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